本发明专利技术公开了一种促进葡萄白腐病菌快速产孢的培养基及产孢培养方法。该培养基为硫酸铵葡萄枝条培养基，由硫酸铵、葡萄枝条和水制成。使用本发明专利技术的硫酸铵葡萄枝条培养基可有效解决葡萄白腐病菌产孢时间长，产孢量不稳定的问题，为研究葡萄白腐病菌致病机制、侵染规律、菌植互作和葡萄的抗病育种等方面奠定了基础。菌植互作和葡萄的抗病育种等方面奠定了基础。菌植互作和葡萄的抗病育种等方面奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
一种使葡萄白腐病菌产生孢子的培养基及其应用
[0001]本专利技术涉及生物
中一种使葡萄白腐病菌产生孢子的培养基及其应用。
技术介绍
[0002]当前，随着葡萄产业的快速发展和葡萄种植面积的不断扩大，葡萄病害的发生也逐年增加。葡萄白腐病是葡萄上一种重要的真菌病害，在世界各地的葡萄产区均有发生，其病原菌主要有Coniella diplodiella(Speg.)、C.fragariae、Pilidiella castaneicola和Coniella vitis，Coniella vitis是我国葡萄白腐病的主要病原菌。该病原菌主要侵染果穗(包括果梗、果粒)，也可危害葡萄新梢和嫩叶。目前，关于葡萄白腐病菌Coniella vitis的研究主要集中在分离鉴定、形态学特征及致病性等方面，其致病机理的相关研究还处于起步阶段。致病机制的研究将有助于该病害提出高效、精准、绿色的防控策略的提出，获取大量分生孢子是研究病原菌基因功能、侵染过程和葡萄抗病育种的重要环节。
[0003]目前，Coniella vitis产孢的培养基为PDA培养基，但是其利用PDA固体培养基的产孢时间较长(一般10
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14天产孢)，分离获得的分生孢子量较少而且产孢量不稳定，是制约葡萄白腐病研究的关键因素。因此，开发一种促进葡萄白腐病菌快速产孢的培养基及产孢培养方法，为顺利进行后续的侵染过程、致病机制和抗病品种鉴定等研究奠定了基础，是本领域亟待解决的关键技术问题。
技术实现思路
[0004]本专利技术所要解决的技术问题是如何使葡萄白腐病菌快速产孢。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种使葡萄白腐病菌产生孢子的培养基。
[0006]本专利技术的使葡萄白腐病菌产生孢子的培养基，由包括硫酸铵、葡萄枝条和水的原料制成。
[0007]上述培养基中，所述原料由硫酸铵、葡萄枝条和水组成。
[0008]上述培养基中，所述硫酸铵的含量为1.5g/L，所述葡萄枝条的含量为以干重计10
‑
20g/L。优选的，所述培养基中所述硫酸铵的含量为1.5g/L，所述葡萄枝条的含量为以干重计10g/L。
[0009]上述硫酸铵葡萄枝条培养基中，所述葡萄枝条的长度为1
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3cm，直径0.2
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0.5cm。
[0010]上述硫酸铵葡萄枝条培养基中，葡萄的品种可选自巨峰、红绣球、夏黑、赤霞珠、品丽珠、摩尔多瓦等中的任一种。
[0011]本专利技术还提供上述硫酸铵葡萄枝条培养基的制备方法，包括将硫酸铵和葡萄枝条溶于水中，定容，121℃灭菌20min。
[0012]本专利技术还提供一株垫壳孢属菌株，所述垫壳孢属菌株为Coniella vitis，菌株编号GP1，保藏中心登记入册编号：CGMCC No.23888。
[0013]本专利技术还提供使葡萄白腐病菌产生孢子的方法，，包括以上述硫酸铵葡萄枝条培
养基培养葡萄白腐病菌，得到葡萄白腐病菌的孢子。
[0014]上述方法中，所述培养的为所述培养的为于28℃、180rpm、每天12小时光照和12小时黑暗条件下培养7天。
[0015]上述方法中，所述葡萄白腐病菌(Coniella vitis)为保藏中心登记入册编号CGMCC No.23888的菌株GP1。
[0016]本专利技术还提供了上述硫酸铵葡萄枝条培养基的制备方法在葡萄白腐病菌产孢中的应用。
[0017]本专利技术与现有技术相比具有以下优点和效果：
[0018]本专利技术提供的促进葡萄白腐病快速产孢的培养基，不仅能缩短葡萄白腐病菌的产孢时间(从10
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14天产孢缩短为7天)，且能使葡萄白腐病菌在液体环境更加稳定的大量产孢(高达2.35
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106个孢子/mL)，有利于后续开展侵染、致病机制和葡萄抗病鉴定研究。与本专利技术相比，已报道的在PDA固体平板产孢存在产孢时间长(10
