一种提高PF1022A发酵产量的方法技术

本发明专利技术提供了一种提高PF1022A发酵产量的方法，以可产PF1022A的座坚壳菌为生产菌株，在发酵培养基进行有氧发酵，所述发酵培养基中包括可同化碳源，可同化氮源和无机盐，其中，所述可同化碳源中含有固体麦精。本发明专利技术所提供的技术方案简单易行，提高了PF1022A的生产效率，极大的提高了PF1022A的产量(发酵产量最高可达6000μg/mL以上)，降低了生产成本，便于PF1022A大规模工业化生产。PF1022A大规模工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种提高PF1022A发酵产量的方法


[0001]本专利技术涉及工业微生物发酵
，具体涉及一种提高PF1022A发酵产量的方法。

技术介绍

[0002]艾默德斯(Emodepside)是一种以PF1022A为前体的半合成衍生物，对无脊柱动物(如线虫、蛔虫)等有杀伤作用，拜尔动物保健公司已研制出Emodepside分别与吡喹酮(Profender)及妥曲珠利(Procox)的组合物用于猫和狗的驱肠虫药，Profender(与吡喹酮联用)已于2007年在美国上市。拜耳公司与DNDi合作开发Emodepside，用于治疗盘尾丝虫病引起的“河盲症”(人用药)，2016年进入健康志愿者1期试验，2017年完成了单次递增剂量研究，2018年底完成了多次递增剂量研究。
[0003]PF1022A作为合成艾默德斯的前体原料，市场前景非常广阔，备受关注。目前，PF1022A合成有固相合成法和生物合成方法。固相合成法步骤繁琐及工艺复杂，不适合大规模生产。而关于PF1022A发酵生产报道比较少，PF1022A的产量又比较低。针对此现状，我公司选育出一株全新的PF1022A产生菌，具体公开在CN201711276671.0，该菌株具备生产能力高、遗产稳定性高等优势，但其公开的发酵方法仍然存在发酵产量不够高、发酵成本高等问题，不利于大规模工业化生产。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种提高PF1022A发酵产量的方法，以可产PF1022A的座坚壳菌为生产菌株，在发酵培养基中进行有氧发酵，所述发酵培养基中包括可同化碳源，可同化氮源和无机盐，其中，所述可同化碳源中含有固体麦精。
[0005]在优选的实施方案中，所述固体麦精在发酵培养基中的含量为70
‑
200g/L，进一步优选为100
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200g/L，更优选为140
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200g/L，最优选160g/L。
[0006]在优选的实施方案中，所述可同化的碳源进一步含有选自葡萄糖、麦芽糊精、麦芽糖、大豆油、可溶性淀粉、玉米淀粉之一或上述任何两种或多种物质的组合。
[0007]在优选的实施方案中，所述可同化的碳源进一步含有大豆油和麦芽糊精，优选为大豆油。
[0008]在优选的实施方案中，所述可同化的氮源选自酵母粉、棉籽饼粉、小麦胚芽粉、酵母提取粉、黄豆饼粉、花生饼粉之一或上述任何两种或多种物质的组合。
[0009]在优选的实施方案中，所述可同化的氮源为酵母粉和棉籽饼粉的组合。
[0010]在优选的实施方案中，所述无机盐选自硫酸锌、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸铜、硫酸锰、硫酸氢二铵、氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化镍、碳酸钙、氯化钙之一或任何两种或多种物质的组合。
[0011]在优选的实施方案中，所述无机盐为碳酸钙、氯化钠和硫酸镁的组合。
[0012]在优选的实施方案中，所述发酵培养基包含：75
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210g/L可同化的碳源，15
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40g/L
可同化的氮源，6
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10g/L无机盐；优选的，所述发酵培养基包含：105
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210g/L可同化的碳源，15
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40g/L可同化的氮源，6
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10g/L无机盐；进一步优选的，所述发酵培养基包含：145
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200g/L可同化的碳源，15
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40g/L可同化的氮源，6
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10g/L无机盐。
[0013]在优选的实施方案中，所述发酵培养基包含：固体麦精，大豆油，棉籽饼粉，酵母粉，氯化钠，硫酸镁和碳酸钙。
[0014]在优选的实施方案中，所述发酵培养基中大豆油为5
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10g/L；酵母粉为5
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10g/L；棉籽饼粉为10
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30g/L；氯化钠为2
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3g/L；硫酸镁为2
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3g/L；碳酸钙为2
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4g/L。
[0015]在优选的实施方案中，所述发酵培养基含有固体麦精70
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200g/L，优选为100
