一种皮肤抗皱多肽Cj2a2、制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及多肽合成，为了解决蜘蛛多肽应用时的诸多缺点，提供了一种皮肤抗皱多肽Cj2a2，该Cj2a2为一种含三对二硫键的紧密折叠小肽，其氨基酸全序列的一级结构为：N

【技术实现步骤摘要】
一种皮肤抗皱多肽Cj2a2、制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及多肽合成的
，具体而言，涉及一种皮肤抗皱多肽Cj2a2、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]随着经济社会的发展和生活水平的提高，大众对健康服务的需求日益增加，其中医美方向的消费投入势头强劲。目前医美行业广泛用于皮肤抗皱的是肉毒杆菌(Botox)，通过阻断神经与肌肉之间的信号传递，减少肌肉牵拉而引起的动态表情纹。然而，并非所有人在注射Botox后均可达到除皱的效果，同时还可能伴有面部肌肉麻痹无力，肌肉萎缩，吞咽困难等不良反应。
[0003]蜘蛛毒液是极其复杂的化学混合物，其中最为丰富的是肽类。是极具潜力的开发新型药理学工具和新型药物的活性分子资源库。大部分蜘蛛毒素作用于细胞膜上的各种电压门控离子通道或配体门控通道，因此它们是神经生物学研究的重要分子探针，也是发展新型药物的先导分子。
[0004]敬钊缨毛蛛毒素(Jingzhaotoxin,JZTX)是从我国珍稀蜘蛛敬钊缨毛蛛(Chilobrachys guangxiensis)粗毒中纯化到的一种新型肽类神经毒素。其中JZTX
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V(β
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Theraphotoxin
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Cj2a)是一种作用于肌肉钠通道Nav1.4的抑制剂。通过阻断电压门控钠通道的电流，进而抑制动作电位的产生。基于JZTX
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V在骨骼肌钠通道Nav1.4上的显著的效果，可以推断这类多肽可以提供非常强效的肌肉松弛作用，即提供迅速即时的抗皱效果。
[0005]尽管这类蜘蛛多肽可以有效抑制肌肉钠通道Nav1.4，具备除皱的应用潜力。但是他们用于药品、化妆品等产品时都还有诸多缺点，特别是：
[0006]1、对骨骼肌钠通道Nav1.4的过度抑制导致面部肌肉僵硬瘫痪；
[0007]2、对于骨骼肌、心肌钠、神经元钠通道的抑制造成的正常膜电信号的紊乱，产生严重不良反应。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种皮肤抗皱多肽Cj2a2，其在保持较强皮肤抗皱功能的同时，显著降低了对心肌钠通道，脑钠通道抑制的风险。
[0009]本专利技术的实施例通过以下技术方案实现：本专利技术提供了一种皮肤抗皱多肽Cj2a2(其三维结构如附图1所示)，该Cj2a2为一种含三对二硫键的紧密折叠小肽，其氨基酸全序列的一级结构为：N
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Tyr
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Cys
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Gln
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Lys
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Trp
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Met
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Trp
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Thr
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Cys
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Asp
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Ser
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Lys
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Arg
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Ala
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Cys
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Cys
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Glu
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Gly
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Leu
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Arg
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Cys
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Lys
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Leu
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Trp
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Cys
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Arg
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Lys
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Ile
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Ile
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C，其序列长度为29个氨基酸，等电点9.13，相对分子质量3391.15Da，其为有三对二硫键的可折叠多肽，具有紧密ICK模体，其中I
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IV和II
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V两对二硫键和中间的多肽主链形成一个大环，III
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VI二硫键从环中穿过，在空间上形成一个类似于“结”的拓扑结构。
[0010]其设计依据为：在副作用较高的蜘蛛毒素多肽Cj2a基础上，使用结构模拟软件
Rosetta模拟Cj2a2和骨骼肌钠通道Nav1.4的三维结构，分析高亲和力的复合物模型，得到了多对Cj2a2多肽和Nav1.4通道关键氨基酸残基的直接相互作用，这些氨基酸直接相互作用是Cj2a在钠通道上高亲和力的基础；通过对Cj2a上带电氨基酸残基和疏水氨基酸残基进行突变，可以适度弱化Cj2a对钠通道的阻滞作用，同时兼顾在酸性和碱性条件下保持稳定；因此，本申请在野生型Cj2a上选择和骨骼肌Nav1.4通道有相互作用的第5位色氨酸W改造为丙氨酸A，第22位赖氨酸K改造为甘氨酸G；同时为了保持等电点稳定和靶点专一，将第17位谷氨酸E改造为谷氨酰胺Q，第20位赖氨酸R改造为精氨酸K，第28位异亮氨酸I改造为亮氨酸L，进而得到设计改造的多肽Cj2a2(YCQKAMWTCDSKRACCQGLKCGLWCRKLI)。
[0011]本专利技术还提供了上述皮肤抗皱多肽Cj2a2的制备方法，包括如下步骤：
[0012](1)根据设计的氨基酸序列(N
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Tyr
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Cys
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Gln
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Lys
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Trp
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Met
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Trp
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Thr
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Cys
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Asp
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Ser
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Lys
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Arg
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Ala
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Cys
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Cys
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Glu
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Gly
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Leu
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Arg
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Cys
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Lys
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Leu
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Trp
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Cys
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Arg
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Lys
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Ile
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Ile
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C)，使用固相合成法合成得到粗多肽；
[0013](2)对步骤(1)合成得到的粗多肽采用谷胱甘肽氧化还原法复性；
[0014](3)将步骤(2)所得到的复性液通过HPLC反相柱层析脱盐纯化，鉴定其纯度，直到多肽的纯度不低于95％。
[0015]本专利技术还提供了将上述的皮肤抗皱多肽Cj2a2应用于药品或者化妆品。
[0016]本专利技术实施例的技术方案至少具有如下优点和有益效果：本专利技术的皮肤抗皱多肽Cj2a2，兼具稳定、生产成本低等特点、在保持较强皮肤抗皱功能的同时，显著降低了对心肌钠通道，脑钠通道抑制的风险。
附图说明
[0017]图1为本专利技术提供的皮肤抗皱多肽Cj2a2的三维结构；
[0018]图2为本专利技术实验例2提供的野生型和突变型多肽的功能检测。
具体实施方式
[0019]实施例
[0020]本实施例提供了一种皮肤抗皱多肽Cj2a2及其制备方法，包括如下步骤：
[0021](1)根据设计的氨基酸序列：N
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Tyr
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Cys
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种皮肤抗皱多肽Cj2a2，其特征在于，该Cj2a2为一种含三对二硫键的紧密折叠小肽，其氨基酸全序列的一级结构为：N
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Tyr
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Cys
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Gln
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Lys
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Trp
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Met
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Trp
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Thr
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Cys
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Asp
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Ser
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Lys
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Arg
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Ala
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Cys
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Cys
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Glu
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Gly
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Leu
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Arg
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Cys
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Lys
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Leu
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【专利技术属性】
技术研发人员：何阳，余杰，代焕梅，杨甍俣，范文素，李琼芽，刘建兰，刘米卉，
申请(专利权)人：四川丽妍工坊生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：