CD38敲除的原代和扩增的人NK细胞的生成制造技术

公开了包含分化簇38(CD38)基因的敲除的遗传修饰的NK细胞和使用其治疗癌症的方法，所述癌症包括但不限于多发性骨髓瘤、急性髓性白血病(AML)、T细胞急性成淋巴细胞性白血病(T

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD38敲除的原代和扩增的人NK细胞的生成
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年10月31日提交的美国临时申请第62/928,524号的权益，其明确地通过引用并入本文。

技术介绍

[0003]近年来癌症免疫治疗得到了很大进展。遗传修饰的嵌合抗原受体(CAR)T细胞是工程化免疫细胞成功应用于癌症免疫治疗的一个很好的实例。这些细胞最近被FDA批准用于治疗CD19
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B细胞恶性肿瘤，但是迄今为止，成功仅限于携带少数可靶向抗原的疾病，并且靶向这些有限的抗原库易于因免疫逃逸而失败。此外，由于同种异体T细胞引起的移植物抗宿主疾病的风险，CAR T细胞已经集中于使用自体T细胞。相比之下，NK细胞能够以不依赖于抗原的方式杀死肿瘤靶点并且不会引起GvHD，这使得它们成为癌症免疫治疗的良好候选。当与抗体组合时，NK细胞和抗体的靶向和效应机制与CAR T细胞的相似。不幸的是，对于一些癌症，目前的治疗不仅靶向癌症，而且还会耗尽患者的NK细胞群。例如，达雷木单抗(daratumumab)靶向在多发性骨髓瘤细胞和白血病上以升高的水平发现的CD38。达雷木单抗的抗肿瘤活性依赖于NK细胞。然而，CD38也以高水平在NK细胞的表面上表达，并且达雷木单抗的施用导致NK细胞自相残杀，从而限制了达雷木单抗的有效性。因此，需要能够克服NK细胞自相残杀问题的新的免疫疗法和/或治疗方法。

