Ambra1在乳腺癌化疗药物紫杉醇研制中的应用制造技术

本发明专利技术公开了Ambra1在乳腺癌化疗药物紫杉醇研制中的应用，提出了Ambra1蛋白在乳腺癌MDA

【技术实现步骤摘要】
Ambra1在乳腺癌化疗药物紫杉醇研制中的应用


[0001]本专利技术属于药物研制
，具体涉及Ambra1降低乳腺癌细胞敏感性在紫杉醇化疗药物研制中的应用。

技术介绍

[0002]化疗是乳腺癌综合治疗的重要组成部分，但约40％可手术和80％不可手术的患者对化疗药物并不敏感。影响化疗药物敏感性的因素众多，虽已取得重大进展，仍没有完全阐明。诱导肿瘤细胞凋亡是化疗药物抗肿瘤的主要机制，因此凋亡机制的破坏将影响细胞对化疗药物的敏感性。
[0003]紫杉醇(paclitaxel,PTX)是乳腺癌化疗最有效的药物之一，但乳腺癌细胞对PTX的敏感性将影响其疗效和患者预后；参与肿瘤细胞化疗敏感性调控的因素众多，相关机制仍没有完全阐明；Ambra1(Autophagy/Beclin 1regulator 1,Ambra1)是一种促自噬蛋白，同时参与凋亡的调控，是细胞凋亡和自噬相互转换的关键因子；该蛋白在乳腺癌中的表达明显增高，能够通过抑制凋亡降低乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性；
[0004]目前，Ambra1调控凋亡的机制尚未完全阐明，研究Ambra1调控乳腺癌细胞的凋亡机制，以及与乳腺癌细胞化疗药物PTX敏感性的相关机制，有助于在乳腺癌化疗药物的研制中提供新的途径和思路。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提出了Ambra1蛋白在乳腺癌MDA
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MB
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231和MCF
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7细胞中的作用机制，并提供了Ambra1与化疗药物PTX敏感性的相关性；最终将Ambra1应用于紫杉醇化疗药物研制中，提高乳腺癌MDA
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MB
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231和MCF
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7细胞药物敏感性，增强化疗疗效；
[0006]为了达到上述技术目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0007]Ambra1在乳腺癌化疗药物—紫杉醇制备研制中的应用；
[0008]优选的，所述Ambra1在乳腺癌中呈现高表达，抑制乳腺癌细胞凋亡，降低乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性；通过降低Ambra1在乳腺癌中的表达，提高乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性；
[0009]优选的，所述Ambra1通过Akt/pAkt磷酸化Bad抑制PTX诱导的乳腺癌细胞凋亡，从而降低乳腺癌细胞对PTX的敏感性；
[0010]优选的，所述乳腺癌细胞为MDA
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MB
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231和MCF
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7。
[0011]本专利技术的有益效果是：
[0012]通过本专利技术提供的Ambra1蛋白在乳腺癌MDA
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MB
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231和MCF
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7细胞中的作用机制以及Ambra1与化疗药物PTX敏感性的相关性；将其应用于乳腺癌化疗药物PTX的制备研制中，提高乳腺癌细胞对PTX的敏感性，增强化疗疗效；为化疗药物紫杉醇药物研制的药性提升提供新的途径和思路。
附图说明
[0013]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0014]图1是本专利技术的蛋白质印迹法检测MCF
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7和MDA
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MB
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231细胞中Ambra1蛋白表达水平(A)，CCK
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8法和FCM法检测MCF
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7和MDA
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MB
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231细胞存活率(B)和凋亡(C)；
[0015]图2是本专利技术的蛋白质印迹法检测MCF
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7和MDA
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MB
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231细胞中Akt、pAkt(A)和Bad、pBad
s136
蛋白表达水平(C)，qRT
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PCR法检测MCF
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7和MDA
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MB
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231细胞中AKT基因mRNA的表达(B)；
[0016]图3是本专利技术的蛋白质印迹法检测MCF
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7和MDA
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MB
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231细胞中Akt、pAkt、Bad和pBad
s136
蛋白表达水平；
[0017]图4是本专利技术的CCK
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8法和FCM法检测MCF
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7和MDA
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MB
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231细胞存活率(A)和凋亡率(B)。
具体实施方式
[0018]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0019]实施例1
[0020]Ambra1在乳腺癌化疗药物—紫杉醇制备研制中的应用；
[0021]优选的，所述Ambra1在乳腺癌中呈现高表达，抑制乳腺癌细胞凋亡，降低乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性；通过降低Ambra1在乳腺癌中的表达，提高乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性；
[0022]优选的，所述Ambra1通过Akt/pAkt磷酸化Bad抑制PTX诱导的乳腺癌细胞凋亡，从而降低乳腺癌细胞对PTX的敏感性；
[0023]优选的，所述乳腺癌细胞为MDA
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MB
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231和MCF
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7。
[0024]实施例2
[0025]1.1、实验细胞、试剂、仪器
[0026]人乳腺癌细胞株MDA
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MB
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231和MCF
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7购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库；
[0027]DMEM和L15培养液购自美国HyClone公司；胎牛血清购自美国Gibco公司；PTX购自美国百时美施贵宝制药公司；GSK690693(GSK)购自美国MCE公司；Annexin V
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PE/7
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AAD凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司；CCK
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8试剂盒购自碧云天生物技术研究所；兔抗人Akt多克隆抗体和兔抗人pAkt单克隆抗体均购自英国Abcam公司；兔抗人Ambra1多克隆抗体，小鼠抗人Bad单克隆抗体，小鼠抗人pBad
s136
单克隆抗体和小鼠抗人GAPDH(内参照)单克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔和羊抗小鼠IgG均购自美国Santa Cruz公司；慢病毒包装的转染了人类全长Ambra1基因cDNA的Ambra1
表达载体(OE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Ambra1在乳腺癌化疗药物紫杉醇制备研制中的应用。2.根据权利要求1所述Ambra1在乳腺癌化疗药物紫杉醇制备研制中的应用，其特征在于，所述Ambra1在乳腺癌中呈现高表达，抑制乳腺癌细胞凋亡，降低乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性；通过降低Ambra1在乳腺癌中的表达，提高乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。3.根据权利要求1所述Ambra1在乳腺癌化疗药物紫杉醇制备研制中...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙蔚亮，黄文锋，赵璧，蔡正文，罗婕，甘廷庆，黎辉，梁俐，王莉，韩成龙，朱华卫，
申请(专利权)人：广西医科大学第二附属医院广西医科大学第二临床医学院，
类型：发明
国别省市：