藤黄酸联合顺铂在制备小细胞肺癌治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了藤黄酸联合顺铂在制备小细胞肺癌治疗药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术发现天然产物藤黄中提取的藤黄酸（GA）联合小细胞肺癌一线化疗药物顺铂（cisplatin）能显著抑制人小细胞肺癌NCI

【技术实现步骤摘要】
藤黄酸联合顺铂在制备小细胞肺癌治疗药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及藤黄酸联合顺铂在制备小细胞肺癌治疗药物中的应用。

技术介绍

[0002]小细胞肺癌是一种以快速增殖、早期易转移和获得性治疗耐药为特征的侵袭性恶性肿瘤，占肺癌总数的15％。在过去的三十年间，小细胞肺癌的一线用药始终局限于化疗药物，通常以铂类药物为主，主要为顺铂。虽然近几年分子靶向药物、免疫治疗药物的研究在许多肿瘤中取得了突破性的进展，但是在小细胞肺癌的治疗中，仅批准了阿替利珠单抗与化疗药物的联合使用，并且对患者中位生存期的延长仍然十分有限。因此，顺铂仍是小细胞肺癌治疗的关键所在。如果在此基础上使用一些药物与顺铂联用，通过发挥协同增敏的作用，可以对小细胞肺癌的治疗产生更加积极的影响。
[0003]小细胞肺癌病因复杂，以“组合拳”出击，联合用药，可以进一步提升治疗效果。其中，天然产物是临床药物的直接或间接来源。在抗肿瘤药物领域中，大概有79％的药物来自于天然产物，从天然产物中发现活性先导化合物进而开发成抗肿瘤新药是行之有效的途径。在众多天然产物中，藤黄属于清热解毒类中药，从中提取的藤黄酸在之前的研究中被证实具有一定的抗癌作用。
[0004]因此，本专利技术设计联合应用藤黄酸和顺铂治疗小细胞肺癌，以期有效提高小细胞肺癌治疗效果。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供藤黄酸联合顺铂在制备小细胞肺癌治疗药物中的应用。
[0006]本专利技术发现天然产物藤黄中提取的藤黄酸(GA)联合小细胞肺癌一线化疗药物顺铂(cisplatin)能显著抑制人小细胞肺癌NCI
‑
H446细胞的生长。通过MTT实验验证了较低浓度的藤黄酸可增强顺铂的小细胞肺癌生长抑制作用，提示这种联合给药方式在治疗小细胞肺癌中的应用潜力。
附图说明
[0007]图1为藤黄酸联合顺铂对人小细胞肺癌细胞株NCI
‑
H446细胞增殖的影响结果。
具体实施方式
[0008]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步详细说明，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照本领域常规条件。
[0009]本专利技术采用的试剂如下：
[0010](1)藤黄酸(Gambogic acid,C
33
H
44
O8，分子量：628.7512)由中国药科大学提供，黄色粉末，纯度95％，使用前用二甲亚砜(DMSO)将药物粉末配制为0.01M母液，置于
‑
80℃保存。
[0011]顺铂粉末购于索莱宝(solarbio)试剂公司，
‑
20℃避光保存，使用前用无菌水配制为0.01M的母液，
‑
80℃保存。
[0012]所有试剂临用前用含10％胎牛血清的RPMI
‑
1640培养液配成所需浓度。
[0013](2)细胞培养试剂
[0014]①
培养液：RPMI
‑
1640培养基，购自美国GIBCO公司。取RPMI
‑
1640粉末10.39g溶于1000mL灭菌三蒸水中，并加入2.0g NaHCO3，用1M盐酸调pH值至7.0，圆筒式过滤器过滤除菌、分装，4℃冰箱保存。使用前加入100U/mL的青霉素和100U/mL的链霉素。
[0015]②
胎牛血清：美国GIBCO公司产品。经56℃水浴灭活30min，分装并保存于
‑
20℃低温冰箱中。
[0016]③
PBS缓冲液：称取NaCl 8.0g、KCl 0.20g、Na2HPO4·
H2O 1.56g、KH2PO4.2.0g，溶于1000mL三蒸水中，高压灭菌，4℃冰箱保存。
[0017](3)细胞生长活力抑制检测相关试剂
[0018]MTT粉末购自Sigma
‑
Aldrich公司。
[0019](3)细胞株
[0020]人小细胞肺癌细胞株NCI
‑
H446购自上海中国科学院细胞所。细胞均用含100U/mL青霉素、100mg/mL链霉素和10％胎牛血清的RPMI1640培养液培养。
[0021]实施例1
[0022]通过MTT实验测定藤黄酸(GA)联合顺铂(cisplatin)处理NCI
‑
H446细胞48H的生长抑制作用
[0023]MTT溶液能够被活细胞内的线粒体脱氢酶还原为蓝紫色的结晶甲臜，DMSO可溶解甲臜，形成的溶液颜色深浅与细胞活力成正比，据此可以检测细胞的活力。将NCI
‑
H446细胞按照合适的细胞密度培养在96孔酶标板内，每孔内的细胞体积为100μL，待细胞贴壁且融合度达50％，吸去培养基，加入100μL指定浓度的GA和顺铂；将给过药物的细胞继续置于孵箱培养48h后，每孔加入20μL MTT溶液；继续孵育4h后将上清液移除，每孔加入100μL DMSO，置于微型振荡器振荡，待结晶完全溶解后，使用570nm波长检测其吸光度。将检测后的吸光值整理后按下面的公式计算药物对细胞的生长抑制率：
[0024]抑制率％＝(1
‑
A
给药组
/A
对照组
)
×
100％。
[0025]通过MTT实验测定藤黄酸(GA)联合顺铂(cisplatin)处理NCI
‑
H446细胞48H的生长抑制作用。实验结果如图1所示，单用组(control)中cisplatin的IC50为4.51μM，联用组(GA(0.8μM))中cisplatin的IC50为1.14μM；cisplatin联合GA能显著提高对人小细胞肺癌NCI
‑
H446细胞的生长抑制作用。
[0026]如表1所示，与单用cisplatin相比，当0.8μM GA与较低剂量cisplatin(0.325、0.625和1.25μM)分别联用后，生长抑制率的增幅均呈现显著性差异，显示GA能显著增效较低浓度cisplatin对人小细胞肺癌NCI
‑
H446细胞的生长抑制作用。
[0027]表1.GA联合顺铂对人小细胞肺癌细胞株NCI
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H446细胞增殖抑制作用
[0028][0029]以上结果说明较低浓度的藤黄酸可增强顺铂的小细胞肺癌生长抑制作用，提示这种联合给药方式在治疗小细胞肺癌中的应用潜力。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.藤黄酸联合顺铂在制备小细胞肺癌治疗药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述小细胞肺癌治疗药物中藤黄酸和顺铂的摩尔比为0.8：0.325
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【专利技术属性】
技术研发人员：卢娜，赵越，周煜新，赵凯，
申请(专利权)人：南京芩康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：