一种人肝细胞癌细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种人肝细胞癌细胞株及其应用，该细胞株命名为人肝细胞癌细胞株HCCP

【技术实现步骤摘要】
一种人肝细胞癌细胞株及其应用


[0001]本专利技术涉及生物学和肿瘤学领域；涉及一种人肝细胞癌细胞株及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]肝细胞癌是全球发病率前五、死亡率前四的恶性癌症，给全球医疗系统带来沉重的负担。因早期肝癌缺乏典型症状，大部分患者在初次诊断时已发生了进展和转移，无法进行根治性手术。经导管动脉化学栓塞、经皮酒精注射、局部放疗、射频消融是常用的肝癌局部姑息治疗方法。肝癌细胞对传统化疗药物敏感性较低，以索拉菲尼、仑伐替尼和瑞戈非尼为代表的新型多激酶抑制剂对延长肝癌患者生存时间有一定益处。总体来说，肝癌病人的预后仍然很差，五年总体生存率低于6％，急需通过深入的科学研究寻求更有效的药物以进一步提高肝癌患者的生存质量。
[0003]人肝癌细胞株是进行肝癌研究中常用的工具。人肝癌细胞系保留了肝癌的生物学行为，且可以在体外连续传代并通过细胞生物学手段实时监测细胞对各类药物处理的反应。同时，一部分肝癌细胞系可以在实验动物体内形成皮下异位移植瘤，更少数的肝癌可以在肝脏原位形成原位移植瘤并自发向肺部转移，可用于肝癌治疗的系统性评价。
[0004]但原发性肝癌具有较大的异质性，肝炎病毒感染、酒精滥用、肝脂肪化、肝纤维化、药物毒性等多种因素综合影响了疾病的发展，导致来源于不同患者的肝癌细胞株常表现出显著不同的肿瘤生物学特征。这种高度异质性促使科研工作者需要在研究过程中必须同时使用多种肝癌细胞株以确保研究结果具有较为广泛的适用性。而且，目前可以同时开展体外传代、皮下异位移植瘤、肝原位移植瘤和肺部转移模型的肝细胞癌细胞株较少，且肺部转移用时较长(两个月以上)，急需建立新的、能快速经肝脏向肺部转移的肝细胞癌细胞株以确保研究者可以覆盖更多肝细胞癌类型。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种人肝细胞癌细胞株及其构建方法和应用。
[0006]本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0007]一种人肝细胞肝癌细胞株，该细胞株命名为人肝细胞癌细胞株HCCP
‑
ZJ，于2021年4月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C202188。
[0008]本专利技术还提供如上所述的人肝细胞癌细胞株的子代细胞。
[0009]本专利技术还提供如上所述的人肝细胞癌细胞株的用途，包括：
[0010]a.用于肝癌发生、发展、转移及治病机理的研究；
[0011]b.制备肿瘤细胞模型或制备肿瘤动物模型；
[0012]c.体外筛选和/或体外评价制备的肿瘤治疗药物；其中，筛选肿瘤治疗药物的方法可以为：通过向所述人肝细胞癌细胞株培养基中添加不同肿瘤治疗药物，观察细胞形态变化，获得初步有效的候选药物。然后，将候选药物施药于所述细胞，计算筛选出来的有效药
物的半数抑制浓度(I50)，选择IC50最低的药物进一步作用于动物模型，与未施药组动物的存活期、肿瘤大小、转移情况等进行比较，筛选获得潜在的治疗药物；
[0013]d.开发肿瘤药物靶点，如特异性标志的流式抗体，基因检测试剂盒等；
[0014]e.制备肿瘤诊断产品；
[0015]f.体外筛选肿瘤生物治疗药物/试剂；所述的肿瘤生物治疗药物/试剂为肿瘤疫苗；
[0016]g.体外开发检测肿瘤相关生物工程产品；所述的肿瘤相关生物工程产品可以为肝癌特异性的分子诊断PCR试剂盒，荧光原位杂交试剂盒等。
[0017]进一步地，所述肿瘤动物模型包括动物肝癌皮下异位移植瘤模型、肝原位癌模型和肺部转移模型。所述肝癌为肝细胞性肝癌。通过将一定数量的所述人肝细胞癌细胞接种于免疫缺陷小鼠的皮下，获得肝癌皮下异位移植瘤模型。通过将一定数量的所述人肝细胞癌细胞接种于免疫缺陷小鼠的肝左页，获得肝原位癌模型，肝原位癌模型进展至疾病末期(一个月后)，小鼠的肺部会形成转移病灶，得到肝癌肺部转移模型。