‑
14天)，产孢量不稳定，配制孢子悬浮液程序复杂(需要从平板刮取后用无菌水配置孢子悬浮液)等局限性。
[0019]本专利技术中培养基原料简单，成本低廉，制备过程简单易操作，利用本专利技术中的产孢培养方法能够促进葡萄白腐菌快速产孢，在病原菌致病机理、病原菌与寄主互作、抗病机制研究中具有较高的应用潜力。
附图说明
[0020]图1为本专利技术实施例中菌株GP1的菌落形态及孢子形态。其中，图1的A为菌落形态(PDA平板正面)；图1的B为菌落形态(PDA平板反面)；图1的C为分子孢子形态；图1的D为分生孢子形态(含油球)。
[0021]图2为本专利技术实施例中菌株GP1基于3个看家基因序列采用邻近法构建的系统发育进化树。
[0022]图3为本专利技术实施例3不同葡萄品种的硫酸铵葡萄枝条培养基的产孢量结果图。
[0023]保藏说明
[0024]拉丁名：Coniella vitis
[0025]菌株编号：GP1
[0026]保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0027]保藏机构简称：CGMCC
[0028]地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0029]保藏日期：2021年12月01日
[0030]保藏中心登记入册编号：CGMCC No.23888
具体实施方式
[0031]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
[0032]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊
说明，均可从商业途径得到。
[0033]下述实施例中葡萄白腐病菌菌株GP1的分离及鉴定如下：
[0034]病原菌分离
[0035]葡萄白腐病菌菌株GP1是本课题组于2020年10月在山东省的发病葡萄叶片上分离的。采用常规组织分离法对并葡萄病组织进行病原菌的分离，在发病叶片病健交界处切取小块组织，置于75％的酒精中消毒1min，然后用无菌水冲洗3次，将小块组织置于无菌的培养皿中在操作台中吹干后放在马铃薯琼脂培养基(PDA)平板上，置于28℃培养箱中培养。2d后挑取病叶组织边缘的菌丝进行纯化培养，纯化得到的菌株储存于4℃冰箱备用。
[0036]形态学鉴定
[0037]将菌株GP1在PDA平板上活化3d后，用无菌的打孔器在菌落边缘打菌饼(直径8mm)，将菌饼接在PDA培养基上，置于28℃的培养箱中培养3d，并记录菌落正面反面的形态特征。待其在PDA培养基上产孢后，在显微镜下观察分子孢子器及分生孢子的大小和形状。形态学观察发现，该病原菌在PDA平板上菌丝初为白色，在PDA培养基上10天产生分生孢子器，分生孢子器单个或几个聚本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.使葡萄白腐病菌产生孢子的培养基，其特征在于，所述培养基由包括硫酸铵、葡萄枝条和水的原料制成。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述原料由硫酸铵、葡萄枝条和水组成。3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于：所述培养基中硫酸铵的含量为1.5g/L，葡萄枝条的含量为以干重计10
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20g/L。4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于：所述培养基中硫酸铵的含量为1.5g/L，葡萄枝条的含量为以干重计10g/L。5.根据权利要求1
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4任一所述的培养基，其特征在于：所述葡萄枝条的长度为1
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3cm，直径0.2
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0.5cm。6.根据权利要求1<...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁丽芳，尹向田，李廷刚，魏彦锋，蒋锡龙，江航，
申请(专利权)人：山东省葡萄研究院，
类型：发明
国别省市：
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