测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法。该方法包括下述步骤：将供试品溶液进行超高效液相色谱检测即可；其中，所述供试品溶液以鼠麹草提取物为原料，通过水解法制得；所述超高效液相色谱检测采用梯度洗脱方式，流动相A为甲酸水溶液，流动相B为乙腈。本发明专利技术提供的检测方法不仅质量稳定性高、检测可靠，还能够节省资源、降低成本。降低成本。降低成本。

【技术实现步骤摘要】
测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法


[0001]本专利技术涉及一种测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法。

技术介绍

[0002]咖啡酸及其衍生物具有抗病毒、抑菌、抗感染、治疗心脑血管疾病、抗肿瘤等生物活性，在医药领域得到了广泛应用，其对于食品乳化体系也具有抗氧化活性，能够延长食品的货架期，有望应用于食品添加剂。鼠麹草含有丰富的咖啡酸及其衍生物，其中，咖啡酸衍生物包括咖啡酰奎宁酸类(咖啡酸羧基与奎宁酸羟基成酯)、咖啡酸葡萄糖酯(咖啡酸羧基与葡萄糖羟基成酯)、咖啡酸甲(乙)酯等。然而，目前鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物的定量检测难度大、成本高。
[0003]目前，还没有报道如何通过水解法测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物的含量。因此，如何提供一种测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法，其不仅质量稳定性高、检测可靠，还能够节省资源、降低成本的研究是很有必要的。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是解决现有技术中测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量时，操作复杂且成本高的缺陷，从而提供了一种测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法。本专利技术提供的检测方法不仅质量稳定性高、检测可靠，还能够节省资源、降低成本。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法，其包括下述步骤：将供试品溶液进行超高效液相色谱检测即可；
[0007]其中，所述供试品溶液以鼠麹草提取物为原料，通过水解法制得；
[0008]所述超高效液相色谱检测采用梯度洗脱方式，流动相A为甲酸水溶液，流动相B为乙腈；
[0009]所述梯度洗脱方式的条件如下所述：
[0010]时间(min)流动相A(％)流动相B(％)090～1000～10985～9010～159.0170～8515～303370～8515～303540～6040～603720～3070～8037.0190～1000～104090～1000～10
[0011]上述百分比为流动相A或流动相B的体积与“流动相A和流动相B”总体积之比。
[0012]本专利技术中，所述鼠麹草提取物的制备方法可为本领域常规，优选地，参照CN201610108995.2的实施例4，将“水饱和正丁醇相”替换为“将水饱和正丁醇相与乙酸乙酯相合并”。
[0013]本专利技术中，优选地，所述供试品溶液的制备方法通过下述步骤制得：在碱溶液中，将所述鼠麹草提取物和抗氧化剂混合，进行水解反应即可。
[0014]其中，所述碱溶液的种类可为本领域常规，例如NaOH溶液。
[0015]其中，所述碱溶液的浓度可为2～4N，例如2N。
[0016]其中，所述鼠麹草提取物与所述碱溶液的质量体积比可为1:(20～30)g/mL，例如1:25g/mL。
[0017]其中，所述抗氧化剂的种类可为本领域常规，优选为抗坏血酸、柠檬酸钠和螯合金属离子中的一种或多种，更优选为抗坏血酸和/或EDTA
‑
2Na，例如抗坏血酸和EDTA
‑
2Na。所述抗坏血酸的纯度可为0.5～2％(W/V)，例如1％(W/V)。所述EDTA
‑
2Na的浓度可为10～20mM，例如10mM。
[0018]所述抗坏血酸和EDTA
‑
2Na的质量比可为1:(168.1～1344.8)，例如1:336.2。
[0019]其中，所述鼠麹草提取物与所述抗氧化剂的质量体积比可为1:(0.5～2)g/mL，例如1:1g/mL。
[0020]其中，所述水解反应的温度可为40～50℃，优选为45℃。
[0021]其中，所述水解反应的时间可为15～30min，优选为15min。
[0022]其中，所述水解反应后可包括酸化、萃取、离心分离取上清液、干燥和溶解的操作。
[0023]所述酸化可采用本领域常规的方法进行，优选地，采用盐酸进行酸化。所述盐酸的浓度优选为7.2N。所述鼠麹草提取物与所述盐酸的质量体积比g/mL可为1:(5～10)g/mL，例如1:7.5g/mL。
[0024]所述萃取可采用本领域常规的方法进行，优选地，采用乙酸乙酯进行萃取。所述鼠麹草提取物与所述乙酸乙酯的质量体积比可为1:(50～100)g/mL，例如1:65g/mL。本专利技术可不采用乙醚进行萃取，不存在安全隐患。
[0025]所述离心分离可采用本领域常规的方法进行，所述离心分离的转速优选为4000～7000rpm，例如5000rpm。所述离心分离的时间优选为5～15min，例如10min。
[0026]所述溶解的溶剂可为本领域常规能够溶解鼠麹草提取物的溶剂，例如醇类溶剂。所述醇类溶剂优选地为甲醇。
