一种基于抗污染光热拭子用于有色食品基质中沙门氏菌的快速检测方法技术

本发明专利技术提供了一种基于抗污染光热拭子用于有色食品基质中沙门氏菌的快速检测方法，包括：(1)抗污染棉签拭子制备体系，(2)抗污染光热拭子检测分析体系。本发明专利技术对两性离子抗污染性能进行验证，利用光引发聚合法在棉签拭子表面接枝两性离子，对棉签拭子改性前后进行表征验证以及抗污染性能测定，在实际食品基质样本中验证了两性离子改性棉签拭子的可行性和改性后棉签拭子的抗污染特性。本发明专利技术以抗污染光热拭子为终端检测平台，金

【技术实现步骤摘要】
一种基于抗污染光热拭子用于有色食品基质中沙门氏菌的快速检测方法


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种基于抗污染光热拭子用于有色食品复杂基质中沙门氏菌的快速检测方法。

技术介绍

[0002]沙门氏菌是食源性传染病的主要原因之一，极易污染肉、蛋、奶等食品，通常当沙门氏菌只有一个菌落单位形成时，即可引起人类感染，其致病限度极低、传播力强、防控难度大，对公众健康构成严重威胁。由于平板计数法和实时聚合酶链反应的传统方法既费时又费力，因此迫切需要新的快速检测方法用于现场和在线应用。生物传感器作为一种简便、灵敏、低成本的分析手段,为食品安全快速检测特别是病原体、蛋白质、重金属及抗生素等，提供了有效的保障。
[0003]棉签拭子作为一种易获得、易改性、成本低的快速检测元件，已被广泛应用于样品采集、靶标富集和定量检测中。但是,在检测复杂样品过程中往往存在基质的干扰,导致生物传感器的检测灵敏度和结果科学性受到了影响。近年来,采用两性离子抗污染材料改性生物传感器的研究受到越来越多的关注。为了抵抗复杂样品中的基质干扰,提高传感器的检测灵敏度和特异性,保障最终检测结果的科学性和可靠性，抗污染生物传感器在快速检测领域的开发和应用显得尤为重要。迄今为止，两性离子改性的生物传感器已被用于快速检测领域，但尚未有关于两性离子改性棉签拭子检测沙门氏菌的报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是开发一种基于抗污染光热拭子用于有色食品复杂基质中沙门氏菌的快速检测方法。
[0005]为了实现本专利技术目的，设计了抗污染棉签拭子，构建抗污染光热拭子检测平台，“金
‑
钯纳米颗粒/适配体”为光热信号探针，配合激光发射器、热敏仪和智能手机的信号读取设备，实现对有色复杂食品基质中沙门氏菌的定性定量检测。
[0006]一方面，本专利技术提供一种基于抗污染光热拭子用于有色食品复杂基质中沙门氏菌的快速检测方法，包括：(1)抗污染棉签拭子制备体系，(2)抗污染光热拭子检测分析体系：
[0007]所述抗污染棉签拭子制备体系是指两性离子材料和沙门氏菌特异性适配体序列通过光引发聚合法和浸没法表面改性商用棉签；
[0008]优选地，抗污染材料聚甲基丙烯酸磺基甜菜碱(SBMA)
[0009]所述SBMA为强亲水性、强防污性的两性离子抗污染化学材料；
[0010]所述沙门氏菌特异性适配体序列用来特异性捕获沙门氏菌实现检测；
[0011]所述光引发聚合发为利用紫外辐照和光引发剂实现聚合反应；
[0012]所述浸没法为利用浸润孵育的方式实现聚合物间的物理吸附；
[0013]所述抗污染光热拭子检测分析体系包括抗污染棉签、金
‑
钯纳米颗粒/适配体以及
激光发射器、热敏仪和智能手机；
[0014]所述金
‑
钯纳米颗粒/适配体为检测体系中的信号探针；
[0015]所述信号探针为金
‑
钯纳米颗粒与适配体共价偶联的聚合物。
[0016]另一方面，本专利技术提供沙门氏菌快速检测方法用到的抗污染棉签拭子制备材料，包括，SBMA、适配体和商用棉签；
[0017]所述SBMA与棉签拭子由紫外辐照和光引发剂实现光引发聚合；
[0018]优选地，紫外辐照波长365nm、紫外辐照时间20min；
[0019]优选地，光引发剂Irgacure2595；
[0020]所述适配体与棉签拭子由浸没法实现物理吸附；
[0021]优选地，浸没孵育时间4h；
[0022]优选地，适配体浓度为10nM。
[0023]另一方面，本专利技术提供沙门氏菌快速检测方法用到的光热信号探针，包括，金
‑
钯纳米颗粒纳米粒子和沙门氏菌特异性适配体；
[0024]所述金
‑
钯纳米颗粒平均粒径约为35nm，呈爆米花状，用于沙门氏菌特异性适配体连接；
