一种多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽，其氨基酸序列为：DPFRHY，本发明专利技术还公开了该多肽在化妆品、胶原多肽口服液、多肽纤维、防晒衣上的应用。本发明专利技术多肽具有良好的UVB损伤修复活性，可以提高UVB辐射L929细胞成活率，可降低L929细胞内ROS含量，修复UVB造成的DNA损伤，可抑制caspsae

【技术实现步骤摘要】
一种多肽及其应用


[0001]本专利技术涉及一种多肽。

技术介绍

[0002]皮肤衰老是自然的进程,每个人都无法避免,导致衰老的原因也是很复杂的。80%的皮肤老化都源于光老化。
[0003]现有的对抗光损伤的方法主要有：第一是采用遮挡物，如太阳伞，防晒帽，防洒衣等将皮肤与直接照射的UV隔绝；第二是软防晒，包括涂沫防晒霜、防晒喷雾、防晒化妆品等，现有的一些化妆品中会加入天然的抗氧化剂来达到间接防晒的效果，比如维生素C/E、茶多酚、芦荟等植物提取物，具有对抗和修复光损伤的作用；第三是修复光损伤，光拐伤加重皮肤屏障受损，因此需要帮助身体去修复光损伤。
[0004]海洋生物因长期生活在高压、高盐、低温等极端环境中，产生了许多特有的结构新颖、高效低毒的生物活性物质，目前已分离鉴定的海洋生物活性物质主要有多糖类、多肽类、萜类、皂苷类、不饱和脂肪酸类等。我国拥有丰富的海洋蛋白质资源，但利用率不高。如何更高效利用海洋多肽，开发新产品的研究具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种多肽，具有良好的UVB损伤修复活性，可应用于制备抗UVB辐射的产品中。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术公开了一种多肽，其氨基酸序列为：DPFRHY。
[0006]本专利技术还公开了一种化妆品，包括上述的多肽。
[0007]优选的，所述的多肽的浓度为15.5
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62.5 μg/mL。
[0008]本专利技术还公开了一种胶原多肽口服液，包括上述的多肽。
[0009]本专利技术还公开了一种多肽纤维，采用以下步骤制备：S1.将权利要求1所述的多肽与溶剂混合制备成可纺丝溶液，所述的多肽的重量比例为5%～40%，溶剂为六氟异丙醇。
[0010]S2.将可纺丝溶液进行纺丝及后处理，得到多肽纤维。
[0011]本专利技术还公开了一种防晒衣，采用上述多肽纤维制备而成。
[0012]本专利技术具有如下有益效果：本专利技术多肽从鲟鱼鱼皮中提取得到，具有良好的UVB损伤修复活性，可有效缓解UVB诱导细胞凋亡，可应用于化妆品的原料中，用于制备化妆品，或可应用于制备多肽纤维、防晒衣以对抗UVB光损伤。
附图说明
[0013]图1是本专利技术多肽的HPLC色谱图。
[0014]图2是本专利技术多肽的质谱图。
[0015]图3是本专利技术多肽对UVB暴露L929细胞活性的影响的实验结果。
[0016]图4是本专利技术多肽降低L929细胞内ROS含量的实验结果。
[0017]图5是本专利技术多肽对UVB诱导L929细胞DNA损伤的实验结果。
[0018]图6是本专利技术多肽减少UVB辐射L929细胞凋亡的实验结果。
[0019]图7是本专利技术多肽对UVB诱导L929细胞内caspase蛋白影响。
具体实施方式
[0020]为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步详细的描述。
[0021]实施例一本专利技术公开了一种多肽，其由鲟鱼鱼皮中提取得到，提取方法如公开号为CN113527467A的专利中记载，经过测序得到本专利技术多肽的氨基酸序列为：DPFRHY（如SEQ ID NO:1所示）。
[0022]采用Fmoc固相方法合成本专利技术多肽，使用HPLC和MALDI
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TOF
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MSMALDI
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TOF对合成多肽纯度和分子量进行鉴定。如图1所示，HPLC鉴定DPFRHY的纯度达98.126%。如图2所示，经MALDI
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TOF
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MSMALDI
