一种抗人ACE2蛋白单克隆抗体、核酸分子及应用制造技术

本发明专利技术属于单克隆抗体领域，具体涉及一种抗人ACE2蛋白单克隆抗体、核酸分子及应用。本发明专利技术的抗人ACE2蛋白单克隆抗体能够通过与人ACE2分子特异结合，阻断人ACE2与SARS

A monoclonal antibody against human ACE2 protein, nucleic acid molecule and its application

【技术实现步骤摘要】
一种抗人ACE2蛋白单克隆抗体、核酸分子及应用


[0001]本专利技术属于单克隆抗体领域，具体涉及一种抗人ACE2蛋白单克隆抗体、核酸分子及应用。

技术介绍

[0002]冠状病毒在系统分类上属套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的病毒是具囊膜、基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒。已经有七种冠状病毒已被确定为人类易感病毒，其中α属冠状病毒HCoV
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229E和HCoV
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NL63，以及低致病性的β属冠状病毒HCoV
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HKU1和 HCoV
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OC43，会引起类似于普通感冒的轻微呼吸道症状。SARS
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CoV
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2与SARS
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CoV和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS
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CoV)同属β冠状病毒属(分别具有80％和50％的同源性)。 SARS、MERS和现在的COVID
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19的爆发证明了冠状病毒具有跨越物种传播能力并且能够在人类之间迅速传播，导致严重且可能致命的呼吸道感染。在这些冠状病毒中，SARS
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CoV、 SARS
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CoV
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2和HCoV
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NL63都是以血管紧张素转化酶2(ACE2)作为受体，完成感染宿主细胞的生物学过程，感染人源宿主细胞和人。
[0003]目前亟需针对SARS
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CoV和SARS
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CoV
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2等冠状病毒的特效药物。治疗性抗体药物不但在肿瘤和自身免疫疾病方面占有重要地位，在传染性疾病的治疗中也同样有效。目前已经上市的治疗和预防病毒感染的药物有预防小儿呼吸道合胞病毒(RSV)感染的帕利珠单抗 (Synagis)，治疗HIV感染的艾巴利珠单抗(Trogarzo)，以及用于狂犬病毒暴露后预防的 Rabishield。
[0004]病毒要感染细胞，首先需要通过囊膜蛋白结合宿主的受体。抗体，尤其是阻断型抗体可通过结合到受体蛋白上而阻断病毒与细胞受体的结合，从而阻断病毒感染，达到阻断病毒入侵宿主细胞的过程，实现预防及治疗效果。
[0005]ACE2作为病毒进入细胞的功能性受体以及肾素
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血管紧张素系统(RAS)的重要组成部分，ACE2可以作为阻断SARS
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CoV
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2感染并保护宿主器官免受伤害的潜在靶标。因此靶向人ACE2受体并且阻断RBD与人ACE2结合的抗体，可能成为抑制病毒感染的有效抗体。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种抗人ACE2蛋白单克隆抗体，该单克隆抗体能够特异性结合人 ACE2受体。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供一种核酸分子。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供上述抗人ACE2蛋白单克隆抗体的应用。
[0009]为了实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0010]一种抗人ACE2蛋白单克隆抗体，其包含氨基酸序列如SEQ ID NO:1
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3所示的VHCDR1、 VHCDR2和VHCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO:4
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6所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。
[0011]本专利技术的抗人ACE2蛋白单克隆抗体能够通过与人ACE2分子特异结合，阻断人ACE2 与SARS
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CoV
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2 RBD的结合，从而使利用ACE2作为受体的冠状病毒失去入侵宿主的能力，达到预防及治疗病毒感染的效果。经实验证实，该单克隆抗体对SARS
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CoV
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2野生型 (Wuhan
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1)、Delta(B.1.617.2)、Omicron(B.1.1.529)冠状病毒均具有良好的阻断效果。
[0012]优选地，所述抗人ACE2蛋白单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：7 所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。在此基础上，可以采用常规基因工程或蛋白质工程的方法获得本专利技术的单克隆抗体，进一步的，还可采用一个或多个氨基酸的添加、删除、替换等修饰，获得其活性片段或保守性变异体，为进一步提升抗体的特异性和亲和力奠定基础。
[0013]优选地，所述抗人ACE2蛋白单克隆抗体的轻链型为Kappa，亚型为IgG 2a。
[0014]一种核酸分子，其编码上述抗人ACE2蛋白单克隆抗体。
[0015]采用该核算分子得到的抗人ACE2蛋白单克隆抗体对人ACE2分子具有特异结合能力。
[0016]优选地，编码所述抗人ACE2蛋白单克隆抗体重链可变区的基因核苷酸序列如SEQ IDNO：9所示；编码所述抗人ACE2蛋白单克隆抗体轻链可变区的基因核苷酸序列如SEQ ID NO： 10所示。
[0017]本专利技术涉及的抗体核酸分子可以利用基因工程重组技术或化学合成方法获得。本领域技术人员显然知晓，在本专利技术提供的上述核酸分子经一个或多个核苷酸添加、删除、替换、修饰等突变后得到的重链可变区核苷酸序列和/或轻链可变区核苷酸序列的变异序列，其所编码的氨基酸序列组成的单链抗体或嵌合单克隆抗体或改型单克隆抗体或其他形式的单克隆抗体或抗体片段，仍保留与人ACE2蛋白特异性结合的能力。
[0018]根据上述抗人ACE2蛋白单克隆抗体在制备用于预防及治疗以ACE2作为受体的病毒感染的药物中的应用。
[0019]上述抗人ACE2蛋白单克隆抗体能够用于病毒作用原理的基础研究、鉴别诊断、快速测定、流行病学调查、动物模型制备等广泛的领域中。进一步优选地，所述病毒为SARS
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CoV
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2。
附图说明
[0020]图1为本专利技术实施例中纯化的hACE2
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ecto蛋白SDS
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PAGE纯度检测结果图；其中泳道M 为蛋白分子量Marker；泳道1为真核表达的hACE2
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ecto蛋白；
[0021]图2为本专利技术实施例中抗ACE2蛋白单克隆抗体2D6亚型鉴定结果的图；
[0022]图3为本专利技术实施例中抗ACE2蛋白单克隆抗体2D6 SDS
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PAGE纯度检测结果的图；其中泳道M为蛋白分子量Marker；泳道1为纯化的单克隆抗体2D6；
[0023]图4为本专利技术实施例中表示2D6抗体与人ACE2蛋白ELISA反应性的图；其中2D6为抗体2D6，Isotype IgG为阴性对照；
[0024]图5为本专利技术实施例中表示2D6抗体能够阻断SARS
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CoV
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2假病毒感染293T
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hACE2细胞的图；其中Wuhan...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人ACE2蛋白单克隆抗体，其特征在于，其包含氨基酸序列如SEQ ID NO:1
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3所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO:4
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6所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。2.如权利要求1所述的抗人ACE2蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述抗人ACE2蛋白单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。3.如权利要求1或2所述的抗人ACE2蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述抗人ACE2蛋白单克隆抗体的轻链型为Kappa，亚型...

【专利技术属性】
技术研发人员：张改平，王爱萍，丁培阳，刘红亮，丁梦浩，张守涛，陈玉梅，朱习芳，梁超，周景明，祁艳华，牛艳，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：