一种产L-赖氨酸的枯草芽孢杆菌重组菌的构建及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种产L

Construction and application of a recombinant Bacillus subtilis producing l-lysine

【技术实现步骤摘要】
一种产L
‑
赖氨酸的枯草芽孢杆菌重组菌的构建及其应用


[0001]本专利技术涉及一种产L
‑
赖氨酸的枯草芽孢杆菌重组菌的构建及其应用，属于基因工程


技术介绍

[0002]L
‑
赖氨酸是动物和人类无法自身合成的氨基酸，属于八大必需氨基酸之一。由于在谷类在加工过程中赖氨酸很容易被破坏，L
‑
赖氨酸得率极低，故L
‑
赖氨酸称为第一限制性氨基酸。因此，L
‑
赖氨酸广泛应用在动物饲料中，具有平衡饲料中氨基酸组成，提高动物贵氨基酸的摄取和代谢，促进包括家畜、家禽和鱼类等在内的生长发育，进而提高饲料蛋白质的利用率，节约生产成本，减少环境污染。全球L
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赖氨酸市场目前估计为每年220万吨，并以每年10％左右的速度增长，在世界范围内年产量是继L
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谷氨酸后的第二位氨基酸。目前，工业上用于发酵生产L
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赖氨酸的菌种主要有大肠杆菌(Escherichia coli)和谷氨酸棒杆菌(Coryneba本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.代谢工程改造枯草芽孢杆菌促进L
‑
赖氨酸的合成，其特征在于，所述的重组菌以益生菌B.subtilis ACCC11025为宿主，将B.subtilis中thrD、zwf和gnd用来源C.glutamicum中lysC
311
、zwf
243
和gnd
361
替换，且B.subtilis中hom替换成来源C.glutamicum中hom
59
，最后再引入C.glutamicum中DapDH改变二氨基庚二酸途径碳分布而促进L
‑
赖氨酸的合成。2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌重组菌，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌包括B.subtilis XH0、B.subtilis XH1、B.subtilis XH2、B.subtilis XH3、B.subtilis XH4、B.subtilisXH5或B.subtilis XH6。3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌重组菌，其特征在于，所述的编码天冬氨酸激酶的基因lysC
311
来源于C.glutamicum，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。4.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌重组菌，其特征在于，所述的编码葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶的基因zwf
243
来源于C.glutamicum，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。5.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌重组菌，其特征在于，所述的编码6
‑
磷酸葡萄糖酸脱氢酶的基因gnd
361
来源于C.glutamicum，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。6.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌重组菌，其特征在于，所述编码高丝氨酸脱氢酶的hom
59
来源于C.glutamicum，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。7.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌重组菌，其特征在于，所述的编码二氨基庚二酸脱氢酶基因ddh来源于C.glutamicum，核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。8.一种权利要求1～7任一项所述的重组菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)天冬氨酸激酶基因lysC、葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶基因zwf、6
‑
磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因gnd和高丝氨酸脱氢酶基因hom的替换，以及异源表达DapDH基因ddh：以枯草芽孢杆菌ACCC11025为宿主，采用CRISPR
‑
Cas9系统将基因thrD、zwf、gnd和hom替换为来源于C.glutamicum的lysC
311
、...

【专利技术属性】
技术研发人员：康春涛，朱枝群，陈胜玲，张晓霞，
申请(专利权)人：江苏星海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：