高压均质和酶解法联用提取猴头菇多糖的方法技术

本发明专利技术属于中药技术领域，具体涉及一种高压均质和酶解法联用提取猴头菇多糖的方法，包括以下步骤：(1)取一定量干燥猴头菇子，粉碎，过筛，加入蒸馏水搅拌均匀，加入复合酶，用磷酸盐缓冲液调节pH。(2)将溶液倒入高压均质设备的容器内进行高压均质提取。(3)提取结束将均质机的压力升高终止酶解反应，高压灭酶活，提取液经离心机离心后取上清液，旋转浓缩，加乙醇，搅拌后低温静置24h，离心，取沉淀真空冷冻干燥得猴头菇多糖提取物。本发明专利技术将高压均质技术与酶解技术联用，大大增加提取效率，同时以压力控制酶解反应，减少提取步骤，降低能耗，有利于工业化生产。利于工业化生产。利于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
高压均质和酶解法联用提取猴头菇多糖的方法


[0001]本专利技术属于中药
，尤其涉及一种高压均质和酶解法联用提取猴头菇多糖的方法。

技术介绍

[0002]猴头菇(Hericium erinaceus)是一种常见于阔叶树干断面或树洞中的大型肉质菌,成熟后变为黄棕色,呈毛茸状,极似毛猴的脑袋,是一种名贵的药食同源真菌。大量研究结果显示,猴头菇提取物营养丰富,功效显著,因而可成为各类保健品、功能性食品的添加原料,猴头菇化学成分众多,其中多糖被认为是猴头菇具有多种药理活性的物质基础之一。猴头菇多糖具有抗氧化、保护消化道黏膜、免疫调节等功能。猴头菇多糖主要是由葡萄糖、甘露糖和半乳糖等重要成分构成的葡聚糖，是β
‑
1,3键连接的主链和β
‑
1,6键连接的支链构成的基本结构。在医药和保健食品领域有广泛应用,猴头菇多糖的提取方法具有重要意义。
[0003]近年来，提取猴头菇多糖主要通过热水浸提法、酶解法、微波提取法、超声波提取法、微波协同复合酶法等方法。传统热水浸提法耗时长且提取率较低，微波提取的发挥热效应作用提高多糖的提取，但热水浸提和微波提取多糖均因高温条件而对猴头菇多糖造成损害。而超声波由于发挥其强烈的空化和搅拌作用等可以有效加速猴头菇多糖的多糖溶于溶剂中，但其只能对猴头菇粉的表面发挥作用，对其粉末内部多糖不能起到作用。酶解法提取温度低，能够防止猴头菇多糖的结构被长时间的高温作用毁坏，若酶解法与其他低温高效的提取方法结合将大大提高猴头菇多糖的提取率。
[0004]酶技术是近年来广泛应用到有效成分提取的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可以降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。同时，酶法提取可催化多糖分子内糖苷键断裂，降低多糖分子质量和分子黏度，提高多糖提取率和多糖活性利用率，同时缩短提取时间，降低提取成本。由于酶制剂的安全，高效，被广泛应用于食用菌的功能活性物质的提取。酶解法是多糖降解的一种常见方法，主要通过改变分子的结构特征来提高其生物活性，具有专一性强、高效性、降解条件温和等优点。
[0005]高压均质是利用柱塞泵为动力传递和输送液体物料的管道，柱塞泵吸入液体物料后并对液体物料加压，在柱塞作用下液体物料以高压低流速的状态进入压力可调节的均质阀中，液体物料在高压的作用下迅速通过特定宽度的均质阀缝隙，瞬间失压的液体物料以极高的流速(1000～1500m/s)碰撞在撞击环上，产生了剪切、空穴和撞击等机械力作用。
[0006]高压均质(High Pressure Homogenization，HPH)通过高频振荡、高速剪切、空穴、瞬时高压和瞬时低压等综合效应，将液体中颗粒粉碎至平均直径<1μm,极大地增加了溶剂的穿透能力；同时，高压均质处理能够破坏细胞壁的结构，减少溶质扩散的阻力，从而加速可溶物的渗透和扩散，提高了目标产物的得率。高压均质的高速剪切可以使多糖的糖苷键断裂，降低多糖分子质量，提高多糖提取率和利用率。在压力范围80MPa到110MPa之间，高压均质压力对酶的活性影响不显著。
[0007]首先，与传统的多糖提取相比，HPH集超声、超高压、回流提取等效果于一体，能更
高效的提取多糖；并且HPH设备简单、耗能低、用时短的优点。同时，HPH是一种非加热型的技术，工作温度低，有效避免因为热反应造成有效成分的结构变性、降解；并且仪器与外界的热交换作用良好，能够维持容器内温度的稳定，为酶法提取猴头菇多糖创造良好的反应条件。高压均质技术
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酶解法联用能协同提高猴头菇多糖的提取效率。目前还未见高压均质技术
‑
