一种人血清中白蛋白分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种人血清中白蛋白分离纯化方法。该方法包括下述步骤：1)样品的预处理：将人血清样品(按照国家标准物质要求制备)置于4℃下解冻，然后用直径25mm孔径0.45μm水系一次性过滤头过滤，得到上样样品；2)亲和层析：将所述上样样品进行亲和层析，得到亲和层析后的样品；3)阴离子交换层析：将所述亲和层析后的样品进行阴离子交换层析，得到纯化后的白蛋白。经过本发明专利技术方法纯化的白蛋白，其纯度可达≥99％。≥99％。

【技术实现步骤摘要】
一种人血清中白蛋白分离纯化方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种人血清中白蛋白分离纯化方法。

技术介绍

[0002]常用白蛋白纯化方法按照大类分可以分为较传统的沉淀法和新技术发展而来层析 色谱法。无论哪种方法，其分离纯化的原理都是利用其物理和化学性质的差异。沉淀 法是通过沉淀的方式来实现目标蛋白与杂质的分离，具有成本低、操作简单、回收率 高、设备要求低等优点。然而该方法对蛋白的选择性不高，适用于蛋白的初步纯化和 浓缩。常用的白蛋白的沉淀方法有：盐沉淀法、有机沉淀法、热沉淀法、等电点沉淀 法等。层析色谱法是通过待分离物与固定相之间的物理化学性质以及生物学性质的相 互作用的不同来进行分离纯化目标产物。随着材料新技术的发展，层析色谱技术的分 离性能更高，适用范围更广，已成为蛋白分离纯化的常用方法。目前层析色谱法主要 有分子筛凝胶层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析和反相层析等。
[0003]目前已经有文献报道了血清中白蛋白分离纯方法。如日本文献《Committee onDiabetes Mellitus Indices 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人血清中白蛋白分离纯化方法，包括下述步骤：1)样品的预处理：将人血清样品置于4℃下解冻，然后用直径25mm孔径0.45μm水系一次性过滤头过滤，得到上样样品；2)亲和层析：将所述上样样品进行亲和层析，得到亲和层析后的样品；3)阴离子交换层析：将所述亲和层析后的样品进行阴离子交换层析，得到纯化后的白蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述亲和层析的色谱条件如下：仪器：AKTApurifier UPC10蛋白液相色谱仪；检测波长：280nm；亲和层析柱：Blue Sepharose 6FF 50mL，规格16mm
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30cm，填料高度26cm；流速：2mL/min；上样缓冲液A：20mM PB，含0.15M NaCl，pH＝7.2；洗脱缓冲液B：20mM PB，含2M NaCl，pH＝7.2。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，在所述亲和层析时，上样前所用的上样样品与所述上样缓冲液A按照体积比1：(2
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50)的比例混合。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述层析柱在进行柱层析前使用3～5CV所述上样缓冲液A对层析柱进行平衡。5.根据权利要求2
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4中任一项所述的方法，其特征在于：所述上样量为30mL；所述上样完毕后继续用上样缓冲液A淋洗至基线稳定，然后改用所述洗脱缓冲液B进行洗脱，并对出峰位置进行收集接样，得到洗脱样品；所述洗脱缓冲液B的用量优选为13CV；所述收集接样的体积为250mL。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤2)还包括对收集到的洗脱样品进行纯化的步骤：将收集的洗脱样品用MD44
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3500透析袋脱盐处理，用0.1M硝酸银检测透析液中的Cl
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；将脱盐后的洗脱液用10KDa 50m...

【专利技术属性】
技术研发人员：王清涛，张瑞，赵瑞，刘博，王默，石洁，宋旖川，刘可心，胥楚怡，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京朝阳医院，
类型：发明
国别省市：