一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测制造技术

本发明专利技术公开了一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测，包括以下步骤：（1）弹簧针针刺机体末稍顺畅采血；（2）置于CTAD抗凝塑料尖点管；（3）抗Xa稀释液1:10稀释样本；（4）稀释样本加入扩散层过滤血细胞；（5）过滤后成为稀释抗凝血浆；（6）渗透至反应层的血浆中待测肝素类药物——低分子肝素LMWH成分通过中层抑制中和含过量Xa之中部分的Xa层析后；（7）含剩余Xa血浆通过下层时与含PNA发色底物的显色层发生稳定的显色反应；（8）在405nm和600nm波长处以反射光法测试吸光度差值dOD。该干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测使用全新的检测方法，可以更加精准的测算出肝素类抗凝药物案或物质的活性含量。或物质的活性含量。

【技术实现步骤摘要】
一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测


[0001]本专利技术涉及Xa抑制剂药物活性检测
，具体为一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测。

技术介绍

[0002]肝素类抗凝药物或物质及其他Xa抑制剂药物，如：普通肝素UFH、低分子肝素LMWH、磺达肝癸钠ARIXTRA、利伐沙班RIVA、阿哌沙班APIX等都含有共同的抑制Xa活性的抗凝作用，不同的仅是不同抗凝药物所含抗Xa活性含量或浓度不同，抗Xa活性检测通常采用的是竞争抑制的发色底物法，即：摄注体内的肝素类抗凝药物或物质（含未知的抗Xa活性含量）通过采血取样枸橼酸钠抗凝血浆在体外和人工配制的Xa（含已知过量定量的Xa活性含量）发生中和抑制反应，反应剩余下来的过量Xa与发色底物对硝基苯胺PNA产生黄色显色反应，显色越深表示肝素类抗凝药物或物质活性含量越低，显色越浅表示肝素类抗凝药物或物质活性含量越高，与溯源性参考物作比较就可以定量检测其抗Xa活性含量。
[0003]目前市面上所使用检测方法通过将Xa与发色底物对硝基苯胺PNA产生黄色显色反应来判断肝素类抗凝药物案或物质的活性含量，这种检测方法无法确保检测结果的精准程度，所以我们提出了一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测，以便于解决上述中提出的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测，以解决上述
技术介绍
提出的目前市面上所使用检测方法通过将Xa与发色底物对硝基苯胺PNA产生黄色显色反应来判断肝素类抗凝药物案或物质的活性含量，这种检测方法无法确保检测结果的精准程度的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测，包括以下步骤：（1）弹簧针针刺机体末稍顺畅采血；（2）置于CTAD抗凝塑料尖点管；（3）抗Xa稀释液1:10稀释样本；（4）稀释样本加入扩散层过滤血细胞；（5）过滤后成为稀释抗凝血浆；（6）渗透至反应层的血浆中待测肝素类药物——低分子肝素LMWH成分通过中层抑制中和含过量Xa之中部分的Xa层析后；（7）含剩余Xa血浆通过下层时与含PNA发色底物的显色层发生稳定的显色反应；（8）在405nm和600nm波长处以反射光法测试吸光度差值dOD；（9）与同样方法不同标准浓度的标准品测试形成的LMWH标准曲线作比较，相同批号试剂可以做一次定标（或制成固定标准比色条定标）并存储于计算机；
（10）经仪器自动计算获取抗Xa活性含量
→
通过高低质控品测试在质控范围内；（11）可以检测临床样本。
[0006]优选的，所述检测过程中所使用的检测仪机型选用康上干式生化分析仪状，检测过程中所使用的滤光片选用405nm与600nm双波长。
[0007]优选的，所述检测过程中采集末梢全血时的采集量为50ul，且整个检测过程不超过3分钟。
[0008]优选的，所述检测过程中所使用的试剂空白OD≥2.0A；检测限：LMWH0.011IU/ml；UFH0.011IU/ml；RIVA2.365ng/ml，检测准确度X≤[X
±
2SD]； CV=(X
‑
T)/T≤
│±
15%
│
。
[0009]优选的，所述检测时的批内重复性≤
│±
5%
│
，日间批内重复性CV≤
│±
8%
│
，批间差CV≤
│±
10%
│
。
[0010]优选的，所述检测过程中各个成分的线性范围低分子肝素LMWH在0.1~1.8IU/ml范围内，其中0.1~0.3IU/ml绝对偏差B≤
│±
0.05
│
IU/ml，0.3~1.8IU/ml相对偏差CV≤
│±
15%
│
,相关系数r≤0.9900；普通肝素UFH0.1~16IU/ml，其中0.1~0.3IU/ml绝对偏差B≤
│±
0.05
│
