用于诊断新冠肺炎的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种检测新冠病毒肺炎的特征多肽组合物，包括29种具有特定质荷比的特征多肽，通过分析所述特征多肽的表达情况，可判断该样本是否为新冠肺炎患者。本发明专利技术还提供根据该特征多肽组合物所制备的质谱模型、诊断新冠肺炎的产品等用途。本发明专利技术首次提出根据新冠肺炎患者/正常人、肺结核患者、具有新冠肺炎类型症状对照中寻找具有差异的多个特征蛋白组合，突破了传统的仅限于正常人和新冠肺炎患者中寻找特征多肽的研究思路，有效地避免与新冠肺炎症状相似的假阳性结果的感染，并具有操作简单，检测成本低，准确率高，有望用于新冠肺炎的大规模筛查。大规模筛查。大规模筛查。

【技术实现步骤摘要】
用于诊断新冠肺炎的试剂盒


[0001]本专利技术属于检测领域，涉及一种利用飞行时间质谱技术快速检测新型冠状病毒肺炎的技术。

技术介绍

[0002]冠状病毒是一类主要引起呼吸道、肠道疾病的病原体。这类病毒颗粒的表面有许多规则排列的突起，整个病毒颗粒就像一顶帝王的皇冠，因此得名“冠状病毒”。冠状病毒除人类以外，还可感染猪、牛、猫、犬、貂、骆驼、蝙蝠、老鼠、刺猬等多种哺乳动物以及多种鸟类。
[0003]目前为止，已知的人类冠状病毒共有六种。其中四种冠状病毒在人群中较为常见，致病性较低，一般仅引起类似普通感冒的轻微呼吸道症状。另外两种冠状病毒——严重急性呼吸综合征冠状病毒和中东呼吸综合征冠状病毒，也就是我们简称的SARS冠状病毒和MERS冠状病毒，可引起严重的呼吸系统疾病。
[0004]新型冠状病毒COVID
‑
19是以前从未在人体中发现的新型冠状病毒新毒株，其传播规律、感染机制、以及进化和变异规律仍然不清晰，为防治带来了困难。
[0005]为了预防新型冠状病毒(COVID
‑
19)肺炎的发生和流行，迅速采取措施，有效控制疫情的发展蔓延，新型冠状病毒肺炎的快速检测尤为重要。长期以来，对冠状病毒的鉴定都采用传统的微生物学检测方法，即形态学、生理生化特征及血清学鉴定。此方法虽然准确度高，但所需时间太长，最快也要十几个小时才能完成，难以适应快速检测的要求。以多重PCR为基础的核酸检测方法，对冠状病毒的早期诊断和传染源的发现具有重要意义。
[0006]基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix
‑
assisted laser desorption/ionization time
‑
of
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flightmassspectrometry，简称MALDI
‑
TOF MS)技术，是20世纪80年代末问世并迅速发展起来的一种质谱分析技术。其质量分析器是一个离子漂移管(ion dirfttube)，由离子源产生的离子首先被收集，在收集器中所有离子速度变为0，使用一个脉冲电场加速后进入无场漂移管，并以恒定速度飞向离子接收器，离子质量越大，到达接收器所用时间越长；离子质量越小，到达接收器所用时间越短。根据这一原理，可以把不同质量的离子按质荷比大小进行分离，准确检测多肽、蛋白质、核酸、多糖等生物大分子的分子质量和纯度，具有准确性高、灵活性强、通量大、检测周期短、性价比高的优点。
[0007]近年来，已经出现质谱技术来检测致病微生物或病毒的特征多肽或多肽的质谱技术。例如，中国专利申请CN102337223A，“产黄青霉抗真菌蛋白Pc
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Arctin及其制备方法”，公开了一种检测产黄青霉抗真菌蛋白Pc
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Arctin的MALDI
‑
TOF鉴定方法，其中从平板上挑取产黄青霉A096孢子接种于SGY液体培养基培养，预处理得到粗蛋白溶液在色谱柱上分离纯化，并在羧甲基阳离子交换色谱柱上分离纯化，收集各洗脱组分，各组分离心超滤浓缩至所需体积，以宛氏拟青霉为敏感受试指示菌，追踪抗真菌活性组分，确定的活性成分判断获得蛋白的纯度；割取SDS
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PAGE电泳图上的单一条带，进行MALDI
‑
TOF 鉴定。该方法仅适用于特定微生物，且需要多重蛋白纯化过程，最终用MALDI
‑
TOF鉴定特征多肽 Pc
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Arctin，其过程繁
琐，适用面窄，不能实现质谱检测病毒的目的。
[0008]中国专利申请201110154723、“MALDI TOF MS辅助鉴定单增李斯特氏菌的方法”和201110154469、“MALDI TOF MS辅助鉴定霍乱弧菌的方法”公开了一种利用MALDI TOF MS技术辅助鉴定细菌的方法，包括：预处理细菌培养物，采集所有菌株样品的MALDI TOF MS图谱，根据软件制备细菌标准图谱，使用相同的方法检测并采集待测细菌的图谱，以及比较二者图谱，根据匹配分数进行判定。由于该方法使用常规的处理(通过无水乙醇、甲酸和乙腈处理，并辅以离心，最后吸取上清液进行检测)，尽管其在一定程度上能表征该细菌的特征图谱，但由于其待测物中含有蛋白质、脂类、脂多糖和脂寡糖、 DNA、多肽及其它能被离子化的分子，其得到的图谱实质上是上述各种分子的图谱集合，因此既需要处理和比对的图谱信息量过大，并且因待检分子过于庞大而导致其图谱特征性偏低，只适用于某具体细菌而无法推广到其他大量的病毒检测中。
[0009]中国专利申请200880121570、专利技术名称“用于诊断和监测精神疾病的方法和生物标志物”报道了可以通过MALDI
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TOF质谱技术，检测包括流感病毒在内的近百种与精神疾病相关的生物肽。然而，该方法仅仅简单概括了各种可能的技术，其既没有报道具体方案，也没有报道冠状病毒的特定靶点，因此难以教导研究者通过MALDI
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TOF质谱技术来检测流感病毒。
[0010]因此，目前需要一种通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI
‑
TOF
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MS)来检测新型冠状病毒肺炎的特征多肽质谱模型以及用途。

