一种光动力治疗细菌性眼内炎的新型抗菌疗法制造技术

本发明专利技术公开了一种光动力治疗细菌性眼内炎的新型抗菌疗法，包括：选取TTPy分子；采用DMSO对TTPy溶解得5mM的母液；采用PBS溶液稀释母液；将稀释后的母液注射入大鼠眼内；对注射部位进行一定条件的光照，实现有效的体内抗菌。本发明专利技术涉及应用于细菌性眼内炎的光动力治疗探索技术领域，具体是提供了一种可以避免潜在的细菌耐药性问题，同时也能解决传统光敏剂聚集荧光淬灭的缺点，通过较低的给药浓度即可达到良好的杀菌效果，且可实现对视网膜的保护和体内的有效抗菌，具体是一种成功利用AIEgens进行光动力抗菌研究，在细胞及动物水平验证了TTPy的安全性和有效性，可以为相似抗菌应用奠定基础的应用。菌应用奠定基础的应用。菌应用奠定基础的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种光动力治疗细菌性眼内炎的新型抗菌疗法


[0001]本专利技术涉及应用于细菌性眼内炎的光动力治疗探索
，具体是指一种光动力治疗细菌性眼内炎的新型抗菌疗法。

技术介绍

[0002]细菌性眼内炎(bacterial endophthalmitis，BE)是严重的眼部感染，病情发展迅速，属于临床和眼科急症。虽然白内障手术后眼内炎的发生率约为0.1％，但若得不到及时有效的治疗，会导致不可逆的视力丧失，甚至眼球丧失。目前，BE主要采用经验性玻璃体内注射万古霉素联合其他抗生素治疗，严重者需进行玻璃体切除术。然而，近年来滥用抗生素导致病原体频繁产生耐药性，甚至出现超级细菌。而且，抗生素对眼内视网膜组织有一定的毒性作用，可能导致出血性闭塞性视网膜血管炎，一旦发生，患者视力极差。此外，BE治疗住院时间长，治疗效果难以保证，患者需要承担高额的时间和金钱代价。因此，研究BE的替代抗菌疗法来解决上述问题是迫切且必要的。
[0003]光动力疗法(photodynamic therapy，PDT)在耐药菌感染的治疗中显示出巨大的潜力。与传统疗法相比，PDT通过光敏剂(photosensitizers，PSs)光照后产生活性氧(reactive oxygen species，ROS)来杀灭病原体，具有低细胞毒性、低耐药性和时空精确性等优势。更重要的是，由于眼球的透光性良好，PDT非常适合用于眼部感染治疗。然而，大多数传统的PSs在聚集态存在荧光猝灭问题，极大限制了其在临床的应用。

