应用于简单类诺卡氏菌的质粒及其筛选和测试方法技术

本发明专利技术构建了一些应用于简单类诺卡氏菌的质粒及其筛选和测试方法，接合本发明专利技术描述的方法可用于鉴别不同复制区在简单类诺卡氏菌中的稳定性。同时，在这些质粒上克隆入不同的生物元件可用于进一步发现和验证简单类诺卡氏菌可用的生物元件，进行适配性测试。这些质粒同时也可用于简单类诺卡氏菌中进行基因表达和合成生物学等研究。达和合成生物学等研究。达和合成生物学等研究。

【技术实现步骤摘要】
应用于简单类诺卡氏菌的质粒及其筛选和测试方法


[0001]本专利技术涉及基因改造
，具体涉及一些利用接合转移方法进行简单类诺卡氏菌转化的质粒以及在简单类诺卡氏菌中进行适配生物元器件测试的方法。

技术介绍

[0002]类诺卡氏属(Nocardioides)是丙酸杆菌亚目(Propionibacterineae)、类诺卡氏科(Nocardioidaceae)内的典型属。研究表明该属菌具有广泛的化合物合成、修饰和降解能力，在化学品合成和转化、环境修复，生物防护等方面具有较好的应用潜力。
[0003]简单节杆菌(Arthrobacter simplex)分离自土壤，是工业转化甾体激素药物及前体C1,2位脱氢的主要菌株，同时该菌亦可水解甾体激素酯，对雄烯二酮的C17位和黄体酮的C20位羰基进行还原。经过C1,2位脱氢的药物在治疗效果和副作用方面均优于该位点未脱氢的同类药物。有文献报道最早该菌曾归类为分枝杆菌(Mycobacterium globiforme)，此后有文献分别报道在甾体C1,2位脱氢转化中使用了具有不同分类学名称的菌，它们分别本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种游离型质粒pMV261
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1，其特征在于，该质粒使用pMV261质粒复制区；通过进一步在质粒上克隆入接合转移元件和筛选标记，能够在简单类诺卡氏菌种复制并被检测到。2.根据权利要求1所述的一种游离型质粒pMV261
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1，其特征在于，接合转移元件为oriT，筛选标记为apramycin。3.一种游离型质粒pMV261
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3，其特征在于，该质粒使用简单类诺卡氏菌染色体的复制区；通过进一步在质粒上克隆入接合转移元件和筛选标记，能够在简单类诺卡氏菌种复制并被检测到。4.根据权利要求3所述的一种游离型质粒pMV261
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3，其特征在于，接合转移元件为oriT，筛选标记为apramycin。5.根据权利要求4所述的一种游离型质粒pMV261
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3，其特征在于，其构建方法如下：(1)以pMV261质粒为模板，使用引物反向PCR去除分枝杆菌的复制起始区oriM，获得去除起始区的质粒片段；(2)以简单类诺卡氏菌染色体为模板，使用引物PCR扩增获得oriC区域DNA片段；(3)NdeⅠ酶切胶回收处理的oriC片段，与同样使用NdeⅠ酶切的去除oriM的pMV261质粒骨架连接，获得重组质粒pMV261
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2；(4)使用NheⅠ酶切pMV261
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2，与从pIJ773质粒上XbaⅠ酶切得到的apra+oriT片段连接，获得带有简单类诺卡氏菌染色体复制起始区的接合转移质粒pMV261
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3。6.一种整合型质粒pTNS101，其特征在于，将质粒带有诺卡氏菌IS204微型转座子系统整合酶基因tnp及相关功能序列；通过进一步在质粒上克隆入接合转移元件和筛选标记，能够通过接合转移导入简单类诺卡氏菌中，导入该质粒的简单类诺卡氏菌带有质粒抗性并被检测到质粒片段。7.根据权利要求6所述的一种整合型质粒pTNS101，其特征在于，接合转移元件为oriT，筛选标记为apramycin。8.根据权利要求7所述的一种整合型质粒pTNS101，其特征在于，其构建方法如下：(1)以带有诺卡氏菌IS204微型转座子系统的pDZY101质粒为模板，NheⅠ和EcoRⅠ双...

【专利技术属性】
技术研发人员：路志群，徐建俊，邓自发，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：