技术实现思路

[0011]本专利技术第一个目的提供一组基于血清肽组学(peptidome)特征多肽的组合物，该特征多肽可以通过MALDI
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TOF质谱检测新冠病毒(COVID
‑
19)，其中该特征多肽组合物包括具有如下质荷比的25种特征多肽：5158m/z、5366m/z、5893m/z、6357m/z、6654m/z、6939m/z、7364m/z、7614m/z、8034m/z、 8043m/z、8226m/z、8425m/z、8560m/z、8986m/z、9626m/z、13719m/z、13765m/z、13886m/z、14049m/z、 14095m/z、14102m/z、15123m/z、15867m/z、28091m/z、28232m/z，或者包括具有如下质荷比的29 种特征多肽：5158m/z、5366m/z、5893m/z、6357m/z、6654m/z、6939m/z、7364m/z、7614m/z、8034m/z、 8043m/z、8226m/z、8425m/z、8560m/z、8986m/z、9626m/z、11435m/z、11495m/z、11523m/z、 11680m/z、13719m/z、13765m/z、13886m/z、14049m/z、14095m/z、14102m/z、15123m/z、15867m/z、 28091m/z、28232m/z。
[0012]在一个实施方案中，所述特征多肽组合物包括具有如下质荷比和多肽序列的19种特征多肽：
[0013]质荷比为6939m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.1所示的序列；
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测新冠肺炎的试剂盒，其包含由以下特征多肽组成的多肽组合物，或包含由以下特征多肽所制备的质谱模型：具有质合比5158m/z、5366m/z、5893m/z、6357m/z、6654m/z、6939m/z、7364m/z、7614m/z、8034m/z、8043m/z、8226m/z、8425m/z、8560m/z、8986m/z、9626m/z、13719m/z、13765m/z、13886m/z、14049m/z、14095m/z、14102m/z、15123m/z、15867m/z、28091m/z、28232m/z的特征多肽，或者具有质合比5158m/z、5366m/z、5893m/z、6357m/z、6654m/z、6939m/z、7364m/z、7614m/z、8034m/z、8043m/z、8226m/z、8425m/z、8560m/z、8986m/z、9626m/z、11435m/z、11495m/z、11523m/z、11680m/z、13719m/z、13765m/z、13886m/z、14049m/z、14095m/z、14102m/z、15123m/z、15867m/z、28091m/z、28232m/z的特征多肽。2.权利要求1所述的试剂盒，其中所述特征多肽的序列为：质荷比为6939m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.1所示的序列；质荷比为7614m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.2所示的序列；质荷比为8034m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.3所示的序列；质荷比为8226m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.4所示的序列；质荷比为8986m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.5所示的序列；质荷比为9626m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.6所示的序列；质荷比为13719m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.7所示的序列；质荷比为13765m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.8所示的序列；质荷比为13886m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.9所示的序列；质荷比为14049m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.10所示的序列；质荷比为14095m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.11所示的序列；质荷比为14102m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.12所示的序列；质荷比为15123m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.13所示的序列；质荷比为15867m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.14所示的序列；质荷比为28091m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.15所示的序列；质荷比为11435m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.16所示的序列；质荷比为11495m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.17所示的序列；质荷比为11523m/z的特征多肽，其多肽序列选自如SEQ ID No.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖璞，孙巍，乔亮，吕倩，马庆伟，
申请(专利权)人：北京毅新博创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：