[0025]优选地，沙门氏菌特异性适配体序列为SAT
‑
SH；
[0026]优选地，适配体浓度为100nM；
[0027]优选地，冷冻法偶联金
‑
钯纳米颗粒纳米颗粒和适配体。
[0028]另一方面，本专利技术提供上述沙门氏菌快速检测方法的检测条件：
[0029]抗污染棉签在鸡蛋、番茄中的孵育时间为10min，蒸馏水清洗两次；
[0030]抗污染棉签在金
‑
钯纳米颗粒/适配体溶液中孵育10min，蒸馏水清洗两次；
[0031]热敏仪检测分析过程包括：将激光发射器对准棉签拭子头部，利用808nm的激光激发金
‑
钯纳米颗粒纳米颗粒60s，使棉签拭子产热，所产生的温度变化利用热敏仪以及智能手机读取数据。
[0032]另一方面，本专利技术提供了一种利用前述检测方法对沙门氏菌进行定量检测的方法，包括如下步骤：
[0033]SI：制作标准曲线：
[0034]将沙门氏菌原液10倍梯度稀释，构建具有不同沙门氏菌浓度的沙门氏菌
‑
信号探针结合体系，结合抗污染光热拭子检测分析体系与前述检测步骤相同；
[0035]以沙门氏菌浓度的对数为横坐标，阳性样品激光激发棉签拭子后的温度值减去激光激发前的温度值为纵坐标，绘制标准曲线；
[0036]SII：按照前述检测方法对待测样品进行检测，将获得的待测样品的温度变化值代入标准曲线，计算得到待测样品中沙门氏菌的含量，实现对沙门氏菌的定量检测。
[0037]SIII：实验中用到的核酸序列为：
[0038]TATGGCGGCGTCACCCGACGGGGACTTGACATTATGACAG
‑
/NH2/(SAT
‑
NH2)
[0039]TATGGCGGCGTCACCCGACGGGGACTTGACATTATGACAG
‑
/SH/(SAT
‑
SH)
[0040]SIIII：确定线性范围为102～107CFU/mL，y＝1.771x+10.251，R2＝0.99376，检测限为13.2CFU/mL，从而可实现对沙门氏菌的定量检测。
[0041]另一方面，本专利技术还提供与上述方法配套的检测拭子。
[0042]包括：(1)抗污染棉签拭子制备体系，(2)抗污染光热拭子检测分析体系
[0043]所述抗污染棉签拭子制备体系是指两性离子材料和沙门氏菌特异性适配体序列通过光引发聚合法和浸没法表面改性商用棉签；
[0044]优选地，抗污染材料聚甲基丙烯酸磺基甜菜碱(SBMA)；
[0045]进一步优选的，抗污染材料能够抵御鸡蛋、番茄中的大分子蛋白污染物；
[0046]进一步优选的，光引发聚合法能简单快速地改性棉签拭子；
[0047]进一步优选的，抗污染检测棉签能够提升检测过程的光热信号；
[0048]优选地，抗污染光热本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于抗污染光热拭子用于食品复杂基质中沙门氏菌的快速检测方法，其特征在于，包括：(1)抗污染棉签拭子制备体系，(2)抗污染光热拭子检测分析体系：所述抗污染棉签拭子制备体系是指两性离子材料聚甲基丙烯酸磺基甜菜碱和沙门氏菌特异性适配体序列通过光引发聚合法和浸没法表面改性棉签；所述抗污染光热拭子检测分析体系包括抗污染棉签拭子、金
‑
钯纳米颗粒/适配体，优选还包括激光发射器、热敏仪和智能手机；所述金
‑
钯纳米颗粒/适配体为检测体系中的信号探针；所述信号探针为金
‑
钯纳米颗粒与适配体共价偶联的聚合物。2.如权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，所述光引发聚合法为利用紫外辐照和光引发剂实现聚合反应；所述浸没法为利用浸润孵育的方式实现聚合物间的物理吸附。3.如权利要求2所述的快速检测方法，其特征在于，紫外辐照波长365nm、紫外辐照时间20min；光引发剂为Irgacure2595。4.根据权利要求1
‑
3任一所述的快速检测方法，其特征在于，所述沙门氏菌特异性适配体序列如SAT
‑
NH2、SAT
‑
SH所示；SAT序列为：5
’‑
TATGGCGGCGTCACCCGACGGGGACTTGACATTATGACAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：程楠，黄荟娴，黄昆仑，罗云波，贺晓云，庞晓旭，许文涛，刘清亮，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：