本申请属于生物实验仪器设备技术领域，具体涉及一种Clarity数字PCR仪用反应产物回收装置。该装置具体包括：可分开或者组合联体的由8个小型离心管组合而成的8联体离心管，和用于容纳放置单个小型离心管的大型离心管；小型离心管底部可开合设计；大型离心管上部内径可以架空盛放小型离心管。本申请基于现有Clarity数字PCR仪的使用缺陷，对现有配套的回收装置进行了针对性改进。初步应用效果表明，回收装置改进后，可以较好确保PCR扩增产物的有效和稳定回收，对于改善相关实验操作设计奠定了较好的设备基础，具有较好的实用价值和推广应用价值。广应用价值。广应用价值。
A reaction product recovery device for clarity digital PCR instrument
【技术实现步骤摘要】
一种Clarity数字PCR仪用反应产物回收装置
[0001]本申请属于生物实验仪器设备
，具体涉及一种Clarity数字PCR仪用反应产物回收装置。
技术介绍
[0002]数字PCR（dPCR）技术，是一种相较于荧光定量PCR(qPCR)技术的升级技术。其与荧光定量PCR的主要区别在于：dPCR是对PCR反应结束终点的荧光信号检测，并进行数字化定量，而qPCR则是PCR过程中实时检测荧光信号。之所以说数字PCR是荧光定量PCR的升级技术，其主要原因在于，dPCR利用单分子扩增来实现核酸的绝对定量，定量过程中不需依赖事先的标准曲线。
[0003]数字PCR的主要技术原理为：将单个DNA分子置于独立的反应室中，并对其进行PCR扩增；利用TaqMan探针法或染料法检测特定的靶序列。数字PCR技术主要包括三步：第一，通过特定技术将PCR反应混合液分散到几万个反应单元（反应室）；第二，单分子在反应室中扩增；第三，PCR结束后检测荧光信号，最后通过泊松分布统计数数，计算出样本的拷贝数，实现核酸分子的绝对定量。
[0004]与qPCR相比，dPCR的绝对定量不需利用标准曲线来实现具体定量，而是直接通过单分子扩增结合泊松分布统计，来实现绝对定量。因此，数字PCR与荧光定量PCR的主要区别之一在于：数字PCR需要进行分区后扩增，而这种分区既可实现核酸分子的单分子扩增，从而提高扩增效率，同时也可以提高荧光检测的灵敏性和数据的可重复性，所以数字PCR具有检测精度高、重复性好和绝对定量的相对优势。
[0005]实际应用中，dPCR需要将由若干（一般上万）毛细管组成的芯片置于离心管内进行PCR反应，但由于这种反应属于微量反应，因此对于相关实验操作要求较高，而由此导致部分反应操作后无法有效回收扩增产物，进而导致dPCR的技术优势无法充分和有效发挥，为此，极有必要就相关设备进行进一步改进。
技术实现思路
[0006]针对现有技术中相关dPCR设备无法有效回收PCR扩增产物的缺陷，本申请目的在于提供一种Clarity数字PCR仪用反应产物回收装置，从而为相关实验的稳定开展奠定一定技术基础。
[0007]本申请所采取的技术方案详述如下。
[0008]一种Clarity数字PCR仪用反应产物回收装置，具体包括：可分开或者组合联体的由8个小型离心管组合而成的8联体离心管（组合时，具体例如采用按扣方式、或者螺栓等连接方式进行连接固定），和用于容纳放置单个小型离心管的大型离心管；
[0009]所述小型离心管，为带有密封用盖体的锥形管，每个小型离心管规格为0.25ml，每个小型离心管对应放置一枚Clarity数字芯片；同时，每个小型离心管底部可开合设计；
[0010]所述大型离心管，同样为带有密封用盖体的锥形管，但管体上部内径与小型离心
管外径相适应，具体而言，在将小型离心管置于大型离心管内腔时，大型离心管上部内径可以架空盛放小型离心管；所述大型离心管，具体规格为1.5ml。
[0011]所述小型离心管，用于盛放Clarity数字PCR 8联管芯片；
[0012]具体实验操作时：首先，将各小型离心管组合成为一个8联体离心管，然后按照现有方式进行PCR扩增，PCR扩增结束后，将8联体离心管拆分为单个的小型离心管。随后打开小型离心管底部开口，并将小型离心管架空置于大型离心管内。最后，采用常规离心机对大型离心管进行离心操作，从而回收小型离心管内的PCR扩增产物。
[0013]总体上，本申请基于现有Clarity数字PCR仪的使用缺陷，对现有配套的回收装置进行了针对性改进。初步应用效果表明，回收装置改进后，可以较好确保PCR扩增产物的有效和稳定回收，对于改善相关实验操作设计奠定了较好的设备基础，具有较好的实用价值和推广应用价值。