[0018]进一步地，所述的动物为免疫缺陷小鼠(如裸小鼠)。
[0019]本专利技术还提供所述人肝细胞癌细胞株的构建方法，包括以下步骤：
[0020]在层流手术室获取新鲜的肝癌组织手术样本(0.5mm
×
0.5mm
×
0.5mm)后，立刻保存于 0.5ml的4℃的无菌William
’
E培养液中，并于0.5小时内转运至生物安全柜进行接下来的无菌操作。首先将肝癌组织机械分离，再用1ml组织消化液(含有2mg/ml的Ⅳ型胶原酶、0.02mg/ml
ꢀⅠ
型核酸酶、10％胎牛血清、5ng/ml重组人肝细胞生长因子、0.5U/ml重组人胰岛素、1.6μmol/L 地塞美松磷酸钠、100U/ml青霉素、100μg/ml硫酸链霉素、0.25μg/ml两性霉素B的William
’
E 培养液)在37℃震荡的条件下消化3小时。将消化后的细胞悬浊液通过70μm滤网过滤获取单细胞悬液后，1200rpm离心5分钟，弃上清，获取细胞沉淀。用PH7.4的磷酸盐缓冲液将细胞清洗3遍后，重悬于2ml完全培养基(含有10％胎牛血清、5ng/ml重组人肝细胞生长因子、0.5U/ml 重组人胰岛素、1.6μmol/L地塞美松磷酸钠、100U/ml青霉素、100μg/ml硫酸链霉素、0.25μg/ml 两性霉素B的William
’
E培养液)并种植于已包被鼠尾胶原的六孔板中，置于含有5vol％CO2的37℃细胞培养箱中静置培养。待24小时后，换液并洗去未贴壁细胞，之后每3天更换一次培养液直至细胞生长至80％接合度，按照1:5的比例传代。传代至30代后，获得形貌均一的可稳定传代的细胞株，并可以用含有10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml硫酸链霉素的DMEM 高糖培养基进行培养。
[0021]本专利技术的有益效果是：本专利技术的人肝细胞癌细胞株可以在体外用常规细胞培养的条件传代，体外性状稳定，并且符合临床肿瘤生物学特性。所述人肝细胞癌细胞株具有成瘤性，可以制备肝癌皮下异位移植瘤模型、肝原位癌模型、肝癌肺转移模型，均能用于肝癌发生发展的机理研究和药物效果的体内评估。所述肝细胞癌细胞株形成肝原位肿瘤和肺转移的速度快，有利于科学研究的开展。另外，所述肝细胞癌细胞株可用于肝癌药物效果的体外评价。总的来说，所述人肝细胞癌细胞株可用于指导临床用药，有利于发现新的抗肝癌药物，具有良好的科研价值和经济效益。
附图说明
[0022]图1为HCCP
‑
ZJ在光镜下的细胞形态图。
[0023]图2为HCCP
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ZJ、LM3(商品化肝癌细胞系)、Huh1(商品化肝癌细胞系)的细胞生长曲线图。
[0024]图3为HCCP
‑
ZJ、LM3(商品化肝癌细胞系)、Huh1(商品化肝癌细胞系)的索拉菲尼sorafenib (左)、仑伐替尼lenvatinib(右)的细胞活力
‑
药物剂量曲线图。
[0025]图4为HCCP
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人肝细胞癌细胞株，该细胞株命名为人肝细胞癌细胞株HCCP
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ZJ，于2021年4月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C202188。2.根据权利要求1所述的人肝细胞癌细胞株，其特征在于，所述的人肝细胞癌细胞株的第八对染色体短臂缺失。3.一种权利要求1
‑
2任一项所述人肝细胞癌细胞株的子代细胞。4.一种权利要求1任一项所述人肝细胞癌细胞株的用途，其特征在于，包括：a.用...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书七页附图五页，
申请(专利权)人：济南微生态生物医学省实验室，
类型：发明
国别省市：