用于调节细胞老化的方法和组合物技术

本公开提供了用于调节细胞老化的方法和组合物，所述方法包括使细胞与USP16抑制剂接触。所公开的方法可以用于提高基于细胞的疗法的功效，所述基于细胞的疗法包含嵌合抗原受体(CAR)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调节细胞老化的方法和组合物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年8月29日提交的美国临时专利申请第62/893,618号的优先权，所述美国临时专利申请的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0003]通过引用并入序列表
[0004]本申请含有已经以ASCII格式经由EFS
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WEB递交的序列表并且所述序列表据此通过引用整体并入。创建于2020年8月28日的所述ASCII副本命名为DOTH_001_01WO_SeqList_25，并且大小为37KB。

技术介绍

[0005]尽管基于细胞的疗法，如嵌合抗原受体(CAR)
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T细胞疗法和工程化T细胞受体(TCR)疗法，在临床上已显示出巨大的希望，但它们并不总是有效的。例如，大约20％的用CD19 CAR
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T细胞治疗的患者对疗法没有应答。另外地，实体瘤对重定向T细胞的应答非常小，与肿瘤抗原无关。
[0006]例如，如果细胞在施用于受试者之前或之后不久变得老化、衰老或耗竭，则基于细胞的疗法可能无效。辐射、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种调节细胞老化的方法，所述方法包括使细胞与USP16抑制剂接触，其中所述细胞是血细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法引起以下中的一个或多个：(a)维持或增加细胞扩增；(b)增加体外失效时间；(c)增加体内持久性；(d)预防、延缓或逆转衰老的开始；(e)增加或维持自我更新能力；(f)增加或维持自我更新表型；(g)减少细胞耗竭；(h)维持迁移能力；(i)减少活性氧类(ROS)的产生；(j)增加效应子功能；(k)增加体内植入；(l)增加体内肿瘤杀伤；(m)调节衰老标志物或老化相关标志物的表达；(n)减少CDKN2A、CDKN1A、CDKN2D和/或γ
‑
H2AX表达；(o)增加细胞增殖；(p)增加H2A或H2B泛素化；(q)减少SA
‑
β
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Gal表达；(r)增强通过WNT通路进行的信号传导；(s)减少端粒缩短；(t)增加干细胞标志物的表达；(u)减少对抗衰老药物的敏感性；(v)减少SASP(衰老相关分泌表型)；(w)减少细胞凋亡；(x)减少坏死；(y)增加线粒体膜电位；和/或(z)增加细胞内谷胱甘肽含量。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法引起以下中的一个或多个：(a)维持或增加细胞扩增；(b)增加体外失效时间；(c)预防、延缓或逆转衰老的开始；(d)增加或维持自我更新能力；(e)增加或维持自我更新表型；(f)增加效应子功能；(g)增加体内肿瘤杀伤；(h)调节衰老标志物的表达和/或增加干细胞标志物的表达；(i)减少CDKN2A、CDKN1A、CDKN2D和/或γ
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H2AX表达；
(j)增加细胞增殖；(k)增强通过WNT通路进行的信号传导；(l)增加干细胞标志物的表达；(m)减少对抗衰老药物的敏感性；(n)减少细胞凋亡；(o)减少坏死；(p)增加线粒体膜电位；和/或(q)增加细胞内谷胱甘肽含量。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法引起以下中的一个或多个：(a)增加体内持久性；(b)减少细胞耗竭；(c)减少活性氧类(ROS)的产生；和/或(d)增加体内植入。5.根据权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述血细胞是经基因修饰的血细胞。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述血细胞是经基因修饰的血细胞。7.根据权利要求1到6中任一项所述的方法，其中所述细胞被基因修饰成过度表达所关注蛋白质。8.根据权利要求1到6中任一项所述的方法，其中所述细胞被基因修饰成敲低或敲除所关注蛋白质的表达。9.根据权利要求1到6中任一项所述的方法，其中所述细胞被基因修饰成表达外源性蛋白。10.根据权利要求1到9中任一项所述的方法，其中所述血细胞是免疫细胞。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述免疫细胞选自由以下组成的组：T细胞、B细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和中性粒细胞。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述细胞是T细胞，并且任选地所述T细胞是CD4+或CD8+T细胞。13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述细胞是选自以下的T细胞：细胞毒性T细胞、末端效应T细胞、效应T细胞、记忆或中央记忆T细胞、原初T细胞、调节性T细胞、自然杀伤T细胞、γ
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δT细胞、细胞因子诱导的杀伤(CIK)T细胞和肿瘤浸润淋巴细胞。14.根据权利要求1到13中任一项所述的方法，其中所述血细胞是造血干细胞。15.根据权利要求1到14中任一项所述的方法，其中所述血细胞被基因修饰成在其表面上表达嵌合抗原受体或T细胞受体(TCR)。16.根据权利要求1到15中任一项所述的方法，其中所述方法是体外方法。17.根据权利要求1到15中任一项所述的方法，其中所述方法是体内方法。18.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是核酸。19.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是蛋白质。20.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是小分子。21.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是大分子。22.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是Cas核酸酶或编码Cas