IU/ml，0.3~1.6IU/ml相对偏差CV≤
│±
15%
│
，相关系数r≤0.9900；利伐沙班RIVA在10~344ng/ml范围内，其中10.0~64.5ng/ml绝对偏差B≤
│±
10.75
│
ng/ml，64.5~344ng/ml相对偏差CV≤
│±
15%
│
，相关系数r≤0.9900。
[0011]优选的，所述生物参考区间LMWH≤0.1U/ml；UFH≤0.1U/ml；RIVA≤21.5ng/ml，检测过程中最大的稀释倍数为1：3（混合人血浆）。
[0012]优选的，所述整个检测过程总误差TEA为20%，允许总误差1/2TEA为10%，不同方法学（如:末梢手指全血和静脉抗凝血之间）比对相对偏差CV≤20%；不同仪器不同试剂比对相对偏差CV≤20%；相同仪器不同试剂比对相对偏差CV≤15%；相同试剂不同仪器比对相对偏差CV≤15%。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：该干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测使用全新的检测方法，通过干化学试纸条树脂纤维上层的定量稀释全血滤过血浆功能，进入中间层与过量定量Xa发生中和抑制反应，稀释血浆携带反应剩余Xa渗透前移至发色底物定位区域，在规定时间内与对硝基苯胺PNA产生黄色显色反应，当405nm反射光照射发色窗（显色区域）时，由底层的深色反光板反射入射光，由干化学检测仪器光敏器接受感应反射光并转化为电信号进行甄别，同时以600nm反射光消除干扰噪声信号，与校准品测试作比较，仪器自动生成和记忆校准曲线（也可以制成标准试纸条），计算得出定量抗Xa活性含量，使该检测方法可以更加精准的测算出肝素类抗凝药物案或物质的活性含量。
具体实施方式
[0014]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0015]实施例一一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测，包括以下步骤：
（1）弹簧针针刺机体末稍顺畅采血；（2）置于CTAD抗凝塑料尖点管；（3）抗Xa稀释液1:10稀释样本；（4）稀释样本加入扩散层过滤血细胞；（5）过滤后成为稀释抗凝血浆；（6）渗透至反应层的血浆中待测肝素类药物——低分子肝素LMWH成分通过中层抑制中和含过量Xa之中部分的Xa层析后；（7）含剩余Xa血浆通过下层时与含PNA发色底物的显色层发生稳定的显色反应；（8）在405nm和600nm波长处以反射光法测试吸光度差值dOD；（9）与同样方法不同标准浓度的标准品测试形成的LMWH标准曲线作比较，相同批号试剂可以做一次定标（或制成固定标准比色条定标）并存储于计本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测，其特征在于，包括以下步骤：（1）弹簧针针刺机体末稍顺畅采血；（2）置于CTAD抗凝塑料尖点管；（3）抗Xa稀释液1:10稀释样本；（4）稀释样本加入扩散层过滤血细胞；（5）过滤后成为稀释抗凝血浆；（6）渗透至反应层的血浆中待测肝素类药物——低分子肝素LMWH成分通过中层抑制中和含过量Xa之中部分的Xa层析后；（7）含剩余Xa血浆通过下层时与含PNA发色底物的显色层发生稳定的显色反应；（8）在405nm和600nm波长处以反射光法测试吸光度差值dOD；（9）与同样方法不同标准浓度的标准品测试形成的LMWH标准曲线作比较，相同批号试剂可以做一次定标（或制成固定标准比色条定标）并存储于计算机；（10）经仪器自动计算获取抗Xa活性含量
→
通过高低质控品测试在质控范围内；（11）可以检测临床样本。2.根据权利要求1所述的一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测，其特征在于：所述检测过程中所使用的检测仪机型选用康上干式生化分析仪状，检测过程中所使用的滤光片选用405nm与600nm双波长。3.根据权利要求1所述的一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测，其特征在于：所述检测过程中采集末梢全血时的采集量为50ul，且整个检测过程不超过3分钟。4.根据权利要求1所述的一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测，其特征在于：所述检测过程中所使用的试剂空白OD≥2.0A；检测限：LMWH0.011IU/ml；UFH0.011IU/ml；RIVA2.365ng/ml，检测准确度X≤[X
±
2SD]； CV=(X
‑
T)/T≤
│±
15%
│
。5.根据权利要求1所述的一种干化学竞争抑制发色底物法抗Xa活性检测，其特征在于：所述检测时的批内重复性≤
│±
5%
│
，日间批内重复性CV≤
│±

【专利技术属性】
技术研发人员：王平，
申请(专利权)人：上海贞元诊断用品科技有限公司，
类型：发明
国别省市：