分离的具有较小尺寸的线粒体和包裹分离的线粒体的基于脂质膜的囊泡制造技术

根据本发明专利技术，提供了一种包含具有较小尺寸的线粒体的群体和将线粒体包裹在封闭空间中的基于脂质膜的囊泡的群体的组合物，以及生产所述组合物的方法。所述组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】分离的具有较小尺寸的线粒体和包裹分离的线粒体的基于脂质膜的囊泡
[0001]与相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年12月27日提交的日本申请号2019
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239479的优先权利益，其全部内容通过参考并入本文。


[0003]本专利技术涉及分离的具有较小尺寸的线粒体和包裹分离的线粒体的基于脂质膜的囊泡。

技术介绍

[0004]线粒体功能障碍例如呼吸链复合体功能障碍，是造成线粒体疾病和衰老的主要原因。线粒体功能的降低影响许多器官中主要与线粒体疾病和年龄相关疾病有关的细胞。为了克服这个问题，已尝试将线粒体引入到细胞中(US9,603,872B)。在专利文献1中，将线粒体与lipofectamine 2000试剂混合以获得线粒体与lipofectamine的脂质复合体(即lipofectamine粒子与游离形式的线粒体粒子的缔合)。在US9,603,872B中，证实了所得到的脂质复合体被引入到细胞中。然而，在US9,603,872B中，引入的脂质复合体的生理作用尚未得以证实。
[0005]已开发了一种被称为微流道装置的技术，用于通过使用宽度为100至200μm的通道形成脂质体(Kimura N.等，ACS Omega,3:5044
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5051,2018)。根据Kimura N.等，2018，可以获得基于脂质膜且粒度为约10nm至100nm的囊泡。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了包裹分离的线粒体的基于脂质膜的囊泡以及生产所述囊泡的方法。
[0007]本专利技术人获得了一种包含包裹线粒体的基于脂质膜的囊泡的群体的组合物。可以设想所述囊泡各自具有由脂质膜形成的用于包含线粒体的袋状膜结构(封闭空间)。
[0008]例如，本文中提供了下述专利技术。
[0009](1)一种组合物，其包含包裹线粒体的基于脂质膜的囊泡的群体。
[0010](2)根据条目(1)所述的组合物，其中所述基于脂质膜的囊泡的群体具有当通过动态光散射测定时在小于1μm处具有峰的粒度分布。
[0011](3)根据条目(2)所述的组合物，其中所述基于脂质膜的囊泡的群体具有当通过动态光散射测定时在小于500nm处具有峰的粒度分布。
[0012](4)根据条目(1)至(3)中的任一条所述的组合物，其中所述基于脂质膜的囊泡的群体具有小于0.5的PDI。
[0013](5)根据条目(1)至(4)中的任一条所述的组合物，其中被包裹的线粒体可以被并入到与其接触的细胞的细胞质中，并且所述线粒体可以与所述细胞质中的内源线粒体融合。
[0014](6)根据条目(1)至(6)中的任一条所述的组合物，其用于将线粒体递送到细胞内。
[0015](7)根据条目(6)所述的组合物，其用于提高细胞中线粒体的呼吸活性。
[0016](8)一种用于生产根据条目(1)所述组合物的方法，所述方法包括：
[0017]使包含分离的线粒体的水性溶液和包含可以形成脂质膜的脂质的乙醇溶液在微流道装置内的汇合通道中彼此接触，以混合所述溶液。
[0018](9)根据条目(8)所述的方法，其中所述微流道装置包含用于促进在所述汇合通道中彼此接触的溶液的混合的流动通道，所述流动通道具有挡板结构。
[0019]此外，还提供了下述专利技术。
[0020][1]一种组合物，其包含线粒体群体，其中所述群体具有当通过动态光散射测定时在小于1μm处具有峰的粒度分布。
[0021][2]根据条目[1]所述的组合物，其中所述群体具有当通过动态光散射测定时在小于500nm处具有峰的粒度分布。
[0022][3]根据条目[1]或[2]所述的组合物，其中所述群体具有小于0.5的PDI。
