用肝特异性基因疗法载体治疗遗传性血管性水肿制造技术

本文提供了通过使具有HAE的受试者中的C1酯酶抑制剂蛋白的水平正常化来治疗C1酯酶抑制剂缺乏的组合物和方法。制剂缺乏的组合物和方法。

Treatment of hereditary angioedema with liver specific gene therapy vector

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用肝特异性基因疗法载体治疗遗传性血管性水肿


[0001]本文提供了重组腺伴随病毒(rAAV)载体和病毒颗粒，其用于通过实现C1酯酶抑制剂(C1EI或C1
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INH)在受试者肝脏中的长期表达来治疗遗传性血管性水肿。

技术介绍

[0002]遗传性血管性水肿(HAE)由被称作SERPING1的C1EI基因中的突变引起。大多数患者(85％)具有低水平的C1EI(被称作I型HAE)，而少数(15％)具有正常或升高水平的突变C1EI，其为功能失调的(被称作II型HAE)。存在第三种类型的HAE(III型HAE)，其中患者具有正常的C1EI蛋白，但具有在其它基因(诸如因子XII基因)中的突变，其导致HAE。I型和II型HAE(其特征在于功能性血浆C1酯酶抑制剂的缺乏)可以由于补体途径和/或接触活化途径的失调活化而导致炎症危象。危象表现为荨麻疹和/或血管性水肿的症状，诸如皮肤和/或粘膜的肿胀(皮下水肿或粘膜下水肿)，包括呼吸道和胃肠道。喉部肿胀可以造成致死性窒息。严重肿胀的反复发作可以影响臂、腿、面部、肠道和气道，它们是疼痛的、毁容的，并且如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组载体构建体，其包含可操作地连接至异源肝特异性转录调节区的编码功能性C1酯酶抑制剂(C1EI)的核酸序列，任选包含SEQ ID NO:1、10、11、12、13、59或60的核酸序列。2.根据权利要求1所述的载体构建体，其中所述哺乳动物是人，并且所述C1EI是人C1EI。3.根据权利要求1或2所述的载体构建体，其中所述功能性C1EI包含与SEQ ID NO:2的氨基酸23
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500具有至少95％同一性的氨基酸序列。4.根据前述权利要求中任一项所述的载体构建体，其中所述肝特异性转录调节区包含合成启动子序列，所述合成启动子序列包含hAAT启动子和HCR增强子/ApoE增强子的部分。5.根据权利要求4所述的载体构建体，其中所述肝特异性转录调节区包含(a)与SEQ ID NO:16具有至少90％同一性的缩短的ApoE增强子序列；(b)与SEQ ID NO:3具有至少90％同一性的α抗胰蛋白酶(hAAT)近侧启动子序列，和/或(c)一个或多个增强子，其选自(i)与SEQ ID NO:4具有至少90％同一性的ApoE/HCR增强子。6.根据权利要求4所述的载体构建体，其中所述肝特异性转录调节区包含(a)与SEQ ID NO:17具有至少90％同一性的α
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微球蛋白增强子序列，和(b)与SEQ ID NO:3具有至少90％同一性的α抗胰蛋白酶(AAT)近侧启动子。7.根据权利要求4所述的载体构建体，其中所述肝特异性转录调节区包含与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的核苷酸序列。8.根据前述权利要求中任一项所述的载体构建体，所述载体构建体进一步包含多腺苷酸化信号。9.根据权利要求8所述的载体构建体，其中所述多腺苷酸化信号是人生长激素多腺苷酸化信号或其功能片段。10.根据前述权利要求中任一项所述的载体构建体，所述载体构建体进一步包含内含子。11.根据权利要求10所述的载体构建体，其中所述内含子是复杂的hAAT/血红蛋白内含子序列。12.根据权利要求10所述的载体构建体，其中所述内含子包含与SEQ ID NO:6或61
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69中的任一个具有至少80％同一性的核苷酸序列。13.根据权利要求10
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12中任一项所述的载体构建体，其中所述编码功能性C1酯酶抑制剂(C1EI)的核酸序列包含内含子。14.根据前述权利要求中任一项所述的载体构建体，所述载体构建体进一步包含来自AAV2的AAV 5'ITR和/或AAV3'ITR。15.根据权利要求1所述的载体构建体，所述载体构建体包含与SEQ ID NO:9、20
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36、57或58中的任一个具有至少80％同一性的核苷酸序列。16.根据前述权利要求中任一项所述的载体构建体，所述载体构建体是约2.7kb至约4kb、或约4kb至约5kb大小的rAAV载体构建体。17.一种rAAV颗粒，其包含根据前述权利要求中任一项所述的载体构建体和AAV衣壳。18.根据权利要求17所述的rAAV颗粒，其包含AAV5型衣壳。19.根据权利要求17所述的rAAV颗粒，其包含猿猴AAV衣壳。
20.根据权利要求17所述的rAAV颗粒，其包含狒狒衍生的AAV衣壳。21.根据权利要求17
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20中任一项所述的rAAV，其中所述rAAV颗粒包含具有肝嗜性的AAV衣壳。22.一种生产rAAV颗粒的方法，所述方法包括下述步骤：(a)给允许AAV复制的细胞提供一种或多种核酸构建体，其包含：(i)重组载体构建体，所述重组载体构建体包含(1)至少一个AAV ITR，(2)异源肝特异性转录调节区，和(3)编码功能性C1EI的核酸，(ii)编码一种或多种AAV Rep蛋白的核苷酸序列，其可操作地连接至能够驱动Rep蛋白在所述细胞中的表达的启动子；和(iii)编码一种或多种AAV衣壳蛋白的核苷酸序列，其可操作地连接至能够驱动衣壳蛋白在所述细胞中的表达的启动子；(b)在允许Rep和衣壳蛋白表达的条件下培养所述细胞；和任选地(c)回收AAV颗粒。23.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：生物马林药物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：