一种用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外泌体circRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外泌体circRNA标志物及其应用，属于分子诊断技术领域。本发明专利技术首次在胃癌血浆外泌体中发现了hsa_circ_0006853并确定了其对胃癌的诊断价值。本发明专利技术还提供了血浆外泌体circRNA的提取试剂盒，能够从血浆中方便、准确的提取和检测外泌体circRNA，有利于实验室和临床对血浆外泌体中的circRNA进行分析和应用。通过实验验证，本发明专利技术所述的标志物能够对胃癌进行有效的诊断和预后监测，并在一定程度上能够鉴别萎缩性胃炎患者，为临床的早期诊断和治疗靶点提供了重要依据。和治疗靶点提供了重要依据。和治疗靶点提供了重要依据。

A plasma exosome circrna marker for diagnosis and prognosis monitoring of gastric cancer and its application

【技术实现步骤摘要】
一种用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外泌体circRNA标志物及其应用


[0001]本专利技术属于分子诊断
，具体涉及一种用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外泌体circRNA标志物及其应用。

技术介绍

[0002]胃癌(Gastric cancer，GC)是世界范围内最常见的一种恶性肿瘤，胃癌的发生发展是一个多因素、多细胞、多步骤的过程，由于胃癌早期缺乏特异性症状，绝大多数确诊断病例处于晚期，预后较差，存在广泛的转移和高复发。且现有的治疗方法如化疗、放疗不仅副作用强且易发生耐药。因此，进一步探寻有助于胃癌早期诊断和预后判断且无创的相关分子标志物是目前亟需解决的重要问题。
[0003]环状RNA(circRNA)是一类由前体mRNA反向剪接产生的闭合环状非编码RNA分子，随着RNA深度测序技术和生物信息学的最新进展，已发现大量circRNA在哺乳动物细胞中表达丰富。而circRNA在真核生物中具有不同物种的保守性、高稳定性、在组织和发育阶段特异性表达等特点，目前研究证明circRNA可作为miRNA海绵，与蛋白结合、翻译蛋白、调节亲本基因转录等功能，并能被运输到体液中，具有作为生物标志物的巨大潜力。
[0004]外泌体(Exosome)是一类直径30～100nm的细胞外囊泡，由多种细胞分泌，几乎存在于所有的体液当中，通过其携带的蛋白质、脂质、核酸核代谢产物等来发挥细胞间通讯功能，参与免疫应答、病毒感染、代谢和心血管疾病、神经退行性疾病以及癌症进展等多种生理和病理过程。研究证实CircRNAs富含在外泌体中，通过外泌体开始循环并到达受体细胞，从而实现其各种生物学功能，circRNA作为一种稳定性较好生物标志物因其能在外泌体中大量富集，因此研究循环体液中外泌体circRNA标志物对疾病的诊断具有重要意义。
[0005]目前，临床上现有的胃癌诊断标志物如CEA、CA199、CA724等缺乏特异性，对临床真正起到辅助诊断的肿瘤标志物少，所以急需开发一种快速、准确的检测血浆中外泌体circRNA的方法。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外泌体circRNA标志物及其应用，所述血浆外泌体circRNA标志物能够对胃癌进行有效的诊断和预后监测，并在一定程度上能够鉴别萎缩性胃炎患者，为临床的早期诊断和治疗靶点提供了重要依据。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种血浆外泌体circRNA的提取试剂盒，包括提取血浆外泌体的试剂和提取外泌体circRNA的试剂；
[0009]所述提取血浆外泌体的试剂包括ExoQiuck Plasma prep and Exosome precipitationkit；
[0010]所述提取外泌体circRNA的试剂包括单独包装的：miRNeasy Serum/plasmakit、氯仿和无水乙醇。
[0011]本专利技术提供了一种利用上述提取试剂盒提取得到的用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外泌体circRNA标志物，所述血浆外泌体circRNA标志物包括hsa_circ_0006853，所述hsa_circ_0006853的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0012]本专利技术还提供了一种检测上述血浆外泌体circRNA标志物的试剂在制备胃癌诊断工具中的应用。
