一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法技术

本发明专利技术属于秦岭大熊猫繁殖技术领域，具体涉及一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法。包括：步骤1：雄性秦岭大熊猫麻醉保定，并对生殖器官检查，然后采用直肠电刺激方法采精并收集；步骤2：对步骤1收集的雄性秦岭大熊猫精液品质检查；步骤3：将步骤2检查后的雄性秦岭大熊猫精液颗粒冷冻或细管冷冻储存或试管冻存；步骤4：使用步骤3储存的雄性秦岭大熊猫精液，进行雌性秦岭大熊猫的人工授精。通过人工采集大熊猫精液并进行冷冻，雌性大熊猫发情期解冻冷藏精液进行人工授精，抓住短暂的授精时间，提高授精成功率。提高授精成功率。提高授精成功率。

A method of artificial insemination and insemination for giant pandas in Qinling Mountains

【技术实现步骤摘要】
一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法


[0001]本专利技术属于秦岭大熊猫繁殖
，具体涉及一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法。

技术介绍

[0002]秦岭是中国大熊猫纬度最高的分布区，种群密度居全国之首。秦岭大熊猫是大熊猫的重要种群，具有独特的分布格局和种群进化史。秦岭大熊猫繁育的新生仔在出生时发育相当的不成熟，体重仅仅是它母亲体重的0.1％，初生幼仔体重很轻，初生重平均为145克左右，约为成年大熊猫体重的千分之一，最轻的为51克，最重的为225克，而且成长周期极为缓慢。最重要的是，秦岭大熊猫的自身繁殖能力很弱，自然发情期一年只有一次，期间主动交配时间为1
‑
3天，进一步的降低了大熊猫的繁殖率。
[0003]因此，为了提高大熊猫的繁殖率，需要人工进行大熊猫的采精和授精，可以有效的提高秦岭大熊猫的繁殖率，同时可以培育更加优良的秦岭大熊猫品种。