技术实现思路

[0004]公开了涉及包含CD38基因敲除的遗传修饰的NK细胞的方法和组合物。
[0005]在一个方面，本文公开了治疗、减轻、抑制、减少、改善和/或预防受试者中的癌症和/或转移(例如，多发性骨髓瘤，白血病(包括但不限于急性髓性白血病(AML)、T细胞急性成淋巴细胞性白血病(T
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ALL)或母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN))的方法，其包含向受试者施用已被修饰以包含CD38基因敲除的NK细胞。在一些方面，治疗、减轻、抑制、减少、改善和/或预防癌症和/或转移的方法可以进一步包含向受试者施用靶向CD38的小分子、抗体、肽、蛋白质或siRNA(例如，抗CD38抗体，包括但不限于达雷木单抗、艾萨妥昔单抗(isatuximab)、TAK
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079和/或MOR202)。
[0006]本文还公开了治疗、减轻、抑制、减少、改善和/或预防前述任一方面的癌症和/或转移(例如，多发性骨髓瘤、白血病(包括但不限于急性髓性白血病(AML)、T细胞急性成淋巴细胞性白血病(T
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ALL)或母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN))的方法，其进一步包含向受试者施用血管生成抑制剂(例如，泊马度胺(Pomalidomide)、来那度胺(Lenalidomide)或阿普斯特(Apremilast))和类固醇(例如，糖皮质激素，包括但不限于地塞米松(dexamethasone)、倍他米松(betamethasone)、泼尼松龙(prednisolone)、methodlprenisolone、曲安西龙(triamcinolone)或醋酸氟氢可的松(fludrocortisone acetate))。
[0007]在一个方面，本文公开了治疗、减轻、抑制、减少、改善和/或预防不直接表达CD38
但其中可靶向癌症微环境中的其它细胞(包括但不限于髓源性抑制细胞(MDSC))的癌症和/或转移的方法，其包含向受试者施用已被修饰以包含CD38基因敲除的NK细胞。
[0008]在一个方面，本文公开了遗传修饰NK细胞(例如，原代或扩增的NK细胞)的方法，其包含获得对NK细胞(例如，CD38)中的靶DNA序列具特异性的向导RNA(gRNA)；以及b)通过电穿孔向靶NK细胞中引入核糖核蛋白(RNP)复合物，该核糖核蛋白复合物包含与相应CRISPR/Cas向导RNA复合的2类CRISPR/Cas核酸内切酶(Cas9)，该CRISPR/Cas向导RNA与NK细胞的基因组DNA内的靶序列杂交，产生CD38敲除的原代或扩增的NK细胞。
[0009]本文还公开了前述任一方面的方法，其中通过插入或缺失一个或多个碱基对、通过异源DNA片段(例如，供体多核苷酸)的插入、通过内源DNA片段的缺失、通过内源DNA片段的倒位或易位或其组合来修饰NK细胞的基因组。
[0010]在一个方面，本文公开了遗传修饰前述任一方面的NK细胞的方法，其中在转导(例如，电穿孔)之前，将NK细胞(例如，原代或扩增的NK细胞)在IL
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2和/或辐射的饲养细胞存在下孵育4、5、6或7天。
[0011]本文还公开了遗传修饰前述任一方面的NK细胞的方法，其进一步包含在电穿孔后用辐射的表达膜结合白介素
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21(mbIL
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21)的饲养细胞扩增修饰的NK细胞。
[0012]在一个方面，本文公开了通过前述任一方面的方法制备的修饰的NK细胞。在一个方面，修饰的NK细胞可以包含编码CD38的基因的敲除。例如，在另一方面，本文公开了包含如本文公开的编码分化簇38(CD38)的基因的敲除的遗传修饰的NK细胞，其用作药物，优选地用于治疗、减轻、抑制、减少、改善和/或预防癌症和/或转移的方法。在另一方面，本文公开了包含如本文公开的编码分化簇38(CD38)的基因的敲除的遗传修饰的NK细胞，其用于(i)在有需要的受试者中增加氧化呼吸能力的方法或(ii)在有需要的受试者中限制细胞外NAD水解和改善氧化还原呼吸能力的方法。以相同的方式，本文还公开了包含如本文公开的编码分化簇38(CD38)的基因的敲除的遗传修饰的NK细胞在制备药物中的用途，优选地在制备用于治疗、减轻、抑制、减少、改善和/或预防癌症和/或转移的药物中的用途。在另一方面，本文公开了包含如本文公开的编码分化簇38(CD38)的基因的敲除的遗传修饰的NK细胞在制备用于(i)在有需要的受试者中增加氧化呼吸能力或(ii)在有需要的受试者中限制细胞外NAD水解和改善氧化还原呼吸能力的药物中的用途。
[0013]本文还公开了治疗、减轻、抑制、减少、改善和/或预防癌症和/或转移(例如，多发性骨髓瘤、白血病(包括但不限于急性髓性白血病(AML)、T细胞急性成淋巴细胞性白血病(T
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ALL)或母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN))的方法，其包含向患有癌症的受试者施用前述任一方面的修饰的NK细胞(如CD38敲除的NK细胞)。在一些方面，治疗、减轻、抑制、减少、改善和/或预防癌症和/或转移的方法可以进一步包含向受试者施用靶向CD38的小分子、抗体、肽、蛋白质或siRNA(例如，抗CD38抗体，包括但不限于达雷木单抗、艾萨妥昔单抗、TAK
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079和/或MOR202)。
[0014]在一个方面，本文公开了治疗、减轻、抑制、减少、改善和/或预防癌症和/或转移(例如，多发性骨髓瘤、白血病(包括但不限于急性髓性白血病(AML)、T细胞急性成淋巴细胞性白血病(T
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ALL)或母细胞性浆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种治疗受试者中的癌症的方法，其包含向所述受试者施用已被修饰以包含CD38基因敲除的NK细胞。2.根据权利要求1所述的治疗癌症的方法，其中所述癌症包含多发性骨髓瘤、急性髓性白血病(AML)、T细胞急性成淋巴细胞性白血病(T
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ALL)或母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)。3.根据权利要求1或2所述的治疗癌症的方法，其进一步包含向所述受试者施用抗癌剂，所述抗癌剂包含靶向CD38的小分子、抗体、肽、蛋白质或siRNA。4.根据权利要求3所述的治疗癌症的方法，其中所述抗癌剂包含达雷木单抗(Daratumumab)、艾萨妥昔单抗(isatuximab)、TAK
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079或MOR202。5.根据权利要求3或4所述的治疗癌症的方法，其进一步包含向所述受试者施用血管生成抑制剂和类固醇。6.根据权利要求5所述的治疗癌症的方法，其中所述血管生成抑制剂包含泊马度胺(Pomalidomide)、来那度胺(Lenalidomide)或阿普斯特(Apremilast)。7.根据权利要求5所述的治疗癌症的方法，其中所述类固醇包含糖皮质激素。8.根据权利要求7所述的治疗癌症的方法，其中所述糖皮质激素包含地塞米松(dexamethasone)、倍他米松(betamethasone)、泼尼松龙(prednisolone)、methodlprenisolone、曲安西龙(triamcinolone)或醋酸氟氢可的松(fludrocortisone acetate)。9.一种将工程化的NK细胞过继转移至有需要的受试者的方法，所述方法包含a)获得待修饰的靶NK细胞；b)获得对靶DNA序列具特异性的gRNA；c)通过电穿孔向所述靶NK细胞中引入RNP复合物，所述RNP复合物包含与相应CRISPR/Cas向导RNA复合的2类CRISPR/Cas核酸内切酶(Cas9)，所述CRISPR/Cas向导RNA与所述靶NK细胞的基因组DNA内的靶序列杂交，产生工程化的NK细胞；以及d)将所述工程化...

【专利技术属性】
技术研发人员：迪恩，
申请(专利权)人：约翰霍普金斯大学，
类型：发明
国别省市：