[0023][4]一种组合物，其包含包裹线粒体的基于脂质膜的囊泡的群体，其中所述基于脂质膜的囊泡的群体具有当通过动态光散射测定时在小于1μm处具有峰的粒度分布。
[0024][4A]根据条目[1]所述的组合物，其中50％或更多的所述线粒体被各自包裹在基于脂质膜的囊泡中。
[0025][5]根据条目[4]或[4A]所述的组合物，其中所述基于脂质膜的囊泡的群体具有当通过动态光散射测定时在小于500nm处具有峰的粒度分布。
[0026][6]根据条目[4]至[5](即条目[4]、[4A]和[5])中的任一条所述的组合物，其中所述基于脂质膜的囊泡的群体具有小于0.5的PDI。
[0027][7]根据条目[4]至[6]中的任一条所述的组合物，其中被包裹的线粒体可以被并入到与其接触的细胞的细胞质中，并且所述线粒体可以与所述细胞质中的内源线粒体融合。
[0028][8]根据条目[4]至[7]中的任一条所述的组合物，其用于将线粒体递送到细胞内。
[0029][9]根据条目[8]所述的组合物，其用于提高细胞中线粒体的呼吸活性。
[0030][10]一种用于生产根据条目[4]或[4A]所述的组合物的方法，所述方法包括：
[0031]使包含分离的线粒体的水性溶液和包含可以形成脂质膜的脂质的乙醇溶液在微流道装置内的汇合通道中彼此接触，以混合所述溶液。
[0032][11]根据条目[10]所述的方法，其中所述微流道装置包含用于促进在所述汇合通道中彼此接触的溶液的混合的流动通道，所述流动通道具有挡板结构。
[0033]在本专利技术中，线粒体可以被包裹在适用于药物制剂的囊泡中。含有具有单分散粒度分布(即PDI≤0.5)和/或在尺寸分布中在小于1μm处具有峰的线粒体的基于脂质膜的纳米囊泡的群体，也适用于药物制剂。
[0034][12]一种测量分离的线粒体或被包裹的线粒体中的线粒体DNA水平的方法，所述方法包括在包含所述分离的线粒体或被包裹的线粒体的样品中扩增所述线粒体DNA的至少一部分以获得所扩增的DNA的扩增子，并对所述扩增子进行计数以获得所述线粒体DNA水平。
[0035][13]根据条目[12]所述的方法，其还包括将所述测量到的线粒体DNA水平与标准
值进行比较。
附图说明
[0036]图1示出了通过动态光散射(DLS)和ζ电位(ζ)所测定的从细胞分离的线粒体的悬液的粒度分布和PDI。a)示出了在冷冻之前分离的线粒体(在使用时制备的产物)的数据，b)示出了在冻融过程后分离的线粒体(冷冻产物)的数据。
[0037]图2示出了使用荧光染料(TMRE)检测的在使用时制备的产物和冷冻产物中线粒体的极化的结果。从每个在使用时制备的产物和冷冻产物观察荧光。
[0038]图3的子图a)示出了使用微流道装置和后续的透析来制备纳米囊泡的方案。图3的子图b)示出了通过使含脂质有机相和水性缓冲液(水性相)在微流道装置内的汇合通道中彼此接触以混合它们来制备纳米粒子的方案；所述有机相和水性相的组成及其流速，通过DLS测定的所得到的纳米粒子的粒度分布及其PDI和ζ电位(ζ)。
[0039]图4示出了通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包含线粒体群体，其中所述群体具有当通过动态光散射测定时在小于1μm处具有峰的粒度分布。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述群体具有当通过动态光散射测定时在小于500nm处具有峰的粒度分布。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述群体具有小于0.5的PDI。4.一种组合物，其包含包裹线粒体的基于脂质膜的囊泡的群体，其中所述基于脂质膜的囊泡的群体具有当通过动态光散射测定时在小于1μm处具有峰的粒度分布。5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述基于脂质膜的囊泡的群体具有当通过动态光散射测定时在小于500nm处具有峰的粒度分布。6.根据权利要求4或5所述的组合物，其中所述基于脂质膜的囊泡的群体具有小于0.5的PDI。7.根据权利要求4至6中的任一项所述的组合物，其中被包裹的线粒体被并入到与其接触的细胞的细胞质中，并且所述线粒体与所述细胞质中的内源线粒体融合。8....

【专利技术属性】
技术研发人员：菅沼正司，山田勇磨，原岛秀吉，佐佐木大辅，日比野光惠，太田善浩，
申请(专利权)人：卢卡科学株式会社，
类型：发明
国别省市：