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TOF确定相对分子质量为833.40。
[0023]采用Isoelectric Point Calculator 2.0、ToxinPred、innovagen和SwissADME等网络服务器对DPFRHY的等电点、潜在毒性、溶解性、胃肠道吸收性、血脑屏障穿透性等理化性质进行分析。经预测DPFRHY等电点为7.1，无毒性，易溶于水，胃肠吸收率低，不可透过血脑屏障。
[0024]本专利技术多肽具有抗光损伤的性能，具体实验过程如下详述。
[0025]1、DPFRHY对UVB暴露L929细胞活性的影响（1）实验过程：取生长状态良好的L929细胞按密度为1
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105 cfu/mL接种到96孔细胞板中，每孔100 μL完全培养基（RPMI1640含10%FBS和1%双抗）过夜培养。待细胞贴壁完全后，吸弃培养基，加入L929不完全培养基（RPMI1640含3%FBS和1%双抗），培养箱中饥饿培养12 h。吸弃96孔板中培养基，加入PBS清洗残留培养基，随后加入20 μL PBS浸没细胞并在紫外辐照仪进行UVB辐照（40 mJ/cm2）。照射后加入含不同浓度DPFRHY多肽（0
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125 μg/mL）的不完全培养基培养24 h。以未照射UVB组为对照组。随后进行细胞活性检测，方法参照CellTiter 96
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Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay试剂盒（Promega, Madison, WI, USA）说明书。
[0026]（2）实验结果：如图3所示，与UVB照射组相比较，孵育DPFRHY组在用药浓度为31.25 和62.5 μg/mL时，细胞活性具有显著性差异，因此DPFRHY表现出良好的UVB损伤修复活性，可以提高UVB辐射L929细胞成活率。
[0027]2、L929细胞ROS含量测定（1）实验过程：将L929细胞接种至96孔细胞板，经培养过夜并饥饿处理12 h后，用37℃预热的PBS洗涤2次，每孔加入100 μL终浓度为20 μmol/L DCFH
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DA的无酚红RPMI1640培养基（不含血清），避光孵育30 min。弃去培养基，100 μL PBS重复洗涤3次，加入20 μL PBS并进行UVB紫外辐射（100 mJ/cm2）。弃去PBS，加入含不同浓度DPFRHY多肽（0
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62.5 μg/mL）的不完全培养基，将96孔板置于细胞培养箱中孵育1h后，488 nm处激发、525 nm处发射，
酶标仪检测荧光值。
[0028]（2）实验结果：本实验通过DCFH
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DA荧光探针考察其清除细胞内ROS能力。实验结果如下图4所示，UVB可诱导L929细胞内ROS含量，15.525～62.5 μg/mL DPFRHY表现显著的ROS清除活性，并呈现良好的剂量效应关系，可见本专利技术多肽可降低L929细胞内ROS含量。
[0029]3、L929细胞彗星实验单细胞凝胶电泳又称彗星实验，可用来检测DNA损伤。
[0030]（1）实验过程：L929细胞接种至6孔细胞板，经培养过夜并饥饿处理12 h后，加入PBS清洗残留培养基，随后加入20 μL PB本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，其氨基酸序列为：DPFRHY。2.一种化妆品，其特征在于，包括权利要求1所述的多肽。3.如权利要求2所述的化妆品，其特征在于：所述的多肽的浓度为15.5
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62.5 μg/mL。4.一种胶原多肽口服液，其特征在于，包括权利要求1所述的多...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈贝，刘智禹，王勤，于蕾，乔琨，许旻，苏永昌，蔡水淋，刘淑集，崔路路，
申请(专利权)人：福建省水产研究所福建水产病害防治中心，
类型：发明
国别省市：