一种牡丹花低聚糖提取物的制备方法及其用途技术

本发明专利技术属于天然植物提取技术领域，公开了一种牡丹花低聚糖提取物的制备方法及其用途。制备步骤包括：(1)向牡丹花中加入含纤维素酶、酸性蛋白酶和果胶酶总浓度0.1%～0.3%的复合酶液进行第一次酶解，水提，浓缩，得浓缩液；(2)向浓缩液中加入含纤维二糖酶、葡聚糖酶和β

【技术实现步骤摘要】
一种牡丹花低聚糖提取物的制备方法及其用途


[0001]本专利技术属于天然植物提取
，具体涉及一种牡丹花低聚糖提取物的制备方法及其用途。

技术介绍

[0002]牡丹花朵饱满、颜色艳丽，浑身是宝，不仅具有重要的观赏价值，还具有重要的开发应用价值。研究表明牡丹花瓣中含有丰富的黄酮、多酚类物质、维生素(维生素B1、维生素B2和类胡萝卜素等)、矿物质(Ca、K、P、Mg、Se等)、蛋白质和氨基酸，是一种较好的天然营养保健资源。从牡丹花中提取的牡丹花精油具有改善血液循环，抵抗敏感，美容养颜，促进细胞再生，缓解肌肤老化，调节皮肤问题，平衡女性体内荷尔蒙分泌等作用，因此，可作为原料用于食品、饮料、医药、化妆品中。
[0003]目前牡丹花中功效成分的提取主要集中在精油、黄酮和多酚类物质，对其寡糖、多糖等糖类成分的开发利用鲜有报道。植物多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、降血糖等多种生物活性、毒副作用小和不易造成残留等优点。但是植物多糖分子量大，水溶性差，不利于生物吸收，应用范围受限，将其通过现代生物技术制备成分子量较小，水溶性好的活性物质将极大的促进其开发利用。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的问题和不足，本专利技术的目的旨在提供一种牡丹花低聚糖提取物的制备方法及其用途。
[0005]为实现专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0006]本专利技术提供了一种牡丹花低聚糖提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)将牡丹花与复合酶液按质量比1:4～6混合，进行第一次酶解，然后向酶解液中加入牡丹花质量6～12倍的水，于60～90℃条件下进行提取，提取后过滤，得到提取液，对提取液进行浓缩，得到浓缩液；
[0008]所述复合酶液为纤维素酶、酸性蛋白酶和果胶酶的混合水溶液；
[0009](2)将步骤(1)得到的浓缩液与混合酶液按质量比3～8:1混合，进行第二次酶解，酶解后离心，取上清液，对上清液进行脱色处理，得到脱色液；
[0010]所述混合酶液为纤维二糖酶、葡聚糖酶和β
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半乳糖苷酶的混合水溶液；
[0011](3)对步骤(2)得到的脱色液进行醇沉处理，醇沉后收集上清液，上清液经除醇、浓缩处理后采用大孔吸附树脂进行分离，收集洗脱液；对洗脱液进行过滤处理，对过滤后的洗脱液进行冻干，得到牡丹花低聚糖提取物。
[0012]优选地，步骤(1)所述复合酶液中纤维素酶、酸性蛋白酶和果胶酶的质量比为6～12:1～2:1～4，所述纤维素酶、酸性蛋白酶和果胶酶的总重占复合酶液总重的0.1％～0.3％。
[0013]优选地，步骤(2)所述混合酶液中纤维二糖酶、葡聚糖酶和β
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半乳糖苷酶的质量比
为1～4:1～3:5～10，所述纤维二糖酶、葡聚糖酶和β
‑
半乳糖苷酶的总重占混合酶液总重的0.05％～0.2％。
[0014]优选地，所述第一次酶解和第二次酶解的酶解条件相同，酶解的温度为40℃～60℃，pH为5.0～6.0，时间为2h～5h。
[0015]优选地，步骤(1)中提取的时间为1h～3h，提取的次数为两次。
[0016]优选地，步骤(1)对提取液进行浓缩为减压浓缩，减压浓缩的温度为55℃～75℃，压力为0.6～0.9MPa。
[0017]优选地，步骤(2)离心处理的转速为2000～8000rpm，时间10min。
[0018]优选地，步骤(2)脱色处理是向上清液中添加活性炭和活性白土。更加优选地，所述活性炭和活性白土的质量比为1～2：0～2，活性炭和活性白土加入量为牡丹干花质量的10％～20％。
[0019]优选地，步骤(2)脱色处理的温度为60～80℃，时间0.5～1h。
[0020]优选地，步骤(3)醇沉处理的具体操作为：向脱色液中加入90％乙醇至乙醇浓度为60～80％，静置12～36h。
[0021]优选地，步骤(3)采用大孔吸附树脂进行分离，收集洗脱液的具体操作为：将浓缩液注入非极性或中等极性大孔吸附树脂中，用3～6倍柱体积的纯化水冲洗，流速为1～3倍柱体积/h，收集洗脱液。
[0022]优选地，步骤(3)对洗脱液进行过滤处理的操作为：将洗脱液依次经超滤膜过滤和纳滤膜纳滤。