[0027]优选地，所述溶解后还包括过滤的操作。所述过滤的滤膜孔径优选为0.22～0.45μm，例如0.45μm。所述过滤可以除去不溶于甲醇的杂质，避免堵塞色谱柱及检测仪器。
[0028]本专利技术中，所述超高效液相色谱检测的对象为咖啡酸，所述咖啡酸包括鼠麹草提取物中原始的咖啡酸和鼠麹草提取物中咖啡酸衍生物水解后得到的咖啡酸。
[0029]本专利技术中，优选地，所述流动相A和所述流动相B的梯度洗脱条件如下所述：
[0030]时间(min)流动相A(％)流动相B(％)091～937～9986～8812～149.0177～7921～233376～7822～24
3554～5644～463724～5674～7637.0191～937～94091～937～9
[0031]更优选地，所述流动相A和所述流动相B的梯度洗脱条件如下所述：
[0032]时间(min)流动相A(％)流动相B(％)0928987139.01782233772335554537257537.0192840928。
[0033]本专利技术中，所述超高效液相色谱检测中，色谱柱可为Waters Acquity UPLC HSS T3 column，其规格为2.1mm
×
150mm,1.8μm。若使用其他类型的色谱柱会使得1,5
‑
二咖啡酰奎宁酸和3,5
‑
二咖啡酰奎宁酸的分离度小于1.5，不符合标准。
[0034]本专利技术中，所述超高效液相色谱检测中，当流动相A为甲酸水溶液时，甲酸水溶液的浓度可为0.05～0.2％，例如0.1％，百分比为甲酸占水的体积百分比。采用该浓度的甲酸水溶液可以防止色谱峰拖尾，优化色谱峰。
[0035]本专利技术中，所述超高效液相色谱检测中，流速可为0.2～0.4mL/min，例如0.3mL/min。
[0036]本专利技术中，所述超高效液相色谱检测中，柱温可为40～50℃，例如40℃。所述柱温若过低，会造成出峰时间延长且分离效果较差；若过高，会导致分离度减小，分离效果变差。
[0037]本专利技术中，所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法，其特征在于，其包括下述步骤：将供试品溶液进行超高效液相色谱检测即可；其中，所述供试品溶液以鼠麹草提取物为原料，通过水解法制得；所述超高效液相色谱检测采用梯度洗脱方式，流动相A为甲酸水溶液，流动相B为乙腈；所述梯度洗脱方式的条件如下所述：时间/min流动相A/％流动相B/％090～1000～10985～9010～159.0170～8515～303370～8515～303540～6040～603720～3070～8037.0190～1000～104090～1000～10上述百分比为流动相A或流动相B的体积与“流动相A和流动相B”总体积之比。2.如权利要求1所述的测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法通过下述步骤制得：在碱溶液中，将所述鼠麹草提取物和抗氧化剂混合，进行水解反应即可。3.如权利要求2所述的测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法，其特征在于，所述碱溶液为NaOH溶液；和/或，所述碱溶液的浓度为2～4N，例如2N；和/或，所述鼠麹草提取物与所述碱溶液的质量体积比为1:(20～30)g/mL，例如1:25g/mL；和/或，所述抗氧化剂的种类为抗坏血酸、柠檬酸钠和螯合金属离子中的一种或多种，优选为抗坏血酸和/或EDTA
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2Na，例如抗坏血酸和EDTA
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2Na；所述抗坏血酸的纯度优选为0.5～2％W/V，例如1％W/V；所述EDTA
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2Na的浓度优选为10～20mM，例如10mM；所述抗坏血酸和EDTA
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2Na的质量比优选为1:(168.1～1344.8)，例如1:336.2；和/或，所述鼠麹草提取物与所述抗氧化剂的质量体积比为1:(0.5～2)g/mL，例如1:1g/mL。4.如权利要求2所述的测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法，其特征在于，所述水解反应的温度为40～50℃，优选为45℃；和/或，所述水解反应的时间为15～30min，优选为15min；和/或，所述水解反应后包括酸化、萃取、离心分离取上清液、干燥和溶解的操作。5.如权利要求4所述的测定鼠麹草提取物中咖啡酸及其衍生物含量的方法，其特征在于，所述酸化采用盐酸进行酸化；所述盐酸的浓度优选为7.2N；所述鼠麹草提取物与所述盐酸的质量体积比优选为1:(5～10)g/mL，例如1:7.5g/mL；和/或，所述萃取采用乙酸乙酯进行萃取；所述鼠麹草提取物与所述乙酸乙酯的质量体积比优选为1:(50～100)g/mL，例如1:65g/mL；和/或，所述离心分离的转速为4000～7000rpm，例如5000rpm；
和/或，所述离心分离的时间为5～15min，例如10min；和/或，所述溶解的溶剂为醇类溶剂；所述醇类溶剂优选地为甲醇；和/或，所述溶解后还包括过滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：范思洋，刘曦子，韩诗怡，陈叶，
申请(专利权)人：中国医药工业研究总院有限公司，
类型：发明
国别省市：