逆向-反转肽制造技术

本公开涉及非常规神经营养因子的领域，和治疗退行性、慢性或进行性疾病和障碍以及具有ER应激作为致病化合物的单基因遗传性疾病的领域。更特别地，本公开涉及经修饰的肽，特别是逆向

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】逆向
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反转肽


[0001]本公开涉及非常规神经营养因子和内质网(ER)定位蛋白的领域，以及治疗退行性、慢性或进行性疾病和障碍的领域。更特别地，本公开涉及逆向
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反转肽。本公开还涉及包含所述肽的药物组合物。此外，本公开还涉及用作药物和用于治疗退行性、慢性或进行性疾病和障碍以及具有ER应激作为致病化合物的单基因遗传性疾病的所述肽和药物组合物，以及用于治疗所述疾病和障碍的方法。

技术介绍

[0002]神经营养因子(NTF)是生长因子的一个亚组，其促进神经元的存活和分化，并具有神经保护和神经恢复特性(Hefti,1994)。NTF是支持发育和成熟神经元的生长、存活和分化的小蛋白质，并保护它们免受损伤和毒素。大脑多巴胺神经营养因子(CDNF)及其最近的相对中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)形成了一个新的非常规NTF家族，其在结构和机制上都不同于其他生长因子(Lindholm和Saarma,2010；Huttunen和Saarma,2019)。CDNF和MANF是分子量为大约18kDa的小单体蛋白质，分别是161和158个氨基酸的成熟蛋白，在中枢神经系统还有非神经元组织中表达。CDNF和MANF主要定位于内质网(ER)腔。它们含有N末端信号肽，将它们引导至ER。CDNF和MANF二者还含有C末端KDEL(SEQ ID NO:31)样ER滞留信号，所述信号典型地在预定用于分泌的生长因子中是不存在的。它们与ER蛋白(诸如BiP/GRP78)相互作用，调节未折叠蛋白反应(UPR)信号传导，并保护细胞免受ER应激诱导的细胞死亡。CDNF和MANF二者都积聚在健康细胞的ER腔中，并且破坏C末端ER滞留信号导致它们的分泌。在正常人血清中发现了可检测水平的CDNF和MANF，并且在脑脊液(CSF)中也发现了MANF。基于这些特征，CDNF和MANF被认为是一般的应激保护蛋白，而不是高度特异性的神经营养因子(Huttunen和Saarma,2019)。MANF也被描述为心肌因子(Glembotski,2011)。
[0003]CDNF和MANF是目前用于治疗帕金森病大鼠6
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OHDA模型中退化多巴胺神经元的最有效蛋白质(Lindholm和Saarma,2010)。当在毒素之前应用时，这两种因子有效地防止了6
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OHDA诱导的多巴胺神经元损失和帕金森病样运动症状(Lindholm等人,2007；Voutilainen等人,2009)。更重要的是，当在6
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OHDA诱导的帕金森病症状已经非常严重的阶段应用时，损伤后施用任一因子有效地恢复了纹状体的正常运动行为和多巴胺能神经支配(Lindholm等人,2007；Voutilainen等人,2011)。CDNF还在帕金森病的小鼠MPTP模型中保护和修复多巴胺神经元(Airavaara等人,2012)，并且在严重的6
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OHDA模型中，它比胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)更有效(Airavaara等人,2012；Voutilainen等人2011)。这些因子的神经元保护背后的机制尚不完全清楚，但已表明它们激活了旨在减轻氧化应激和ER应激并抑制凋亡细胞死亡的途径。许多病理生理状况(包括糖尿病和神经退行性疾病(诸如帕金森氏病、阿尔茨海默氏病(AD)和肌萎缩性侧索硬化(ALS))都与ER应激相关。因此，CDNF和MANF的作用已在各种中枢神经系统疾病中显示出来(WO 2009133247；WO 2007068803；和Airavaara等人,2009)。非细胞自主机制，包括免疫和胶质细胞反应的调节，已被证明有助于CDNF和MANF的细胞保护作用(Sousa
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Victor等人,2018)。具体地，CDNF和MANF已被证明抑制神经炎
症，所述神经炎症涉及大多数(如果不是全部)CNS疾病和损伤的病理生理学(Nadella等人,2014；Zhao等人,2013)。
[0004]CDNF和MANF共享大约60％的氨基酸序列同源性，但它们具有高度相似的三维结构。CDNF和MANF二者都是由两个独立折叠的结构域通过一个灵活的环区连接而构成(Lindholm和Saarma,2010)。二级结构主要是α螺旋，其中N末端结构域中有五个α螺旋，并且C末端结构域中有三个α螺旋。三个二硫桥稳定N末端结构域，而CDNF中的C末端CRAC(SEQ ID NO:32)序列、MANF中的CKGC(SEQ ID NO:33)形成内部二硫桥。这种CXXC(SEQ ID NO:34)二硫桥在CDNF和MANF二者中均有发现，并在这些蛋白质的神经保护活性方面起重要作用。
[0005]CDNF在脑中表达，但也在许多其他组织中表达，包括例如骨骼肌、肝脏、心脏、肺、胰腺、睾丸、唾液腺和肠神经系统(Lindholm等人,2007)。MANF在脑中表达，但也在外周组织(诸如胰腺和心脏)中表达。
[0006]天然肽(诸如在出版物WO 2013/3034805和WO 2018/202957中公开的那些)很少可以用作药物产品。
[0007]文献WO 2013/3034805 A1公开了长度为4
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40个氨基酸的MANF和CDNF片段，包含序列CKGC(SEQ IN NO:33)或CRAC(SEQ ID NO:32)。文献WO 2018/202957A1公开了长度为至少50个氨基酸的CDNF片段。Hellmann等人,2011，公开了包含残基96
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158的MANF的活性C末端片段构建体。Fletcher和Hughes 2006公开了一种含有CRAC(SEQ ID NO:32)的脑源性神经营养因子(BDNF)源性肽，其具有用于环生成的工程化半胱氨酸。因此，本领域仍然需要具有改善的代谢稳定性和分布特性的治疗剂。

