GMFB蛋白作为肾透明细胞癌生物学标志的应用制造技术

本发明专利技术涉及GMFB蛋白作为肾透明细胞癌生物学标志的应用。本发明专利技术对TCGA数据库中GMFB在KIRC患者群体中的表达量进行分析，明确了GMFB与KIRC的发病相关。接着，对KIRC患者GMFB不同表达水平的预后进行分析，发现GMFB的表达量与KIRC患者的预后显著相关。最后使用CCK8实验证实，敲低GMFB可以显著提高肾透明细胞癌细胞的活力，而过表达GMFB可以显著抑制肾透明细胞癌细胞的活力、增殖、迁移和侵袭能力，并显著抑制了肾透明细胞癌细胞的线粒体膜电位。本发明专利技术为肾透明细胞癌提供了新的治疗靶点。肾透明细胞癌提供了新的治疗靶点。肾透明细胞癌提供了新的治疗靶点。

【技术实现步骤摘要】
GMFB蛋白作为肾透明细胞癌生物学标志的应用


[0001]本专利技术涉及一种蛋白GMFB的用途，尤其是涉及一种GMFB蛋白作为肾透明细胞癌生物学标志的应用。

技术介绍

[0002]肾癌是全世界发病率最高的10种癌症之一。据估计，全世界每年有30万人患上肾癌，其中约有一半人死于这种疾病。肾脏透明细胞癌(KIRC)起源于肾脏近曲小管的上皮细胞，已成为肿瘤学中发展最迅速的领域之一，约占肾癌的75％。同时，KIRC是最常见的亚型，具有最高的侵袭性和转移性，死亡率最高，也是免疫和血管浸润最多的癌症类型。由于其血管丰富，在早期就可出现肺、骨转移，也可直接蔓延或经淋巴结转移。在临床上其治疗主要以外科手术治疗为主，而肿瘤的TNM分期不一样，其治疗的方式也存在着很大的差异。KIRC患者可通过腹部影像学检查进行鉴别，但该类肿瘤对放化疗不敏感，晚期患者5年生存率低于10％。一些研究表明，20％
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40％的肿瘤患者在肾切除术后有局部或远处复发。参与KIRC发病的分子机制是多样的，如直接的染色质构型改变、血管生成和葡萄糖代谢。在过去的几年里，许多研究集中在肾细胞癌的肿瘤基因上，从而发现了KIRC的重复性改变。因此，有必要探索KIRC的潜在分子机制，更深入地了解KIRC。
[0003]GMFB(glia maturation factor beta)是一种胶质细胞成熟因子，具有肌动蛋白解聚因子同源性(ADF
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H)域。在进化过程中，从酵母到哺乳动物都高度保守。该蛋白普遍表达，但主要在脑组织中富集，参与细胞的趋化性，内吞作用，细胞黏附等多种生物活动。目前尚未有GMFB与肾癌相关的研究。