[0023]更加优选地，超滤膜过滤的条件包括：常温，压力为0.2～0.3MPa，截留分子量依次为50000～105Da、5000～10000Da；纳滤膜纳滤的条件包括：温度为30～50℃，压力为0.6～0.9MPa，截留分子量为100～300Da。
[0024]优选地，步骤(3)中对过滤后的洗脱液进行冻干的具体操作为：55～65℃条件下将洗脱液减压浓缩，得到浓缩液，浓缩液在真空度10～100Pa条件下于
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10℃～
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20℃冷冻干燥3～6h，得到牡丹花低聚糖提取物。
[0025]本专利技术还提供了一种由上述制备方法制备的牡丹花低聚糖产品。
[0026]优选地，所述牡丹花低聚糖产品的分子量为300～2000，其完全水解后得到的单糖有阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。
[0027]本专利技术还提供了由上述牡丹花低聚糖产品在制备皮肤损伤修复产品中的应用。
[0028]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0029](1)本专利技术先利用纤维素酶、酸性蛋白酶和果胶酶的协同作用对牡丹花进行第一次酶解，破坏牡丹花的细胞壁，加快糖类溶出细胞的速率，缩短提取时间，同时除去纤维素、蛋白质和果胶等杂质，有利于后续的分离纯化。再利用纤维二糖酶、葡聚糖酶和β
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半乳糖苷酶进行第二次酶解，加快大分子多糖降解为低聚糖或低分子量多糖，从而克服牡丹花多糖分子量大，水溶性差，应用范围受限的问题。
[0030](2)本专利技术提供的制备方法，酶解反应条件温和，提取过程使用乙醇和水进行处理，无毒无害，保证了产品安全。
[0031](3)本专利技术提供的制备方法中洗脱液依次经超滤膜过滤和纳滤膜纳滤，能进一步除去低聚糖中残留的蛋白质、小分子单糖和无机盐等杂质，从而提高低聚糖的纯度。
[0032](4)本专利技术制备的牡丹花低聚糖提取物分子量为300～2000，牡丹花低聚糖提取物的收率达15％以上，牡丹花低聚糖提取物的总糖含量达90％以上。
[0033](5)经实验验证，本专利技术制备的牡丹花低聚糖产品可显著提高受损的皮肤表皮细胞的成活率，提高受损细胞中抗氧化物质SOD、GSH
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Px的含量，降低受损细胞中的促氧化物质ROS、成纤维细胞胶原蛋白酶MMP
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1含量，从而发挥修复紫外线引起的皮肤损伤的作用，有效提高皮肤光泽，提高抗氧化作用。
附图说明
[0034]图1为实施例1制备的牡丹花低聚糖提取物的凝胶渗透色谱图；
[0035]图2为实施例1制备的牡丹花低聚糖提取物的单糖组成图，图中1为阿拉伯糖，2为甘露糖，3为葡萄糖，4为半乳糖。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种牡丹花低聚糖提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将牡丹花与复合酶液按质量比1:4～6混合，进行第一次酶解，然后向酶解液中加入牡丹花质量6～12倍的水，于60～90℃条件下进行提取，提取后过滤，得到提取液，对提取液进行浓缩，得到浓缩液；所述复合酶液为纤维素酶、酸性蛋白酶和果胶酶的混合水溶液；（2）将步骤（1）得到的浓缩液与混合酶液按质量比3～8:1混合，进行第二次酶解，酶解后离心，取上清液，对上清液进行脱色处理，得到脱色液；所述混合酶液为纤维二糖酶、葡聚糖酶和β
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半乳糖苷酶的混合水溶液；（3）对步骤（2）得到的脱色液进行醇沉处理，醇沉后收集上清液，上清液经除醇、浓缩处理后采用大孔吸附树脂进行分离，收集洗脱液；对洗脱液进行过滤处理，对过滤后的洗脱液进行冻干，得到牡丹花低聚糖提取物。2.根据权利要求1所述的牡丹花低聚糖提取物的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述复合酶液中纤维素酶、酸性蛋白酶和果胶酶的质量比为6～12:1～2:1～4。3.根据权利要求2所述的牡丹花低聚糖提取物的制备方...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓，范毅，王学方，宁二娟，陈玲，张立攀，王法云，李智宁，魏悦，于立芹，李飞飞，王伟，王韬，
申请(专利权)人：河南省科学院，
类型：发明
国别省市：