附图说明
[0014]图1为现有Clarity 8联管芯片结构示意图；
[0015]图2为现有实验操作结果；
[0016]图3为本申请所提供回收装置使用状态结构示意图；
[0017]图4为采用本申请回收装置所回收的扩增产物的电泳检测结果。
具体实施方式
[0018]下面结合实施例对本申请技术方案做进一步解释说明。在介绍具体实施例前，为便于本领域技术人员详细了解本申请的相关研发情况，就下述实施例中所涉及的部分实验材料、检测方法等背景性实验情况简介如下。
[0019]主要设备及物料：
[0020]Clarity数字PCR 8联管芯片、Clarity数字PCR系统，Clarity数字PCR染料法扩增试剂，均为新加坡的JN Medsys公司产品；
[0021]琼脂糖水平电泳仪，北京六一。
实施例
[0022]以新加坡的JN Medsys的Clarity数字PCR仪具体为例，现有技术进行PCR实验时，需要采用一种Clarity数字芯片并将其配套置于0.25ml规格的8联体离心管内（将这一套简称为8联管芯片）进行实验操作。具体而言：如图1所示，每个芯片（离心管内灰色块体所示）为由15000个毛细管组成的实验装置，其厚度为1mm左右，芯片表面呈下边缘窄、上边缘宽的梯形结构。实际实验时，在8联体离心管的每个离心管内分别固定芯片，以此作为Clarity数字PCR平台的分区装置。随后，利用配套仪器完成每个离心管内的PCR反应液的分区，进而进行PCR单分子扩增。反应完成后，回收芯片中扩增后的产物，并进行进一步检测分析。
[0023]但由于相关反应属于微量反应，按照现有相关报道进行操作时，无法有效回收反应产物。例如，参考《Application of digital PCR with chip
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in
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a
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tube format to analyze Adenomatous polyposis coli ( APC ) somatic mosaicism》（T Kahyo et.al，Clinica Chimica Acta，2017）中操作流程，专利技术人实际操作后，无法有效回收到PCR扩增产
物。具体回收操作而言：
[0024]首先，吸出8联管芯片中封闭用的油；
[0025]随后，加100ul TE buffer（10mM Tris
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HCl，PH=8.0；0.1mM EDTA）进行溶解，Vortex震荡30s；
[0026]最后，将混合液转移到新的离心管中，用乙醇沉淀回收的DNA。
[0027]但具体结果如图2所示，从电泳条带结果可以看出，无法回收扩增产物。
[0028]需要说明的是，上述回收过程中，为排除溶解用水或者振荡操作等因素影响，专利技术人分别严格按照文献报道方法采用100ul的无核酸酶水(无核酸酶水和TE buffer对DNA溶解性是一样的，但是TE buffer更适合DNA的长期保存)、延长震荡时间（延长到1min）进行了多次实验，但均无法有效回收获得扩本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种Clarity数字PCR仪用反应产物回收装置，其特征在于，该装置具体包括：可分开或者组合联体的由8个小型离心管组合而成的8联体离心管，和用于容纳放置单个小型离心管的大型离心管；所述小型离心管，为带有密封用盖体的锥形管，每个小型离心管对应放置一枚Clarity数字芯片；同时，每个小型离心管底部可开合设计；所述大型离心管，同样为带有密封用盖体的锥形管，但管体上部内径与小型离心管外径相适应，具体而言...
【专利技术属性】
技术研发人员：令吉明，张宝珑，郑琳琳，刘昆，
申请(专利权)人：杭州晶佰生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：
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