一种检测人前列腺癌抗原试剂盒制造技术

本发明专利技术的一种检测人前列腺癌抗原试剂盒，属于生物检测技术领域。包括如下组分：固相化有PCA

【技术实现步骤摘要】
一种检测人前列腺癌抗原试剂盒


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体来说是一种检测人前列腺癌抗原试剂盒。

技术介绍

[0002]在世界范围内，PCa(前列腺癌)发病率位居男性恶性肿瘤第2位，我国PCa发病率逐年升高，多数地区新确诊患者中晚期比例高于欧美国家。2017年2月，国家癌症中心发布了2013年最新癌症数据，汇总了347家癌症登记点的数据。数据显示大城市PCa发病率为17.26/10万。有统计数据中国2015年新发PCa病例60300人，新增PCa死亡人数26600人。预计至2020年我国PCa发病率将超过40/10万男性人口。
[0003]人前列腺癌抗原3(PCA
‑
3)即Prostate cancergene 3,是一种非编码的大链RNA,与非癌前列腺组织相比，它在前列腺癌中高度过表达。PCA3是非编码信使核糖核酸(mRNA)片段，定位于第9号染色体上(9q21
‑
22)。PCA3全长约25kb,包含4个外显子和3个内含子：1号内含子(20kb)、2号内含子(873bp)和3号内含子(227bp)；4个外显子分别为外显子1、2、3、4。外显子2发生选择性交替拼接，外显子4由4a、4b和4c 3个亚单位选择性多聚腺苷酸化组成。通过RNA印迹(Northernblot)分析可得到3种不同的转录产物(PCA3mRNA)，长度分别为0.6kb、2kb和4kb，其中外显子1、3、4a、4b所组成的cDNA(2kb)克隆频率出现最高，占60％，是最主要的转录产物；外显子2也是3种转录产物的一部分，但因其发生选择性交替拼接，故转录产物有限，只有5％存在cDNA克隆；外显子4c则仅存在于最大的转录产物(4kh)中；外显子“出现在两个较大的转录产物中(2kb和4kb)。外显子1、3、4a都存在于三种转录产物中。有研究明PCA3基因mRNA检测可作为前列腺癌患者有效诊断方法。而且PCA3可以在前列腺癌患者的尿液中检测到，并且被发现与前列腺大小和血清PSA水平无关。2012年2月，美国食品和药物管理局通过了一项决策,PCA3可作为前列腺癌的风险评估中用于评价既往前列腺活检阴性的男性的是否必要活检的指标。
[0004]目前，临床上对于前列腺癌的辅助诊断大多是通过测定血清中人PSA的浓度，同时对于癌症患者，可通过对于血清PSA3浓度的动态监测，来辅助判断疾病进程、治疗效果和复发，但不能作为恶性肿瘤早期诊断或确切的依据。《中国前列腺癌筛查专家共识》，将PCa基因3(PCA3)检测、前列腺特异性抗原前体(PSA)检测、前列腺健康指数(PHI)、MRI检查等作为PCa筛查的常规手段。在PSA升高的患者中，使用PCA3作为诊断标志物比使用tPSA、fPSA(游离PSA比值)等更能提高PCa的诊断准确率。EAU指南推荐在初始前列腺穿刺阴性，但仍怀疑PCa的患者中进行PCA3检测。在临床上将PCA3 mRNA表达与PSA联合检测可进一步提高PCa诊断的敏感性和特异性。。

技术实现思路

[0005]1.专利技术要解决的技术问题
[0006]本专利技术的目的在于解决现有的试剂盒检测效率低、反应不灵敏的问题。
[0007]2.技术方案
[0008]为达到上述目的，本专利技术提供的技术方案为：
[0009]本专利技术的一种检测人前列腺癌抗原试剂盒，包括如下组分：固相化有PCA
‑
3抗体的聚苯乙烯包被板，标记有PCA
‑
3抗体的酶结合物，样品稀释液和校准品。
[0010]优选的，所述固相化有PCA
‑
3抗体的聚苯乙烯包被板具体为：取洁净的聚苯乙烯包被板清洗后，取含有PCA
‑
3抗体的包被液加入，待包被结束抽去板内液体，加入适量的封闭保护液；封闭保护结束，按包被的先后顺序进行抽干，抽去包被板内液体后，将板块在台面上拍打，除去孔内残液；干燥后加干燥剂装袋封存，2～8℃存放待用。
[0011]优选的，所述酶结合物的制备方法为：将含有TAPS和NaCl的缓冲液，加入1/2000的PCA
‑
3酶标抗体，然后再加入牛血清白蛋白混合均匀，酶结合物制备完成，2～8℃保存待用。
[0012]优选的，所述样品稀释液的制备方法为：在含有NaCl、NaH2PO4.2H2O、Na2HPO4.12H2O和EDTA
‑
Na2的缓冲液中加入Casein混合均匀后，样品稀释液制备完成，2
‑
8℃保存待用。
[0013]优选的，所述校准品选用pH为8.18的硼酸缓冲液，加入适量的BSA后2～8℃保存待用。
[0014]3.有益效果
[0015]采用本专利技术提供的技术方案，与现有技术相比，具有如下有益效果：
[0016]本专利技术的一种检测人前列腺癌抗原试剂盒，包括如下组分：固相化有PCA
‑
3抗体的聚苯乙烯包被板，标记有PCA
‑
3抗体的酶结合物，样品稀释液和校准品。属于双抗体夹心法，操作简单方便，利用抗原抗体反应的特异性和强吸附性，通过ELISA技术在同一个反应条件下进行测定同一种抗原(PCA
‑
3)在机体发生良性或恶性肿瘤时所表达的不同组分，且灵敏度高，特异性强。
[0017]在使用时，首先对病人进行简单分类(对于患有恶性肿瘤和未知样本类型分开处理)，对于已知患有恶性肿瘤(包含术后复查)病人可直接检查PCA
‑
3来反映PCA
‑
3在体内含量；对于未知患者类型，可先进行PCA
‑
3的初筛，若结果在灰区范围内或结果为阳性，可进而更深一步检查PCA
‑3‑
2血清水平。
附图说明
[0018]图1为本实施例1的试剂盒的相关性比较数据图一；
[0019]图2为本实施例1的试剂盒的相关性比较数据图二。
具体实施方式
[0020]为了使本
的人员更好地理解本申请方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。
[0021]需要说明的是，本申请的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本申请的实施例。此外，术语“包括”和“具
有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
[0022]需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测人前列腺癌抗原试剂盒，其特征在于，包括如下组分：固相化有PCA
‑
3抗体的聚苯乙烯包被板，标记有PCA
‑
3抗体的酶结合物，样品稀释液和校准品。2.根据权利要求1所述的一种检测人前列腺癌抗原试剂盒，其特征在于，所述固相化有PCA
‑
3抗体的聚苯乙烯包被板具体为：取洁净的聚苯乙烯包被板清洗后，取含有PCA
‑
3抗体的包被液加入，待包被结束抽去板内液体，加入适量的封闭保护液；封闭保护结束，按包被的先后顺序进行抽干，抽去包被板内液体后，将板块在台面上拍打，除去孔内残液；干燥后加干燥剂装袋封存，2～8℃存放待用。3.根据权利要求1所述的一种检测人前列腺癌抗原试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：程军，
申请(专利权)人：贵州正鑫实业有限公司，
类型：发明
国别省市：