核酸酶的核酸。23.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是TAL核酸酶。24.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是Zn指核酸酶。25.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是RNAi分子。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述RNAi分子选自shRNA、siRNA、微RNA和不对称干扰RNA。27.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述抑制剂选自反义分子、硫代磷酸寡核苷酸、DNA
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RNA嵌合体、吗啉代寡核苷酸、lhRNA、miRNA包埋的shRNA、小型内部分段RNA、抗体和外泌体。28.根据权利要求1到27中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是使用电穿孔递送到所述细胞中的。29.根据权利要求1到27中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是使用病毒载体或非病毒载体递送到所述细胞中的。30.根据权利要求28所述的方法，其中所述病毒载体选自逆转录病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述逆转录病毒载体是慢病毒载体。32.根据权利要求30所述的方法，其中所述非病毒载体选自脂质体或纳米颗粒。33.根据权利要求1到28中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是使用转座子系统将递送到所述细胞中的。34.根据权利要求33所述的方法，其中所述转座子系统是睡美人转座子系统(Sleeping Beauty transposon system)。35.根据权利要求1到34中任一项所述的方法，其中所述USP16抑制剂引起对USP16表达的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％的抑制。36.根据权利要求1到34中任一项所述的方法，其中所述USP16抑制剂引起对USP16活性的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％的抑制。37.一种调节细胞老化的方法，所述方法包括使细胞与USP16抑制剂接触，其中所述细胞是T细胞或NK细胞。38.根据权利要求37所述的方法，其中所述方法引起以下中的一个或多个：(a)维持或增加细胞扩增；(b)增加体外失效时间；(c)增加体内持久性；(d)预防、延缓或逆转衰老的开始；(e)增加或维持自我更新能力；(f)增加或维持自我更新表型；(g)减少细胞耗竭；(h)维持迁移能力；(i)减少活性氧类(ROS)的产生；
(j)增加效应子功能；(k)增加体内植入；(l)增加体内肿瘤杀伤；(m)调节衰老标志物或老化相关标志物的表达；(n)减少CDKN2A、CDKN1A、CDKN2D和/或γ
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H2AX表达；(o)增加细胞增殖；(p)增加H2A或H2B泛素化；(q)减少SA
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β
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Gal表达；(r)减少端粒缩短；(s)增强通过WNT通路进行的信号传导；(t)维持或增加体外细胞毒性；(u)维持或增加原初或中央记忆表型；(v)修改释放的细胞因子的类型和量；(w)增加干细胞标志物的表达；(x)减少对抗衰老药物的敏感性；(y)减少SASP(衰老相关分泌表型)；(z)减少细胞凋亡；(aa)减少坏死；(bb)增加线粒体膜电位；和/或(cc)增加细胞内谷胱甘肽含量。39.根据权利要求37所述的方法，其中所述方法引起以下中的一个或多个：(a)维持或增加细胞扩增；(b)增加体外失效时间；(c)预防、延缓或逆转衰老的开始；(d)增加或维持自我更新能力；(e)增加或维持自我更新表型；(f)增加效应子功能；(g)增加体内肿瘤杀伤；(h)调节衰老标志物或老化相关标志物的表达；(i)减少CDKN2A、CDKN1A、CDKN2D和/或γ
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H2AX表达；(j)增加细胞增殖；(k)增强通过WNT通路进行的信号传导；(l)维持或增加体外细胞毒性；(m)维持或增加原初或中央记忆表型；(n)增加干细胞标志物的表达；(o)减少对抗衰老药物的敏感性；(p)减少细胞凋亡；(q)减少坏死；(r)增加线粒体膜电位；和/或
(s)增加细胞内谷胱甘肽含量。40.根据权利要求37所述的方法，其中所述方法引起以下中的一个或多个：(a)增加体内持久性；(b)减少细胞耗竭；(c)减少活性氧类(ROS)的产生；和/或(d)增加体内植入。41.根据权利要求37到40中任一项所述的方法，其中所述细胞是经基因修饰的。42.根据权利要求37到41中任一项所述的方法，其中所述细胞被基因修饰成过度表达所关注蛋白质。43.根据权利要求37到42中任一项所述的方法，其中所述细胞被基因修饰成敲低或敲除所关注蛋白质的表达。44.根据权利要求37到43中任一项所述的方法，其中所述细胞被基因修饰成表达外源性蛋白。45.根据权利要求37到44中任一项所述的方法，其中所述细胞是T细胞，并且任选地所述T细胞是CD4+或CD8+T细胞。46.根据权利要求45所述的方法，其中所述细胞选自细胞毒性T细胞、末端效应T细胞、效应T细胞、记忆或中央记忆T细胞、原初T细胞、调节性T细胞、自然杀伤T细胞、γ