技术实现思路

[0004]针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种可以避免潜在的细菌耐药性问题，同时也能解决传统光敏剂聚集荧光淬灭的缺点，通过较低的给药浓度即可达到良好的杀菌效果，且可实现对视网膜的保护和体内的有效抗菌，效果更好的光动力治疗细菌性眼内炎的新型抗菌疗法，具体是一种成功利用AIEgens进行光动力抗菌研究，在细胞及动物水平验证了TTPy的安全性和有效性，可以为相似抗菌应用奠定基础的应用。
[0005]本专利技术采取的技术方案如下：本专利技术一种光动力治疗细菌性眼内炎的新型抗菌疗法，包括如下步骤：
[0006]步骤一：选取固体的TTPy分子粉末；
[0007]步骤二：采用DMSO对TTPy分子粉末进行溶解得到浓度为5mM的母液；
[0008]步骤三：采用PBS溶液稀释母液；
[0009]步骤四：将稀释后的母液注射入大鼠眼内；
[0010]步骤五：对注射部位进行一定条件的光照，通过快速高效产生ROS，在保证无细胞毒性的前提下，实现有效的体内抗菌。
[0011]进一步地，所述步骤一中，TTPy分子为采用携带有正电荷和中等疏水性的TTPy分子，对TTPy分子进行合成与提纯处理，在静电与疏水相互作用的驱动下，可以实现对细菌与正常细胞的快速识别。
[0012]优选地，所述步骤五中一定条件的光照为在光照功率为20mW/cm2的白光下照射15min。
[0013]作为优选方案，所述新型抗菌疗法在单纯的玻璃体腔注射TTPy时不对正常眼球造成影响。且在实际应用中，TTPy的光动力抗菌导致早期的固有免疫应答，中性粒细胞更早地募集到玻璃体腔中的感染部位，不仅限制了感染的传播，更保护了视网膜免受与炎症相关的组织损伤。
[0014]本方案一种光动力治疗细菌性眼内炎的新型抗菌疗法，采用上述方案本专利技术取得的有益效果如下：
[0015]1、采用携带有正电荷和中等疏水性的AIEgens(TTPy)，在静电和疏水相互作用的驱动下，实现对细菌和正常细胞的快速识别。
[0016]2、TTPy在一定的光照条件下快速高效产生ROS、选择性杀灭金黄色葡萄球菌(S.aureus)，在保证无细胞毒性的前提下，实现有效的体内抗菌，对眼部正常细胞无明显毒性，表明TTPy的高效抗菌潜力，克服了细菌耐药性的潜在问题。
[0017]3、将TTPy用于探索治疗金黄色葡萄球菌感染的BE，并与临床上常用的商用光敏剂Rose Bengal对比，实现视网膜保护和体内有效抗菌，为耐药性和难治性BE的治疗提供新的策略。
[0018]4、TTPy的高效杀菌触发了早期固有免疫反应，更早地募集中性粒细胞到玻璃体腔的感染部位，限制了感染的扩散，同时抑制了暴发性炎症的发生，保护视网膜免受炎症相关的组织损伤。
[0019]5、TTPy在有效杀菌的同时可以更好的保护视网膜结构，极大限度的保留了视觉功能。
附图说明
[0020]图1为实施例1中紫外灯下荧光颜色变化与PL光谱示意图；
[0021]图2为实施例1中ROS生成测定示意图；
[0022]图3为实施例1中Zeta电位测定的示意图；
[0023]图4为实施例2中CCK
‑
8检测ARPE
‑
19细胞活性图；
[0024]图5为实施例2中CCK
‑
8检测HCE
‑
T细胞活性图；
[0025]图6为实施例2中Calcein AM/PI细胞毒性检测示意图；(比例尺：100μm)
[0026]图7为实施例2细胞凋亡率及凋亡蛋白检测中ARPE
‑
19细胞Bcl
‑
2和Bax的表达；
[0027]图8为实施例2细胞凋亡率及凋亡蛋白检测中Bcl
‑
2的灰度值分析图；
[0028]图9为实施例2细胞凋亡率及凋亡蛋白检测中Bax的灰度值分析图；
[0029]图10为实施例2细胞凋亡率及凋亡蛋白检测中流式细胞凋亡示意图；
[0030]图11为实施例2细胞凋亡率及凋亡蛋白检测中ARPE
‑
19细胞凋亡率统计分析图；
[0031]图12为实施例2中大鼠的重要脏器(心、肝、脾、肺、肾)病理学检测染色图；
[0032]图13为实施例2中大鼠血清电解质水平统计分析图；
[0033]图14为实施例2中大鼠眼球结构及形态变化图；
[0034]图15为实施例3中不同的光照功率和时间下在琼脂板铺板的杀菌效果图示意；
[0035]图16为实施例3中20mW/cm2功率下、0.05μM TTPy在光照10min时的S.aureus菌落
计数统计图；
[0036]图17为实施例3中20mW/cm2功率下、0.05μM TTPy在光照15min时的S.aureus菌落计数统计图；
[0037]图18为实施例3中电镜下S.aureus的形态变化图；
[0038]图19为实施例3中眼表照相示意图；
[0039]图20为实施例3中临床炎症评分图；
[0040]图21为实施例3中房水蛋白浓度的测定图；
[0041]图22为实施例3中玻璃体病理图；
[0042]图23为实施例3中视网膜病理图；
[0043]图24为实施例3中通过CXCL1的ELISA检测玻璃体腔内四种眼内炎常见因子的含量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种光动力治疗细菌性眼内炎的新型抗菌疗法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：选取聚集诱导发光分子作为基料；步骤二：采用DMSO对聚集诱导发光分子进行溶解并得到浓度为5mM的母液；步骤三：采用PBS溶液稀释母液；步骤四：将稀释后的母液注射入大鼠眼内；步骤五：对注射部位进行一定条件的光照，通过快速高效产生ROS，在保证无细胞毒性的前提下，实现有效的体内抗菌。2.根据权利要求1所述的一种光动力治疗细菌性眼内炎的新型抗菌疗法，其特征在于：所述步骤一中，所述聚集诱导发光分子为红棕色的固态TTPy分子，且TTPy分子为采用携带有正电荷和中等疏水性的TTPy分子。3.根据权利要求1所述的一种光动力治疗细菌性眼内炎的新型抗菌疗法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭琛，于靖，李亭亭，吴岩，蔡雯婷，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，
类型：发明
国别省市：