测定水凝胶中透明质酸钠含量的方法技术

本发明专利技术涉及测定水凝胶中透明质酸含量的方法，所述方法包括以下步骤：a)制备四硼酸钠的硫酸溶液作为试剂A；b)通过将咔唑溶解在乙醇中制备试剂B；c)通过将水凝胶溶解在水溶液中制备测试溶液；d)用超声波处理所述测试溶液一段足以获得宏观上均匀溶液的时间；e)通过将葡糖醛酸或含葡糖醛酸的物质溶解在水溶液中来制备参比原液；f)通过在水溶液中稀释所述参比原液来制备至少3种参比溶液，优选浓度为0.0005％w/v至0.0100％w/v，优选0.0010％w/v至0.0050％w/v；g)通过混合所述试剂A、所述试剂B和以下之一来制备试管：参比溶液、测试溶液、水溶液(空白)和可选的干扰溶液(交联剂样品或添加剂样品)；将每个试管置于水浴上至少5分钟，然后将它们冷却至室温；h)相对于所述空白和可选的所述干扰样品，读取在波长500nm至580nm处的吸光度，优选在波长约530nm处的吸光度。度。度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】测定水凝胶中透明质酸钠含量的方法


[0001]本专利技术涉及测定水凝胶中透明质酸钠含量的方法。本专利技术特别涉及用作填充剂并含有透明质酸和交联透明质酸的水凝胶。

技术介绍

[0002]透明质酸，也称为透明质烷或透明质酸盐(HA)，由于其不同的生理功能而被认为是重要的糖胺聚糖。该聚合物由通过β1
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3和β1
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4糖苷键连接的葡糖醛酸(UDP
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GlcUA)和N
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乙酰葡糖胺(UDP
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GlcNAc)的二糖重复组成(Purcell BP，Kim IL，Chuo V，Guinen T，Dorsey SM，Burdick JA，(将硫酸化透明质酸大分子单体掺入可降解水凝胶支架中以实现持续分子递送，生物材料科学2009；27：417
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281，Volpi N，Schiller J，Stern R，Soltes L，透明质酸的作用、代谢、化学修饰和应用，现代药物化学2009；16：1718
‑
452)。
[0003]与其他糖胺聚糖相比，HA是唯一的非硫酸化聚合物，其允许分子是刚性和直线型的。它通过称为透明质酸合酶(HAS)的整合膜酶在所有哺乳动物细胞、两栖动物和细菌的质膜中产生(Chen WYJ，Abatangelo G，透明质酸在伤口修复中的作用，创伤修复和再生1999；7：79
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893)，所述透明质酸合酶根据其产生生物体具有几种同种型。在人类中，HA存在于所有器官中，并且尤其在结缔组织中丰富(Fraser JR，Laurent TC，透明质酸的周转和代谢，汽巴基础研讨会1989；143(41
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49)：281
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5)。HA在玻璃体液(Brewton RG，Mayne R，哺乳动物玻璃体液含有透明质酸分子网络：使用聚集蛋白聚糖和连接蛋白的透明质酸结合区(G1)的电子显微镜分析，实验细胞研究1992；198：237
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49)、关节的滑液(Engstrom
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Laurent A，关节疾病中的透明质酸，内科学杂志1997；242：57
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606)和脐带(Yanagishita M，女性生殖器官中的蛋白多糖和透明质酸，EXS.1994；70：179
‑
90)中的软骨组织中达到更高的浓度，并且负责维持组织稳态(Fraser JR，Laurent TC，Laurent UB，透明质酸的性质、分布、功能和周转，内科学杂志1997；242：27
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33)。
[0004]据报道，随着衰老，HA产生减少，这导致皮肤的脱水和弹性丧失，从而导致皱纹的出现(Gold M，透明质酸真皮填充剂在美容应用中的科学与艺术，美容皮肤病学杂志2009；8：301
‑
7)。HA的特征在于几种化学性质，这使其对于不同的应用具有吸引力：高吸湿性、其粘弹性、高生物相容性、非免疫原性和降解时没有毒性产物。HA的使用已经在眼科化妆品(De Figueiredo ES，de Macedo AC，de Figueiredo PFR，de Figueiredo RS，透明质酸在眼科的应用Arq Bras Oftalmol.2010；73：92
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5)、外科手术(Kogan G，Soltes L，Stern R，Gemeiner P，透明质酸：具有广泛范围的生物医学和工业应用的天然生物聚合物，生物技术快报2007；29：17