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200g/L，更优选为140
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200g/L，最优选160g/L；大豆油10g/L；棉籽饼粉25g/L；酵母粉10g/L；氯化钠2g/L；硫酸镁2g/L；碳酸钙2g/L。
[0016]在优选的实施方案中，所述发酵的培养温度为22
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28℃，优选24
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26℃，更优选25℃；所述发酵的培养时间6
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10天，优选7
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10天，最优选9天。
[0017]在优选的实施方案中，所述可产PF1022A的座坚壳菌为座坚壳菌(Rosellinia sp.)HS
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NF
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1412Z，保藏编号为CGMCC NO.13893。
[0018]本专利技术中所述的g/L是指1L发酵培养基中所添加的相关物质的重量。
[0019]本专利技术人在研究过程中，经过多次试验，意外发现：当发酵培养基中含有固体麦精(尤其是一定范围内)作为碳源时，PF1022A发酵产量能够得到显著提高(发酵产量最高可达6000μg/mL以上)；当不含固体麦精作为碳源，碳源为别的物质(例玉米淀粉，蔗糖、麦芽糖等)时，均达不到这个效果。本专利技术所提供的技术方案简单易行，提高了PF1022A的生产效率，极大的提高了PF1022A的产量，降低了生产成本，便于PF1022A大规模工业化生产。
具体实施方式：
[0020]下面对本专利技术实施例中的技术方案进行描述，所描述的实施例仅仅为本专利技术的一部分。以下对比例及实施例用于说明本专利技术，但不能用来限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0021]本专利技术中，所述产PF1022A菌为HS
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NF
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1412Z，本专利技术的实施例使用的菌种为座坚壳菌(Rosellinia sp.)HS
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NF
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1412Z，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.13893，公开于CN201711276671.0。本专利技术中，所述的各种材料和试剂都是本领域常用的材料和试剂，均可以通过常规的商业途径获得。
[0022]PF1022A高效液相检测方法：色谱柱采用依利特C18硅胶柱(5μm，4.6*250mm)。以乙腈：水(体积比为80:20)为流动相进行分离，流速1.0mL/min，紫外波长218nm，进样量20uL，柱温30℃，PF1022A的保留时间为10.5min左右，运行时间为PF1022A保留时间的1.9倍。
[0023]制备例1
[0024](1)斜面培养基的制备：斜面采用土豆葡萄糖琼脂(PDA)培养基：土豆200g，切成小块，加水1000本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高PF1022A发酵产量的方法，其特征在于，以可产PF1022A的座坚壳菌为生产菌株，在发酵培养基中进行有氧发酵，所述发酵培养基中包括可同化碳源，可同化氮源和无机盐，其中，所述可同化碳源中含有固体麦精。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固体麦精在发酵培养基中的含量为70
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200g/L，进一步优选为100
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200g/L，更优选为140
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200g/L，最优选160g/L。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的可同化的碳源进一步含有选自葡萄糖、麦芽糊精、麦芽糖、大豆油、可溶性淀粉、玉米淀粉之一或上述任何两种或多种物质的组合，优选为大豆油和麦芽糊精，更优选为大豆油。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的方法，其特征在于，所述的可同化的氮源选自酵母粉、棉籽饼粉、小麦胚芽粉、酵母提取粉、黄豆饼粉、花生饼粉之一或上述任何两种或多种物质的组合，优选为酵母粉和棉籽饼粉的组合。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的方法，其特征在于，所述的无机盐选自硫酸锌、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸铜、硫酸锰、硫酸氢二铵、氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化镍、碳酸钙、氯化钙之一或任何两种或多种物质的组合，优选为碳酸钙、氯化钠和硫酸镁的组合。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包含：...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐倩，项仁鑫，杨小虎，方佳双，陶亮亮，应灵萍，孙鹏，杨志清，
申请(专利权)人：浙江海正药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：