SlMPP6基因在调控番茄灰霉病抗性中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种SlMPP6基因在调控番茄灰霉病抗性中的应用，该SlMPP6基因的序列如SEQ ID NO.2所示，可以通过对其进行剪切编辑来降低番茄对灰霉病的抗性，还可以通过将其超表达提升番茄对灰霉病的抗性，从而可以应用于改良植物育种。植物育种。植物育种。

Application of slmpp6 gene in regulating tomato gray mold resistance

【技术实现步骤摘要】
SlMPP6基因在调控番茄灰霉病抗性中的应用


[0001]本专利技术涉及植物基因工程
，具体涉及一种SlMPP6在调控番茄灰霉病抗性中的应用。

技术介绍

[0002]茄灰霉病已成为危害番茄生产的重要病害之一。番茄灰霉病主要由灰葡萄孢菌引起。灰葡萄孢菌属于半知菌亚门、葡萄孢属(Botrytis cinerea)，是一种死体营养型真菌，寄主多达235种，不仅危害番茄、马铃薯等蔬菜作物，还可侵染葡萄、草莓、鲜花切花等重要的水果花卉，使之软化腐烂，丧失商品价值，引起园艺产业采前采后的重大损失。
[0003]目前，生产上防治灰霉病主要采用物理防治、化学防治及生物防治相结合的办法。物理防治只能从表面上对灰霉菌加以控制，不能解决根本问题；化学防治虽然可以较为有效地杀灭灰霉菌，但是会带来有毒农药残留与环境污染的问题(Hedjaroude,2007；Li et al.,2015)；生物防治利用生防菌、植物诱抗剂、植物内生菌等抑制灰霉菌的繁殖或诱导植物自身的抗性(Delong et al.,2018)，虽然取得了一些效果，但是应用生物防治制剂也面临田间效果不稳定的问题。
[0004]因此，依然有必要有针对性培育抗病品种才是防治灰霉病的有效途径。

技术实现思路

[0005]基于此，有必要提供一种SlMPP6在调控番茄抗灰霉病中的应用，针对性培育改良灰霉病的抗性作物品种。
[0006]本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术提供SlMPP6基因或其编码的蛋白在调控番茄灰霉病抗性中的应用，所述SlMPP6基因的序列如a)或b)所示：
[0008]a)如SEQ ID NO.2所示的序列；
[0009]b)SEQ ID NO.2所示序列经取代、缺失和/或添加一个或者多个核苷酸且能够编码具有调控番茄灰霉病抗性功能蛋白的序列。
[0010]本专利技术还可以提供SlMPP6基因或其编码的蛋白在用于改良作物灰霉病抗性育种中的应用，所述SlMPP6基因的序列如a)或b)所示：
[0011]a)如SEQ ID NO.2所示的序列；
[0012]b)SEQ ID NO.2所示序列经取代、缺失和/或添加一个或者多个核苷酸且能够编码具有调控作物灰霉病抗性功能蛋白的序列。
[0013]在其中一些实施例中，所述SlMPP6基因所编码的蛋白的氨基酸序列见SEQ ID NO.1所示。
[0014]在其中一些实施例中，扩增SlMPP6基因的ORF的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
[0015]在其中一些实施例中，本专利技术采用基因编辑敲除SlMPP6基因以降低番茄灰霉病抗
性。
[0016]在其中一些实施例中，本专利技术采用CRISPR
‑
Cas9基因编辑技术敲除番茄的SlMPP6基因。其中，CRISPR
‑
Cas9基因编辑技术的双靶点引物如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。
[0017]在其中一些实施例中，本专利技术通过在番茄体内超量表达SlMPP6基因以提升番茄灰霉病抗性。
[0018]本专利技术的有益效果是：
[0019]与现有技术相比，本专利技术首次探索发现SlMPP6基因可以调控番茄对灰霉病的抗性，从而能够利用该基因进行植物灰霉病抗性改良，便于解决种质资源匮乏的问题，还可以保证甚至提高番茄质量。
附图说明
[0020]图1为SlMPP6正义(超量)表达载体构建过程。
[0021]图2为基因编辑载体构建过程。
[0022]图3为SlMPP6在瞬时转化的烟草中的蛋白表达：1、2、3代表三片不同的叶，即三个生物学重复。
[0023]图4为SlMPP6超量植株中SlMPP6的蛋白表达情况。
[0024]图5为SlMPP6基因编辑植株中基因的编辑情况比对。
[0025]图6为SlMPP6基因编辑植株中基因的氨基酸序列比对。
[0026]图7为转基因材料离体叶片接种灰霉菌叶片发病情况。
[0027]图8为转基因材料离体叶片接种灰霉菌叶片病斑面积统计：图A为超量株系与对照A57病斑面积统计，图B为敲除株系与对照ATY(通过A57与抗黄化曲叶病毒病优良自交系杂交并多代回交育成)病斑面积统计
[0028]图9为抗感材料中SlMPP6受灰霉菌的诱导情况。
[0029]图10为SlMPP6在番茄不同发育过程中的组织表达情况。
具体实施方式
[0030]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。
[0031]以下各实施例，仅用于说明本专利技术，但不止用来限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0032]在本专利技术实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本专利技术实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0033]实施例1
[0034]本实施例探究发现番茄SlMPP6基因所编码的氨基酸序列如下：
[0035]MAKRELSGTLRNLKFMQRASLREEKPKKEEEVIPDGNFSSSSAPKRCVIIMEGDPHPGAIKGRMSFQGFNPSIDKLSEEASKPRSEGSASPACSSETSEWITKRENGTSQYGLENSDVDDTYDDPNEDIKWKQDNTSSERQYSNKSHKRVLDDPASSPSSSQRSKMPQRLDWSVLKPPKSQKRRR(SEQ ID NO.1)
[0036]番茄SlMPP6的cDNA序列如下：
[0037]gagcaggcccatttgagttcgaggaaaatttgttattttgaactcgagaagaacctcttcggttcagtaaactttttttagccctttggagttagctcgaggctagcgccggcgccgtcaccttgccggaaaattcaagaatagcaagtggggaaaagcaattttcagtttcggtgtgccataagaagttgttctgtaaatcagaatggccaaacgtgaactatccggtaccttgaggaacttgaagtttatgcaaagggcttctctcagagaggaaaagcccaagaaggaagaagaagtgatacctgatggaaacttctcctcctctagtgctcccaaaagatgtgttatcattatggaaggggatccccatcctggggctataaaaggtcggatgtcttttcaaggttttaatccttctattgataaattgagtgaagaagcttcaaaaccacgctccgaaggttctgcttcccctgcttgttcttcggagacgagtgaatgg本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.SlMPP6基因或其编码的蛋白在调控番茄灰霉病抗性中的应用，其特征在于，所述SlMPP6基因的序列如a)或b)所示：a)如SEQ ID NO.2所示的序列；b)SEQ ID NO.2所示序列经取代、缺失和/或添加一个或者多个核苷酸且能够编码具有调控番茄灰霉病抗性功能蛋白的序列。2.SlMPP6基因或其编码的蛋白在用于改良作物灰霉病抗性育种中的应用，其特征在于，所述SlMPP6基因的序列如a)或b)所示：a)如SEQ ID NO.2所示的序列；b)SEQ ID NO.2所示序列经取代、缺失和/或添加一个或者多个核苷酸且能够编码具有调控作物灰霉病抗性功能蛋白的序列。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，SlMPP6基因所编码的蛋白的氨基酸序列见SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王涛涛，胡国煜，罗丹，孙文慧，叶志彪，张俊红，杨长宪，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：