技术实现思路

[0004]针对上述存在的技术问题，本专利技术提供了一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法，通过人工采集大熊猫精液并进行冷冻，雌性大熊猫发情期解冻冷藏精液进行人工授精，抓住短暂的授精时间，提高授精成功率。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案如下：
[0006]一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法，包括如下步骤：
[0007]步骤1：雄性秦岭大熊猫麻醉保定，并对生殖器官检查，然后采用直肠电刺激方法采精并收集；
[0008]步骤2：对步骤1收集的雄性秦岭大熊猫精液品质检查；
[0009]步骤3：将步骤2检查后的雄性秦岭大熊猫精液颗粒冷冻或细管冷冻储存；
[0010]步骤4：使用步骤3储存的雄性秦岭大熊猫精液，进行雌性秦岭大熊猫的人工授精。
[0011]优选地，所述步骤1的具体操作为：
[0012]步骤1.1：发情期雄性秦岭大熊猫禁食12h，促使胃内食物排空；
[0013]步骤1.2：使用氯胺酮4mg/kg
‑
8mg/kg，辅助以异氟烷0.3mg/kg
‑
0.5mg/kg或隆朋0.3mg/kg
‑
0.5mg/kg，于大熊猫颈部或臀部进行肌肉注射麻醉；
[0014]步骤1.3：对步骤1.2麻醉后的雄性秦岭大熊猫的生殖器官检查；
[0015]步骤1.4：使用洁净纱布清理雄性秦岭大熊猫包皮内污物，使用37℃0.1％新洁尔灭多次清洗包皮内外，最后使用37℃灭菌生理盐水冲洗至无消毒剂残留；
[0016]步骤1.5：连接电刺激采精器，根据雄性秦岭大熊猫的后肢收缩程度，由低至高缓慢增加电压，连续刺激雄性秦岭大熊猫直肠20
‑
30次，每次2s，直至精液流出；
[0017]步骤1.6：如果第1次没有刺激出精液或精液量太少，则间隔5min后再重复1.5步骤1次；
[0018]步骤1.7：持38℃预温的集精杯，待精液流出后，迅速接取，直到精液不再流出。
[0019]优选地，所述步骤2的雄性秦岭大熊猫精液品质检查包括：精液气味检查、精液密度检查、精液pH值检查、精液精子活力检查、精液精子活率检查、精液精子运动状态检查、精液精子顶体完整性检查、精液精子形态检查、精液精子质膜完整性检查。
[0020]优选地，所述步骤2的精液精子顶体完整性检查为：吸取1μL精液+9μLPOPE染液，染色90s后涂片，待涂片干后用100
×
油镜观察并评级。
[0021]优选地，所述步骤3的颗粒冷冻具体操作为：
[0022]步骤3.1.1：将步骤2检查合格的雄性秦岭大熊猫精液用冷冻稀释液稀释，其中精液和稀释液比为1:3；
[0023]步骤3.1.2：将步骤3.1.1稀释后的大熊猫精液在4℃冰箱中平衡4h。
[0024]步骤3.1.3：将冻精板放入装有液氮的金属槽中浸泡3次，将冻精板提升到距液氮面5cm处，用温度计测量冻精板的温度，当温度下降到
‑
80℃时，用微量吸管快速地把平衡好的精液以40
‑
80μL/粒滴在冻精板上。
[0025]步骤3.1.4：步骤3.1.3完成2min后，把冻精板快速侵入
‑
196℃液氮中，用平衡好的镊子把冷冻精粒装入玻璃小瓶中，放进液氮罐长期保存。
[0026]优选地，所述步骤3的细管冷冻具体操作为：
[0027]步骤3.2.1：将步骤2检查合格的雄性秦岭大熊猫精液用TEST或SFS作1:3稀释；
[0028]步骤3.2.2：将步骤3.1稀释后的大熊猫精液在4℃冰箱中平衡4h。
[0029]步骤3.2.3：步骤3.2.2平衡后的大熊猫精液吸入细塑料管中，每管0.25mL，一端塞有棉花，另一端在注入精液后封闭，用在酒精灯上烧热的钳子融化塑料封闭。
[0030]步骤3.2.4：将步骤3.2.3封闭后的细塑料管放置于平衡好的试管架上层，温度为
‑
20℃，离液氮7.5cm，时间为1min；然后将细塑料管移至试管架下层，此时离液氮2.5cm，
‑
80℃，时间为1min；最后将细塑料管放入液氮中2min，之后装入纸筒中，放进液氮罐长期保存。
[0031]优选地，所述步骤3的试管冷冻具体操作为：
[0032]步骤3.3.1：取200μL采集的大熊猫精液加入400μL稀释液中；
[0033]步骤3.3.2：将稀释后的大熊猫精液装入1.5mL的塑料试管中，在4℃的冰箱中平衡4h；
[0034]步骤3.3.3：将步骤3.3.2平衡后的塑料试管置于离液氮7.5cm高的平板上冷冻10min，然后放入液氮中进行长期保存。
[0035]优选地，所述步骤4的具体操作为：
[0036]步骤4.1：使用37℃0.1％新洁尔灭清洗雌性秦岭大熊猫的外阴和肛门部，然后使用37℃灭菌生理盐水冲洗至无消毒剂残留；
[0037]步骤4.2：将球式玻璃输精器用于颗粒冷冻精液的输精，将金属输精器用于细管冷冻精液的输精；
[0038]步骤4.3：透明玻璃制成的量筒状开腔器插入雌性秦岭大熊猫阴道端的端口平滑部；
[0039]步骤4.4：将输精器插入开腔器，缓慢注入精液；
[0040]步骤4.5：做好人工授精记录，详细准确记录雌性雄性信息、使用精液信息、精液来源大熊猫信息、日期、授精次数。
[0041]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0042]1.用石蜡油润滑的手指伸入直肠内在输精管壶腹部区域反复前后按摩，可以提升采精量和采精成活率，避免或肠电刺激未采出精液；
[0043]2.采用阶梯温度冷冻保存，避免了之间冷冻对精子活性的降低，提高了冷冻保存的成功率；
[0044]3.本专利技术整体技术完整，可以有效提高大熊猫采精和授精的成功率，进而提高秦岭大熊猫的繁殖率。
附图说明
[0045]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1：雄性秦岭大熊猫麻醉保定，并对生殖器官检查，然后采用直肠电刺激方法采精并收集；步骤2：对步骤1收集的雄性秦岭大熊猫精液品质检查；步骤3：将步骤2检查后的雄性秦岭大熊猫精液颗粒冷冻或细管冷冻储存或试管冻存；步骤4：使用步骤3储存的雄性秦岭大熊猫精液，进行雌性秦岭大熊猫的人工授精。2.根据权利要求1所述的一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法，其特征在于：所述步骤1的具体操作为：步骤1.1：发情期雄性秦岭大熊猫禁食12h，促使胃内食物排空；步骤1.2：使用氯胺酮4mg/kg
‑
8mg/kg，辅助以异氟烷0.3mg/kg
‑
0.5mg/kg或隆朋0.3mg/kg
‑
0.5mg/kg，于大熊猫颈部或臀部进行肌肉注射麻醉；步骤1.3：对步骤1.2麻醉后的雄性秦岭大熊猫的生殖器官检查；步骤1.4：使用洁净纱布清理雄性秦岭大熊猫包皮内污物，使用37℃0.1％新洁尔灭多次清洗包皮内外，最后使用37℃灭菌生理盐水冲洗至无消毒剂残留；步骤1.5：连接电刺激采精器，根据雄性秦岭大熊猫的后肢收缩程度，由低至高缓慢增加电压，连续刺激雄性秦岭大熊猫直肠20
‑
30次，每次2s，直至精液流出；步骤1.6：如果第1次没有刺激出精液或精液量太少，则间隔5min后再重复1.5步骤1次；步骤1.7：持38℃预温的集精杯，待精液流出后，迅速接取，直到精液不再流出。3.根据权利要求2所述的一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法，其特征在于：所述步骤2的雄性秦岭大熊猫精液品质检查包括：精液气味检查、精液密度检查、精液pH值检查、精液精子活力检查、精液精子活率检查、精液精子运动状态检查、精液精子顶体完整性检查、精液精子形态检查、精液精子质膜完整性检查。4.根据权利要求3所述的一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法，其特征在于：所述步骤2的精液精子顶体完整性检查为：吸取1μL精液+9μLPOPE染液，染色90s后涂片，待涂片干后用100
×
油镜观察并评级。5.根据权利要求4所述的一种秦岭大熊猫人工采精及授精方法，其特征在于：所述步骤3的颗粒冷冻具体操作为：步骤3.1.1：将步骤2检查合格的雄性秦岭大熊猫精液用冷冻稀释液稀释，其中精液和冷冻稀释液比为1:3；步骤3.1.2：将步骤3.1.1稀释后的大熊猫精液在4℃冰箱中平衡4h；步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵鹏鹏，张丹辉，林鹏飞，沈洁娜，赵卫平，高更更，雷颖虎，
申请(专利权)人：秦岭大熊猫研究中心陕西省珍稀野生动物救护基地，
类型：发明
国别省市：