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δT细胞、CIK T细胞和肿瘤浸润淋巴细胞。47.根据权利要求37到46中任一项所述的方法，其中所述细胞被基因修饰成在其表面上表达嵌合抗原受体或T细胞受体(TCR)。48.根据权利要求37到47中任一项所述的方法，其中所述方法是体外方法。49.根据权利要求37到47中任一项所述的方法，其中所述方法是体内方法。50.根据权利要求37到49中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是核酸。51.根据权利要求37到49中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是蛋白质。52.根据权利要求37到49中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是小分子。53.根据权利要求37到49中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是大分子。54.根据权利要求37到49中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是Cas核酸酶或编码Cas核酸酶的核酸。55.根据权利要求37到49中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是TAL核酸酶。56.根据权利要求37到49中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是Zn指核酸酶。57.根据权利要求37到49中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是RNAi分子。58.根据权利要求57所述的方法，其中所述RNAi分子选自shRNA、siRNA、微RNA和不对称干扰RNA。59.根据权利要求37到49中任一项所述的方法，其中所述抑制剂选自反义分子、硫代磷酸寡核苷酸、DNA
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RNA嵌合体、吗啉代寡核苷酸、lhRNA、miRNA包埋的shRNA、小型内部分段RNA、抗体或外泌体。60.根据权利要求37到59中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是使用病毒载体或非病毒载体递送到所述细胞中的。61.根据权利要求60所述的方法，其中所述病毒载体选自逆转录病毒载体、腺病毒载体
和腺相关病毒载体。62.根据权利要求61所述的方法，其中所述逆转录病毒载体是慢病毒载体。63.根据权利要求60所述的方法，其中所述非病毒载体选自脂质体或纳米颗粒。64.根据权利要求37到59中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是使用转座子系统递送到所述细胞中的。65.根据权利要求64所述的方法，其中所述转座子系统是睡美人转座子系统。66.根据权利要求37到59中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是使用电穿孔递送到所述细胞中的。67.根据权利要求37到66中任一项所述的方法，其中所述细胞是T细胞，并且任选地其中T细胞是CD4
+
或CD8
+
T细胞。68.根据权利要求37到44或47到66中任一项所述的方法，其中所述细胞是NK细胞，并且任选地其中所述NK细胞是CD56
明亮
、CD56
暗淡
、CD56
低
或CD56
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。69.根据权利要求37到68中任一项所述的方法，其中所述USP16抑制剂引起对USP16表达的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％的抑制。70.根据权利要求37到68中任一项所述的方法，其中所述USP16抑制剂引起对USP16活性的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％的抑制。71.一种降低经基因修饰的血细胞中USP16表达的方法，所述方法包括使所述细胞与USP16抑制剂接触。72.根据权利要求71所述的方法，其中所述经基因修饰的血细胞是免疫细胞。73.根据权利要求71或72所述的方法，其中所述细胞被基因修饰成过度表达所关注蛋白质。74.根据权利要求71到73中任一项所述的方法，其中所述细胞被基因修饰成敲低或敲除所关注蛋白质的表达。75.根据权利要求71到74中任一项所述的方法，其中所述细胞被基因修饰成表达外源性蛋白。76.根据权利要求71到75中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自由以下组成的组：T细胞、B细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、NK细胞和中性粒细胞。77.根据权利要求76所述的方法，其中所述细胞是T细胞，并且任选地其中T细胞是CD4
+
或CD8
+
T细胞。78.根据权利要求76或77所述的方法，其中所述细胞是T细胞，并且其中所述T细胞选自细胞毒性T细胞、末端效应T细胞、效应T细胞、记忆或中央记忆T细胞、原初T细胞、调节性T细胞、自然杀伤T细胞、γ
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δT细胞、CIK T细胞和肿瘤浸润淋巴细胞。79.根据权利要求71到78中任一项所述的方法，其中所述经基因修饰的血细胞是NK细胞，并且任选地其中所述NK细胞是CD56
明亮
、CD56
暗淡
、CD56
低
或CD56
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。80.根据权利要求71到78中任一项所述的方法，其中所述经基因修饰的血细胞是造血干细胞。
81.根据权利要求71到80中任一项所述的方法，其中所述经基因修饰的血细胞被基因修饰成在其表面上表达嵌合抗原受体或T细胞受体(TCR)。82.根据权利要求71到81中任一项所述的方法，其中所述方法是体外方法。83.根据权利要求71到81中任一项所述的方法，其中所述方法是体内方法。84.根据权利要求71到83中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是核酸。85.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：德瑞安治疗公司，
类型：发明
国别省市：