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25)，作为药物递送系统(Brown MB，Jones SA，透明质酸：用于将药物局部递送至皮肤的独特局部载体，欧洲皮肤病学和性病学会杂志2005；19：308
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18)、风湿病学(Greenberg DD，Stoker A，Kane S，Cockrell M，Cook JL，两种不同透明质酸产品在骨关节炎的共培养模型中的生化作用，骨关节炎与软骨2006；14：814
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22)、耳鼻喉科(Ramos HVL，Neves LR，Martins JRM，Nader HB，Pontes P，衰老对雌性大鼠声带中透明质酸浓度的影响，2012；78：14
‑
8)和泌尿科(Schiraldi C，Gatta A La，Rosa M De：生物技术制备透明质
酸及其在生物高分子中的应用，2010；387
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412)中看到了结果。然而，在所有先前提及的应用中，HA在皮肤病学领域中在皮肤填充剂中的使用更频繁。最后，在组织工程中，HA用作可植入生物体中而不引起过敏反应或免疫应答的组织的机械和物理上适当的支持物(Nesti LJ，Li W
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J，Shanti RM，Jiang YJ，Jackson W，Freedman BA，Kuklo TR，Giuliani JR，Tuan RS，使用新型透明质酸
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纳米纤维支架(HANFS)汞合金的椎间盘组织工程，组织工程A部分2008；14：1527
‑
37)。
[0005]近年来，真皮填充剂的普及迅速增长，因为它们提供了先前仅通过手术可实现的恢复和增强的美学改善，但成本较低并且恢复时间有限至没有。根据来自美国美容整形外科协会(ASAPS)的数据，2011年进行了超过160万次真皮填充物治疗，使其成为继神经调节剂之后在美国进行的第二大流行的非手术美容程序；后一种程序通常与真皮填充物注射一起进行(美国美容整形外科学会，整容手术国家数据库统计2012，可从http://www.surgery.org/sites/default/files/ASAPS
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2011
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Stats.pdf.获得，于2013年9月13日访问)。随着公众对真皮填充剂的认识和接受度的增长，市场规模也在增长。它们的主要适应症是皱纹和褶皱的填充，以及由于疾病或年龄引起的软组织损失的矫正(Rzany B，Hilton S，Prager W等人，猪胶原蛋白在美容医学中的应用专家指南，J Dtsch Dermatol Ges.2010；8(3)：210
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217)。填充剂越来越多地用于体积替换和增强程序(Goldberg DJ，标签外填充剂使用的法律后果，皮肤病治疗2006；19(3)：189
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193)，包括脸颊和下巴增大、泪槽矫正、鼻整形、面中部丰盈、丰唇、手部年轻化和面部不对称的矫正。
[0006]中等持续时间的生物可降解填充剂，如非交联胶原蛋白和透明质酸(HA)填充剂，被身体相当快地再吸收，因此它们的作用相对短暂。HA衍生物是欧洲和美国使用最广泛的可生物降解填充剂(Zielke H，Wolber L.，Wiest L，Rzany B，不同可注射填充剂的风险概况：可注射填充剂安全性研究(IFS研究)的结果，皮肤外科2008；34(3)：326
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.测定水凝胶中透明质酸含量的方法，所述方法包括以下步骤：a.制备四硼酸钠的硫酸溶液作为试剂A；b.通过将咔唑溶解在乙醇中制备试剂B；c.通过将水凝胶溶解在水溶液中制备测试溶液；d.用超声波处理所述测试溶液一段足以获得宏观上均匀溶液的时间；e.通过将葡糖醛酸或含葡糖醛酸的物质溶解在水溶液中来制备参比原液；f.通过在水溶液中稀释所述参比原液来制备至少3种参比溶液，优选浓度为0.0005％w/v至0.0100％w/v，优选0.0010％w/v至0.0050％w/v；g.通过混合所述试剂A、所述试剂B和以下之一来制备试管：参比溶液、测试溶液、水溶液(空白)和可选的干扰溶液(交联剂样品或添加剂样品)；将每个试管置于水浴上至少5分钟，然后将它们冷却至室温；h.相对于所述空白和可选的所述干扰样品，读取在波长500nm至580nm处的吸光度，优选在波长约530nm处的吸光度。2.根据权利要求1所述的方法，还包括在所述步骤c之后的以下步骤：c2.将所述测试溶液加热至高于室温的温度，优选75℃至85℃，持续至少15分钟，优选至少2小时，更优选约3小时，优选同时连续搅拌。3.根据权利要求1
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2中任一项所述的方法，其中，在所述步骤g中，所述水浴为热浴，并且所述时间优选为约15分钟。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特，
申请(专利权)人：尤碧护理有限责任公司，
类型：发明
国别省市：