[0013]优选的，所述试剂包括针对hsa_circ_0006853设计的特异性引物对。
[0014]优选的，所述特异性引物对包括SEQ ID NO.2所示的上游引物和SEQ ID NO.3所示的下游引物。
[0015]本专利技术还提供了一种胃癌诊断试剂盒，包括SEQ ID NO.2所示的上游引物和SEQ ID NO.3所示的下游引物。
[0016]优选的，还包括构建qRT
‑
PCR体系的其他试剂。
[0017]优选的，还包括内参基因β
‑
Actin的引物对。
[0018]优选的，所述内参基因β
‑
Actin的引物对，上游引物如SEQ ID NO.4所示，下游引物如SEQ ID NO.5所示。
[0019]优选的，还包括反转录试剂。
[0020]有益效果：本专利技术提供了一种用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外泌体circRNA标志物，以及血浆外泌体circRNA的提取试剂盒，能够从血浆中方便、准确的提取和检测外泌体circRNA，有利于实验室及临床血浆外泌体circRNA的分析和应用。本专利技术还提供了hsa_circ_0006853的试剂盒，可以快速检测hsa_circ_0006853在内的多种circRNA，为胃癌的早期诊断和预后判断提供了一种有价值的标志物检测方法，也为分析更多的血浆外泌体circRNA应用于肿瘤标志物提供帮助。
附图说明
[0021]图1为本专利技术实施例提供的通过NTA(A)、电镜(B)、以及Western Blot鉴定(C)所分离的血浆外泌体粒径和纯度示意图；
[0022]图2为本专利技术实施例提供的hsa_circ_0006853和Actin分子进行实时荧光定量PCR的扩增曲线及融解曲线图；
[0023]图3为本专利技术实施例提供的hsa_circ_0006853进行实时荧光定量PCR扩增后产物琼脂糖电泳和测序鉴定示意图；
[0024]图4为本专利技术实施例提供的hsa_circ_0006853进行成环鉴定时RNaseR实验以及gDNA实验示意图；
[0025]图5为本专利技术实施例提供的实时荧光定量PCR比较胃癌患者、萎缩性胃炎患者、健康对照者血浆外泌体hsa_circ_0006853差异表达和术前术后的示意图；
[0026]图6为本专利技术实施例提供的ROC曲线分析血浆外泌体hsa_circ_0006853对胃癌诊断的特异性和灵敏性示意图。
具体实施方式
[0027]本专利技术提供了一种血浆外泌体circRNA的提取试剂盒，包括提取血浆外泌体的试剂和提取外泌体circRNA的试剂；
[0028]所述提取血浆外泌体的试剂包括ExoQiuck Plasma prep and Exosome precipitation kit；
[0029]所述提取外泌体circRNA的试剂包括单独包装的：miRNeasy Serum/plasma kit、氯仿和无水乙醇。
[0030]本专利技术对所述提取血浆外泌体的试剂和提取外泌体circRNA的试剂的来源并没有特殊限定，可利用本领域的常规市售试剂即可。如在本专利技术实施例中，以ExoQiuck Plasma prep and Exosome precipitation kit作为提取血浆外泌体的试剂，购自SBI公司，货号EXOQ5TM
‑
1；以miRNeasy Serum/plasma kit、氯仿和无水乙醇作为提取外泌体circRNA的试剂，且m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血浆外泌体circRNA标志物的提取试剂盒，其特征在于，包括提取血浆外泌体的试剂和提取外泌体circRNA的试剂；所述提取血浆外泌体的试剂包括ExoQiuck Plasma prep and Exosome precipitation kit；所述提取外泌体circRNA的试剂包括单独包装的：miRNeasy Serum/plasmakit、氯仿和无水乙醇。2.一种利用权利要求1所述提取试剂盒提取得到的用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外泌体circRNA标志物，其特征在于，所述血浆外泌体circRNA标志物包括hsa_circ_0006853，所述hsa_circ_0006853的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.一种检测权利要求2所述血浆外泌体circRNA标志物的试剂在制备胃癌诊断工具中的应用。4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述试剂包括针对...

【专利技术属性】
技术研发人员：许文荣，王冬丽，钱晖，李荣，张帆，邱双洋，黄晓娟，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：