酶解法联用提取猴头菇多糖的相关报道。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，适应现实需要，提供一种高压均质和酶解法联用提取猴头菇多糖的方法，采用本专利技术提取工艺能够获得高提取率猴头菇多糖，且该工艺简便可行，为其相关制剂开发和应用奠定了基础。
[0009]为了实现本专利技术的目的，本专利技术所采用的技术方案为：
[0010]本专利技术提供一种高压均质和酶解法联用提取猴头菇多糖的方法，包括以下步骤：
[0011]步骤1)：取干燥的猴头菇子，粉碎，过筛(80目)，加入蒸馏水，搅拌均匀，加入复合酶，用磷酸盐缓冲液调节pH至4
±
0.5，得溶液A；
[0012]步骤2)：将溶液A倒入高压均质设备的容器内进行高压均质提取，均质至少一次；
[0013]步骤3)：将均质机的压力升高后终止酶解反应，高压灭酶活，提取液经离心机离心后取上清液，旋转浓缩，加入乙醇，低温静置，离心，取沉淀，真空冷冻干燥得猴头菇多糖提取物。
[0014]步骤1)中，所述猴头菇子与蒸馏水的料液比为：W:V＝1:5
‑
1:40，优选为1:10
‑
1:20。
[0015]步骤1)中，所述复合酶为纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶构成的混合物，按重量计，复合酶为纤维素酶：果胶酶：木瓜蛋白酶＝2：1：1；所述纤维素酶的酶活力为10000
‑
20000U/g，果胶酶的酶活力为10000
‑
20000U/g，木瓜蛋白酶的酶活力为80000
‑
100000U/g。
[0016]步骤1)中，加入复合酶的量为猴头菇子和蒸馏水总质量的1
‑
10％，优选为4
‑
5％。
[0017]步骤2)中，所述高压均质设备的均质压力为40
‑
400MPa，优选为80
‑
120MPa。
[0018]步骤2)中，高压均质提取时间为20
‑
120min，优选为30
‑
60min。
[0019]步骤2)中，高压均质提取时的提取温度为20
‑
60℃，优选为35
‑
40℃。
[0020]步骤2)中，均质1
‑
5次，优选为2
‑
3次。
[0021]步骤3)中，将均质机的压力升高到200
‑
400MPa后终止酶解反应，优选为270
‑
300MPa。
[0022]步骤3)中，所述高压灭酶活时间为5
‑
60min，优选为10
‑
20min。
[0023]步骤3)中，加入乙醇的量为上清液浓缩后体积的3倍，所述乙醇的浓度为95％；
[0024]步骤3)中，搅拌后低温静置24h。
[0025]本专利技术的有益效果在于：
[0026](1)本专利技术采用高压均质技术和酶解法联用提取猴头菇多糖，工艺操作简单，溶剂用量少，效率高，提取时间短，大大提高了猴头菇多糖的提取效率；
[0027](2)本专利技术方法提取条件温和，减少了高温灭酶活时对多糖的损失，且采用高压均质技术和酶解法使多糖的糖苷键断裂，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高压均质和酶解法联用提取猴头菇多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)：取干燥的猴头菇子，粉碎，过筛，加入蒸馏水，搅拌均匀，加入复合酶，用磷酸盐缓冲液调节pH至4
±
0.5，得溶液A；步骤2)：将溶液A倒入高压均质设备的容器内进行高压均质提取，均质至少一次；步骤3)：将均质机的压力升高后终止酶解反应，高压灭酶活，提取液经离心机离心后取上清液，旋转浓缩，加入乙醇，低温静置，离心，取沉淀，真空冷冻干燥得猴头菇多糖提取物。2.如权利要求1所述高压均质和酶解法联用提取猴头菇多糖的方法，其特征在于：步骤1)中，所述猴头菇子与蒸馏水的料液比为：W:V＝1:5
‑
1:40。步骤1)中，所述复合酶为纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶构成的混合物，按重量计，复合酶为纤维素酶：果胶酶：木瓜蛋白酶＝2：1：1；所述纤维素酶的酶活力为10000
‑
20000U/g，果胶酶的酶活力为10000
‑
20000U/g，木瓜蛋白酶的酶活力为80000
‑
100000U/g。3.如权利要求2所述高压均质和酶解法联用提取猴头菇多糖的方法，其特征在于：步骤1)中，加入复合酶的量为猴头菇...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥彦琪，徐子金，叶锡勇，叶颖俊，刘建明，陈慧，
申请(专利权)人：江西医学高等专科学校，
类型：发明
国别省市：