技术实现思路

[0008]本公开的一个目的是提供新的经修饰的逆向
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反转肽。本公开的另一个目的是提供所述新型肽的用途。
[0009]本公开通过以新颖和创造性的方式利用肽，尤其是逆向
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反转肽，提供了具有这些前述特性的工具。
[0010]本专利技术人发现，线性天然CDNF和MANF肽是很差的药物分子，因为当施用至人或动物时，特别是肠胃外施用时，它们的代谢快且分布差。因此，天然未修饰肽(诸如现有技术中公开的那些)很少可以用作药物产品。本专利技术人开发了来源于CDNF和MANF的新型稳定肽，其概括了CDNF和MANF的细胞保护作用，但非常适合于非侵入性外周施用。如本公开的数据所显示，本专利技术人发现CDNF和MANF肽的逆向
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反转异构化显著改善了它们的代谢稳定性和分布特性，而没有损失它们的细胞保护活性。另外，本专利技术的经修饰肽比现有技术中公开的那些肽更短。
[0011]CDNF/MANF的生物活性局限于蛋白质的C末端结构域。本公开描述了来源于CDNF和MANF的C末端结构域的8
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种由长度为8
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32个氨基酸组成的肽或其药学上可接受的盐，其包含C
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X1‑
X2‑
X3‑
C(SEQ ID NO:21)的氨基酸序列的逆向
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反转形式，其中X1选自由以下项组成的组：R、K、I、G、A和S；X2不存在或选自由以下项组成的组：G、A、R、K、I和S；并且X3选自由以下项组成的组：A、G和S。2.根据权利要求1所述的肽，其包含E
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X4‑
C
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X1‑
X2‑
X3‑
C
‑
A
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E(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列的逆向
‑
反转形式，其中X1选自由以下项组成的组：R、K、I、G、A和S；X2不存在或选自由以下项组成的组：G、A、R、K、I和S；X3选自由以下项组成的组：A、G和S；并且X4选自由以下项组成的组：E、T、V、D、M和G。3.根据权利要求1或2所述的肽，其包含X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
E
‑
X4‑
C
‑
X1‑
X2‑
X3‑
C
‑
A
‑
E
‑
X9‑
X
10
‑
X
11
(SEQ ID NO:23)的氨基酸序列的逆向
‑
反转形式，其中X1选自由以下项组成的组：R、K、I、G、A和S；X2不存在或选自由以下项组成的组：G、A、R、K、I和S；X3选自由以下项组成的组：A、G和S；X4选自由以下项组成的组：E、T、V、D、M和G；X5不存在或选自由以下项组成的组：H、D、Q、R、Y、N和S；X6不存在或选自由以下项组成的组：S、D、G、N和R；X7不存在或是W；X8不存在或是G；X9不存在或是K；X
10
不存在或选自由以下项组成的组：T、S、A、I和N；并且X
11
不存在或选自D和E。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的肽，其包含X
12
‑
X
13
‑
X
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‑
X
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‑
X
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‑
X
17
‑
X
18
‑
X
19
‑
X
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‑
X
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‑
X
22
‑
X
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‑
V
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X
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‑
E
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L
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K
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X
25
‑
X
26
‑
L
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X5X6‑
X7‑
X8‑
E
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X4‑
C
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X1‑
X2‑
X3‑
C
‑
A
‑
E
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X9‑
X
10
‑
X
11
(SEQ ID NO:24)的氨基酸序列的逆向
‑
反转形式，其中X1选自由以下项组成的组：R、K、I、G、A和S；X2不存在或选自由以下项组成的组：G、A、R、K、I和S；X3选自由以下项组成的组：A、G和S；X4选自由以下项组成的组：E、T、V、D、M和G；X5不存在或选自由以下项组成的组：H、D、Q、R、Y、N和S；X6不存在或选自由以下项组成的组：S、D、G、N和R；X7不存在或是W；X8不存在或是G；
X9不存在或是K；X
10
不存在或选自由以下项组成的组：T、S、A、I和N；并且X
11
不存在或选自D和E，X
12
不存在或选自由以下项组成的组：L、I和V；X
13
不存在或是D；X
14
不存在或选自L和W；X
15
不存在或选自由以下项组成的组：A、S、T、E和N；X
16
不存在或选自S和T；X
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不存在或选自V和D；X
18
不存在或选自D和A；X
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不存在或是L；X
20
不存在或选自由以下项组成的组：R、K、S和W；X
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不存在或是K；X
22
不存在或选自由以下项组成的组：M、L、I和V；X
23
不存在或是R；X
24
选自由以下项组成的组：A、K、T、L和V；X
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选自由以下项组成的组：Q、K和R；并且X
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选自I和V。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的肽，其由选自由以下项...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：赫兰提斯制药公司，
类型：发明
国别省市：