技术实现思路

[0004]为了找寻与肾透明细胞癌密切相关的标志物，为肾透明细胞癌的早期诊断，分级分期预测，预后判断提供临床上的参考，本专利技术提供一种GMFB基因和蛋白作为肾透明细胞癌生物学标志的应用。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0006]本专利技术提供GMFB基因作为肾透明细胞癌的生物学标志物的应用。
[0007]本专利技术还提供GMFB蛋白作为肾透明细胞癌的生物学标志物的应用。
[0008]本专利技术还提供GMFB基因作为生物标记物在制备肾透明细胞癌诊断或病程进展的试剂/试剂盒中的应用。
[0009]本专利技术还提供GMFB蛋白作为生物标记物在制备肾透明细胞癌诊断或病程进展的试剂/试剂盒中的应用。
[0010]本专利技术还提供GMFB基因作为生物标记物在制备预防或治疗肾透明细胞癌的药物中的应用。
[0011]本专利技术还提供GMFB蛋白作为生物标记物在制备预防或治疗肾透明细胞癌的药物中的应用。
[0012]本专利技术还提供促进GMFB基因表达的物质在制备预防和/或治疗肾透明细胞癌的药物中的应用。
[0013]本专利技术还提供提高GMFB含量或活性的物质在制备预防和/或治疗肾透明细胞癌的药物中的应用。
[0014]本专利技术还提供检测中GMFB蛋白表达量的试剂在制备肾透明细胞癌诊断或病程进展的试剂/试剂盒中的应用。
[0015]为了研究GMFB在KIRC中生物学标志物的应用，本专利技术对TCGA数据库中GMFB在KIRC患者群体中的表达量进行分析，明确了GMFB与KIRC的发病相关。接着，对KIRC患者GMFB不同表达水平的预后进行分析。发现GMFB的表达量与KIRC患者的预后显著相关。最后使用CCK8，Transwell迁移和增殖，划痕实验证实，敲低GMFB可以显著提高肾透明细胞癌细胞的活力，而过表达GMFB则显著抑制了肾透明细胞癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力，以及显著降低线粒体膜电位。本专利技术为肾透明细胞癌提供了新的治疗靶点。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点及有益效果：
[0017]1)本专利技术研究发现GMFB作为肾透明细胞癌差异表达基因，其表达量可以作为肾透明细胞癌的一个评估指标。
[0018]2)本专利技术研究发现GMFB的表达量可以作为患者预后的一个指标。
[0019]3本专利技术研究发现敲低GMFB后可使人肾透明细胞癌细胞Caki
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2细胞的增殖能力显著升高，在Caki
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2过表达GMFB，抑制Caki
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2的增殖、迁移和侵袭，降低线粒体膜电位，提示GMFB可以成为肾透明细胞癌的治疗靶点。
附图说明
[0020]图1.GMFB的mRNA水平和蛋白水平在肾透明细胞癌中低表达；
[0021]图1包括图1(A)和图1(B)；
[0022]图2.用人胚肾293T细胞作为正常对照，肾透明细胞癌上皮细胞Caki
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2的GMFB在蛋白水平和mRNA水平显著降低；
[0023]图3.GMFB高表达肾透明细胞癌患者的总体生存期(OS)与疾病生存期(DFS)均显著高于GMFB低表达的肾透明细胞癌患者，且有统计学意义(OS:P＝0.00018；DFS:P＝0.00013)，因此GMFB与肾透明细胞癌患者的预后显著相关，可以作为肾透明细胞癌预后的标志因子；
[0024]图3包括图3(A)和图3(B)；
[0025]图4.检测Caki
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2细胞中过表达和敲低的效率,从蛋白和mRNA水平证实了GMFB的敲减和过表达；
[0026]图4包括图4(A)和图4(B)；
[0027]图5.在Caki
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2细胞中，敲低GMFB显著增强细胞的活力，过表达GMFB显著降低细胞活力，证实GMFB是肾透明细胞癌治疗的潜在靶点。
[0028]图6.Transwell实验证实GMFB过表达的Caki
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2细胞迁移和侵袭能力显著降低。
[0029]图7.划痕实验证实GMFB过表达的Caki
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2细胞增殖能力显著降低。
[0030]图8.JC
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1染色结果显示GMFB过表达的Caki
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2细胞膜电位显著降低。
具体实施方式
[0031]下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明。
[0032]实施例1
[0033]对TCGA数据库中GMFB蛋白表达进行分析，发现GMFB在肾透明细胞癌中低表达。针对肾透明细胞癌患者群体进行统计学分析，结果显示差异有统计学意义，因此GMFB的mRNA表达水平可以作为肾透明细胞癌诊断的标志分子。
[0034]本实施例中，使用人胚肾细胞293T作为正常对照，检测293T细胞和肾透明上皮细胞癌Caki
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2细胞中GMFB的mRNA和蛋白水平。293T细胞和Caki
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2细胞，培养基分别为含10％血清，1％青霉素/链霉素的DMEM/HG，DMEM/F12。在37℃、5％CO2和95％空气的培养环境中进行培养。用Western Blot检测GMFB蛋白水平：用PBS缓冲液洗1
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.GMFB基因作为肾透明细胞癌的生物学标志物的应用。2.GMFB蛋白作为肾透明细胞癌的生物学标志物的应用。3.GMFB基因作为生物标记物在制备肾透明细胞癌诊断或病程进展的试剂/试剂盒中的应用。4.GMFB蛋白作为生物标记物在制备肾透明细胞癌诊断或病程进展的试剂/试剂盒中的应用。5.GMFB基因作为生物标记物在制备预防或治疗肾透明细胞癌的药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕立夏，徐国彤，朱彤，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：