一种鸡K亚群禽白血病遗传抗性分子标记tva制造技术

本发明专利技术公开了一种鸡K亚群禽白血病遗传抗性分子标记tva

【技术实现步骤摘要】
一种鸡K亚群禽白血病遗传抗性分子标记tva
546G＞C
及其应用


[0001]本专利技术属于家禽疾病抗性品种选育
，具体涉及一种鸡K亚群禽白血病遗传抗性分子标记tva
546G＞C
及其应用。

技术介绍

[0002]K亚群禽白血病是由K亚群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus subgroup K，ALV
‑
K)引起的一种鸡免疫抑制性肿瘤性传染病。ALV
‑
K主要通过垂直传播感染后代，其感染可使感染鸡群从“曾祖代
‑
祖代
‑
父母代
‑
商品代”逐代放大，每代感染率扩大约5％
‑
20％。ALV
‑
K可引起感染鸡群产生免疫抑制、生产性能下降，乃至发生特征性肿瘤而死亡，给养禽业造成巨大的经济损失。
[0003]迄今为止，K亚群禽白血病尚无商品化疫苗和有效的治疗方法。国内外主要通过淘汰阳性鸡，净化种鸡群的传统方法来控制该病，但该方法的缺点是(1)净化时间长：净化一个种鸡群需要3
‑
5个世代，5
‑
8年；(2)劳动强度大：每只种鸡每个世代要用ELISA和病毒分离方法检测4
‑
6次；(3)费用高：每只鸡ALV净化检测费用约500元，我国每年用于禽白血病净化费用超过10亿元。(4)净化后阴性鸡群仍然有再感染禽白血病的风险，且净化效果容易反复，容易陷入病原(ALV
‑
K)r/>‑
动物
‑
检测人员持续的斗争。近年来禽白血病的流行病学调查研究发现，ALV
‑
K在我国地方鸡种、商品肉鸡及蛋鸡中普遍存在。可见，现有措施并不能完全控制K亚群禽白血病在中国鸡群的发生与流行，该病已成为威胁我国养鸡业(尤其是种鸡业)可持续健康发展的重大疾病之一。因此，研发更适合防控我国K亚群禽白血病的新策略与新手段已迫在眉睫。从宿主遗传抗性方面研究禽白血病的抗病育种可成为防控该病的有效策略。鉴定K亚群禽白血病的遗传抗性分子标记，并应用于筛选K亚群禽白血病遗传抗性育种素材，以培育遗传抗K亚群禽白血病鸡品种(系)是实现K亚群禽白血病抗病育种的关键。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种鸡K亚群禽白血病遗传抗性分子标记tva
546G＞C
及其应用，克服现有技术所存在的不能完全控制K亚群禽白血病在中国鸡群发生与流行的不足。
[0005]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0006]一种鸡K亚群禽白血病遗传抗性分子标记tva
546G＞C
，该分子标记为tva基因在第546位碱基处的G＞C碱基突变。
[0007]本专利技术分析了中国鸡种(包括28个地方鸡种和57黄羽肉鸡品系共6570份血液样品)tva受体基因的遗传变异情况，发现中国鸡种中tva受体基因DNA序列(GenBank登录号为AY531262.1)第546位碱基存在G＞C的突变，简称为tva
546G＞C
突变位点。
[0008]然后从体外、体内实验两个层面证实了该tva基因自然突变引起宿主抗ALV
‑
K的感染。具体原因在于Tva受体属于低密度脂蛋白受体(low
‑
density lipoprotein receptors，LDLR)家族成员，Tva受体蛋白胞外区域第11
‑
50位氨基酸残基之间存在一个由40个氨基酸
残基组成的LDL
‑
A重复基序，是介导ALV
‑
K感染宿主细胞的关键区域。LDL
‑
A重复基序富含6半胱氨酸，这6个半胱氨酸残基之间形成3个必需半胱氨酸二硫键，对稳定和保持Tva受体蛋白的结构和完整性至关重要。tva
546G＞C
突变引起tva基因编码序列CDS(tva基因mRNA参考序列NM_001044645.1)的第95位碱基发生G＞C突变，引起Tva受体蛋白胞外区域第11位氨基酸由半胱氨酸(Cys)置换为丝氨酸(Ser)，Cys11Ser置换导致半胱氨酸二硫键断裂，从而改变了Tva受体蛋白LDL
‑
A区域的结构稳定和完整性，导致tva基因表达一个缺陷型Tva受体蛋白，引起宿主对ALV
‑
K的感染产生遗传抗性。
[0009]一种检测上述分子标记的引物，引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
[0010]上述分子标记，或引物在筛选/鉴定K亚群禽白血病抗性鸡中的应用。
[0011]进一步地，上述应用包括以下步骤：
[0012](1)提取待测样本基因组DNA，以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示引物PCR扩增包含tva
546G＞C
突变位点的tva基因片段，并测序判断是否为抗性鸡；
[0013](2)若tva基因DNA序列(GenBank登录号为AY531262.1)第546位碱基发生G突变为C的纯合突变(tva
546C/C
)，则具有对ALV
‑
K的感染产生遗传抗性的表型，即如待测鸡基因型为tva
546C/C
，则该个体为K亚群禽白血病抗性鸡；
[0014]若tva基因DNA序列第546位碱基没有发生G突变为C则为野生型(tva
546G/G
)，则对ALV
‑
K的感染易感(无抗性)；即如待测鸡的基因型为野生型tva
546G/G
，则该个体为K亚群禽白血病易感鸡；
[0015]若tva基因DNA序列第546位碱基发生G突变为C的杂合突变(tva
546G/C
)，则该个体为K亚群禽白血病易感鸡，但基因型均为tva
546G/C
种公鸡、种母鸡配种后产生的下一代可以产生基因型为tva
546C/C
的个体，则该个体为K亚群禽白血病抗性鸡。
[0016]进一步地，PCR扩增体系包括：DNA模板1μL，10
×
buffer 2.5μL，dNTPs 2μL，上下游检测引物1μL，KOD
‑
FX 0.5μL，最后用ddH2O补至25μL。
[0017]进一步地，PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃后延伸5min，最后4℃保存。
[0018]上述分子标记，或引物在K亚群禽白血病抗性鸡育种中的应用。
[0019]一种检测/筛选K亚群禽白血病抗性鸡的试剂盒，包括上述引物。
[0020]上述试剂盒在K亚群禽白血病抗性鸡育种中的应用。
[0021]本专利技术的有益效果：
[0022]本专利技术首次在中国鸡种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鸡K亚群禽白血病遗传抗性分子标记tva
546G>C
，其特征在于，所述分子标记为tva基因DNA序列在第546位碱基处的发生G
→
C碱基突变。2.一种扩增权利要求1所述的分子标记的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。3.权利要求1所述的分子标记，或权利要求2所述的引物在筛选/鉴定K亚群禽白血病抗性鸡中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测样本基因组DNA，以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示引物PCR扩增包含tva
546G>C
突变位点的tva基因片段，并测序对tva
546G>C
突变位点进行基因分型；(2)若待测样本tva基因存在G＞C...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢青梅，陈伟国，李文雪，徐慧娟，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：