一种由干酪素钠和多糖共组装形成醇溶蛋白纳米颗粒的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种由干酪素钠和多糖共组装形成醇溶蛋白纳米颗粒的制备方法，所述的纳米颗粒为醇溶蛋白与干酪素钠以及多糖进行共组装形成尺寸较小的颗粒。该方法制备的纳米颗粒平均尺寸随着所使用多糖的种类而变化，范围在30

【技术实现步骤摘要】
一种由干酪素钠和多糖共组装形成醇溶蛋白纳米颗粒的制备方法


[0001]本专利技术属于蛋白质复合物纳米颗粒制备
，具体涉及一种由醇溶蛋白和干酪素和多糖共组装形成纳米颗粒的制备方法。

技术介绍

[0002]以醇溶蛋白为材料制备纳米颗粒具有包覆，保护和递送药物的作用。然而单一的醇溶蛋白纳米颗粒具有稳定性差，包埋率低和缓释效果一般的特征。将另一种生物聚合物如干酪素钠通过反溶剂共沉淀的方法可以获得表面附着干酪素的醇溶蛋白纳米颗粒。干酪素钠作为稳定剂具有使得醇溶蛋白颗粒再分散和耐较高离子强度的特点。由于醇溶蛋白基纳米颗粒主要通过电荷斥力达到稳定的效果，因此干酪素钠稳定的醇溶蛋白颗粒在pH=4.6左右（干酪素钠等电点）下发生聚沉，不利于药物的递送。多糖作为醇溶蛋白纳米颗粒稳定剂也广泛报道，多糖稳定的醇溶蛋白纳米颗粒不具有耐离子强度的特征，因此采用干酪素钠
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多糖复合稳定剂可望综合两者优势。由于醇溶蛋白在醇水溶液中的溶解度较好，而在水中的溶解度较差，通常采用液
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液分散法制备干酪素钠
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多糖层层包裹的醇溶蛋白纳米颗粒。该制备条件一般包括两步甚至多步。第一步是制备干酪素稳定的纳米颗粒；第二部是将干酪素钠稳定的纳米颗粒投入到多糖水溶液中，以此形成三层复合纳米颗粒。多层(多壳)或一层一层的组装虽然提供更高的物理化学稳定性，但壳的厚度和材料类型对所制备材料的性能有显著影响。如形貌，带电表面和粒子的大小对于其实际应用是非常重要的。例如，尺寸小于100 nm或在100~200 nm范围内的纳米颗粒被证实具有更高通过上皮细胞摄取和运输的效率，带电表面可以增加非特异性相互作用的机会。为了尽可能的控制因为干酪素钠
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多糖多重稳定剂稳定所带来的尺寸显著增大问题，该专利技术利用pH循环法制备由醇溶蛋白
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干酪素钠
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多糖共组装的纳米颗粒。

技术实现思路

[0003]针对层层组装导致的醇溶蛋白颗粒粒径显著增大问题，目的之一在于制备一种稳定的由干酪素钠和多糖稳定的且粒径较小的醇溶蛋白颗粒，以提高细胞对颗粒的摄取。
[0004]针对干酪素钠稳定的醇溶蛋白在pH4.6左右沉淀问题，本专利技术提供一种两步法制备多糖附着的干酪素钠稳定的醇溶蛋白颗粒，以提高pH稳定性。
[0005]所述的纳米颗粒具有核
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壳结构，即基于蛋白质的醇溶蛋白和干酪素钠共组装的复合颗粒，然后水相中的多糖附着在该颗粒上，形成核
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壳结构，该方法制备的纳米颗粒尺寸随着外层多糖的种类而变化在30
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150 nm不等，多分散性小于0.3。
[0006]所述的醇溶蛋白为玉米醇溶蛋白，小米醇溶蛋白，大麦醇溶蛋白等；所述的水溶性多糖包括硫酸软骨素，透明质酸，硫酸根修饰的凝胶多糖，岩藻多糖，海藻酸钠，羧甲基纤维素钠等；优选的，醇溶蛋白浓度可为0.5%～10%（w/v）。
[0007]优选的，氢氧化钠浓度为8
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30 mmol/L。
[0008]优选的，干酪素钠浓度为0.15%~1%（w/v）。
[0009]优选的，所述醇溶蛋白相和干酪素钠相体积为1：1~1：10（v/v）。
[0010]优选的，所述磁力搅拌器搅拌速度为500~900 rpm。
[0011]优选的，多糖与干酪素钠质量比为1：0.1~3。
[0012]本专利技术利用醇溶蛋白和干酪素钠在碱性条件下解聚，在中性条件下聚合，利用生物大分子之间的作用力，采用pH
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循环法制备了具有醇溶蛋白
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干酪素钠核和亲水性外壳的纳米颗粒。优点在于除了提供了一种新型简易的制备多层复合结构的纳米颗粒制备方法，同时形成的粒子尺寸更小。本专利技术提供的纳米粒子可作为药物或者功能因子的保护和递送附图说明：图1实施例1中制备壳聚糖盐酸盐包裹的醇溶蛋白
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干酪素稳定的纳米颗粒的表面电位随pH变化图。
[0013]图2实施例1中壳聚糖盐酸盐包裹的醇溶蛋白
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干酪素钠复合纳米颗粒的透射电镜图。
[0014]图3实施例1中壳聚糖盐酸盐包裹的醇溶蛋白
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干酪素钠复合纳米颗粒耐离子强度稳定性图。
[0015]图4实施例2中硫酸软骨素包裹的醇溶蛋白
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干酪素钠复合纳米颗粒耐离子强度稳定行图。
[0016]图5实例1中制备的纳米颗粒红外分析图。
[0017]具体实施方案：下面结合本专利技术的实施例，对本专利技术中的技术方案进行清楚，完整的描述。显然所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实例，而不是全部的实施例，基于本专利技术的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他实施例，都属于本专利技术保护范围。
[0018]实施例1将1 g小米醇溶蛋白溶于100 mL 15 mmol/L氢氧化钠水溶液中，搅拌至完全溶解，之后过滤去除不溶物。将干酪素钠溶于15 mmol/L氢氧化钠溶液中浓度分别3 mg/mL。之后将100 mL醇溶蛋白溶液在600 rpm加入到300 mL含有干酪素钠的水溶液中，继续搅拌5 min后获得分散液。随后采用1N盐酸调节pH至7.0，继续搅拌十分钟形成醇溶蛋白
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干酪素钠共组装的胶体溶液。然后将100 mL溶于乙酸水溶液中的壳聚糖盐酸盐(10 mg/mL)倒入上述胶体溶液中，形成壳聚糖包裹的蛋白质颗粒。3000 rmp下离心10 min去除沉淀得到纳米分散液。
[0019]用扫描和透射电镜观察上述所得纳米粒子形貌特征，结果表明所制颗粒呈小球型。
[0020]动态光散射仪表明纳米粒子平均粒径为115nm，多分散性为0.15。电位分析说明颗粒带正电荷，因此壳聚糖盐酸盐存在于醇溶蛋白
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干酪素钠复合颗粒的表面，结果说明形成了蛋白质（醇溶蛋白
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干酪素钠）颗粒核和壳聚糖外壳。
[0021]通过离子强度和pH稳定性研究发现所制备的纳米颗粒在pH 2~5范围内稳定，可以耐1M NaCl的离子强度。
[0022]红外色谱发现，壳聚糖盐酸盐上的氨基与蛋白质的肽键形成了氢键和离子键。
[0023]通过冷冻干燥纳米粒子后再溶解发现其仍具有纳米粒子特征。
[0024]实施例2将1 g玉米醇溶蛋白溶于100 mL 10 mmol/L氢氧化钠水溶液中，搅拌至完全溶解，之后过滤去除不溶物。将干酪素钠溶于10 mmol/L氢氧化钠溶液中浓度分别4 mg/mL。之后将100 mL醇溶蛋白溶液在600 rpm加入到250 mL含有干酪素钠的水溶液中，继续搅拌5 min后获得分散液。随后采用1M柠檬酸调节pH至6.5，继续搅拌十分钟形成醇溶蛋白
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干酪素钠共组装的胶体溶液。然后加入0.9 g硫酸软骨素至上述胶体溶液中，形成硫酸软骨素包裹的蛋白质颗粒。3000 rmp下离心10 min去除沉淀得到纳米分散液。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种由干酪素钠和多糖共组装形成醇溶蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a）将醇溶蛋白溶于碱性溶液中，通过搅拌至完全溶解；b）将干酪素钠溶于碱性溶液中，通过搅拌至完全溶解；c）将由步骤a）所得的醇溶蛋白分散液加入到由步骤b）所得的干酪素分散液中；d）加入酸性溶液调整由步骤c）所得的混合液的pH值至中性，获得醇溶蛋白
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干酪素钠胶体溶液；e）在由步骤d）所得的醇溶蛋白
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干酪素钠胶体溶液中加入多糖，通过搅拌形成多糖包裹的醇溶蛋白
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干酪素钠复合纳米颗粒。2.根据权利要求1所述的一种由干酪素钠和多糖共组装形成醇溶蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于所述的醇溶蛋白来源没有特殊限定，植物提取或者市售常规醇溶蛋白即可。3.根据权利要求1所述的一种由干酪素钠和多糖共组...

【专利技术属性】
技术研发人员：李惠静，吴彦超，陈晓，
申请(专利权)人：威海惠安康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：