一种能够靶向乙型肝炎病毒的药物构造及药物组合物制造技术

本发明专利技术提供了用于递送靶向乙型肝炎病毒(HBV)的siRNA分子的组合物和方法。所述siRNA分子可以是一种或多种核酸，包含核苷酸或核苷酸类似物。所述siRNA分子共价结合到肽对接载体(PDoV)上，并进一步共价结合到一个或多个GalNAc配体上。GalNAc配体上。

A pharmaceutical structure and pharmaceutical composition capable of targeting hepatitis B virus

【技术实现步骤摘要】
一种能够靶向乙型肝炎病毒的药物构造及药物组合物
[0001]相关专利申请的交叉引用
[0002]本申请旨在获得美国专利申请号为63/140,232(专利名称：TARGETED NUCLEIC ACID THERAPY FOR HEPATITIS B)、专利申请日为2021年1月21日的专利申请，以及中国专利申请号为2021102899267(专利名称：一种能够靶向乙型肝炎病毒的药物构造及药物组合物)、专利申请日为2021年3月18日的专利申请的权益和优先权，其全文以引用方式并入本文中。


[0003]本专利技术具体涉及一种能够靶向乙型肝炎病毒的药物构造及药物组合物。

技术介绍

[0004]乙型肝炎病毒
[0005]乙型肝炎病毒(HBV)是特性研究得最为彻底和最复杂的肝炎病毒之一。感染性粒子由病毒核心和外层表皮组成。核心含有环状部分双链DNA和DNA聚合酶，在受感染的肝细胞核内复制。乙型肝炎是由HBV引起的，可能引起危及生命的肝脏感染。它可以导致急性和慢性感染，使人们很高风险死于肝硬化和肝癌。Leung,Med.J.Malaysia；60Suppl B:63
‑
6.(2005)。世界卫生组织(WHO)估计，2015年全世界有2.57亿人患有慢性乙型肝炎。尽管有预防性疫苗和有效且耐受性良好的病毒抑制剂，但病患数量还在继续上升。然而，目前还没有有效的治疗方法可以清除HBV感染。
[0006]超过90％受感染的婴儿将会患上慢性乙型肝炎。患者可能无症状，也有的表现为非特异性症状，如疲劳和不适。如果不进行治疗，乙型肝炎可能在几十年内自行痊愈(不常见)，可能进展迅速，或缓慢发展为肝硬化。症状的缓解通常始于疾病严重程度的瞬时增加，导致血清从乙型肝炎e抗原(HBeAg)转换为乙型肝炎e抗原抗体(anti
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HBe)。此外，与丁型肝炎病毒(HDV)共同感染会导致最严重的HBV感染，如果不进行治疗，多达70％的患者会发生肝硬化。慢性HBV感染会增加患肝细胞性肝癌的风险。Christopher et al.,Clin Liver Dis；.23(3):557
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572(2019)
[0007]急性乙型肝炎可持续六个月(无论是否有病征)，感染者在这段期间可将病毒传染给其他人。一个简单的血液测试就能检测出血液中的HBV。急性感染的症状可能包括食欲不振、关节和肌肉疼痛、低烧以及胃痛。虽然大多数人没有症状，但他们可以在感染后60—150天出现症状，平均90天或3个月。有些人可能会出现更严重的症状，如恶心、呕吐、黄疸(眼睛和皮肤发黄)或胃部肿胀。
[0008]抗乙型肝炎药物研发的现状
[0009]免疫调节剂药物已用于治疗重症肺炎、免疫缺陷和慢性乙型肝炎Jiang,Vaccine；.30(4):758
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766(2012)。这些药物可以提高病人的免疫反应，特别是对HBV的特异性免疫，可能有助于免疫细胞识别和破坏HBV感染的细胞，清除这些细胞中的乙肝病毒。干扰素(IFN)是一种分泌性糖蛋白，具有抗病毒、抗增殖和免疫调节细胞因子的功能。此外，胸
腺肽
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α1是另一类免疫调节药物，其主要功能是促进T细胞向成熟阶段分化，增强对抗原等刺激物的反应。此外，多种类型的免疫细胞(如单核细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞和NK细胞)和非免疫细胞(如内皮细胞、表皮细胞和成纤维细胞)在刺激下合成和分泌细胞因子。
[0010]核苷和核苷类似物药物(统称：NA)也被用于治疗HBV感染。拉米夫定是一种嘧啶核苷类药物，是第一个被核准用于治疗慢性乙肝病毒感染的NA。替比夫定是一种治疗慢性乙型肝炎的特异性、选择性和口服的药物。其他药物如恩替卡韦、阿德福韦和替诺福韦也是口服抗病毒药物，可有效选择性抑制HBV感染。这些NA被整合到病毒DNA中，阻止病毒DNA的合成延伸。Kang et al.,Viruses；7:4960
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77(2015)
[0011]目前批准的每一种慢性乙型肝炎(CHB)临床干预治疗方法都需要对大多数患者进行长期的治疗。尽管使用目前的治疗方法持续抑制HBV DNA与临床结果的改善相关，但过高风险的肝细胞性肝癌(HCC)仍然存在，而且乙肝表面抗原(HBsAg)清除是不常见的。
[0012]siRNA的治疗
[0013]双链RNA已被证明可以通过RNA干扰(RNAi)抑制基因表达。小干扰RNA(siRNA)诱导的RNA干扰调控在治疗各种人类疾病方面显示出巨大的潜力，包括从癌症到其他传统的非药物性疾病。但是将siRNA导入到人体所需的组织内仍然是个难题。特别是，需要提高针对特定细胞类型或组织的核酸药物靶向性，以及开发无毒性的内涵体逃逸剂，这一点将在下文进一步解释。
[0014]目前，核酸药物常用的有效给药途径有两种。一种方法是使用含有多种成分的脂质纳米颗粒(脂质体)。另一种方法是利用含有GalNAc分子的偶联物靶向去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)。
[0015]RNA治疗的一个主要挑战是，所有传递到细胞的药物最终需要从内涵体逃逸出来。由于ASGPR的特性非常适合于大分子药物向肝细胞的传递，ASGPR靶向的GalNAc
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siRNA偶联物可以实现ASO和siRNA向肝脏的传递。特别是，肝细胞在其细胞表面表达数以百万计的ASGPR，它们以每10—15分钟快速循环一次。这些特性使得基于GalNAc的递送方法能够取得显著效果，即使在按目前假定认为的内涵体逃逸率小于0.01％的情况下。相比之下，ASO或RNA向其他组织的有效递送还没有实现。没有其他配体
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受体系统像ASGPR这样的高水平表达受体，也没有像ASGPR那样快速循环进入内涵体。事实上，大多数细胞表面受体的表达范围在每个细胞10000
‑
100000(或更低)，小窝蛋白和网格蛋白介导的内吞作用通常每90分钟循环一次。Juliano,Nucleic Acids Res.44,6518
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6548(2016)
[0016]对于所有RNA为基础的治疗，内涵体逃逸仍然是一大挑战。为了靶向肝细胞以外的细胞或组织，需要通过开发新的化学物质和材料来增强内涵体逃逸。小分子内涵体溶解剂，如氯喹，已被用来破坏或溶解内涵体，但在有效浓度下，这些药剂总是溶解细胞内的所有类型的内涵体，从而产生严重的毒性。
[0017]另一种内涵体逃逸的方法是将内涵体溶解肽或分子直接与RNA结合，但这会严重限制含有治疗性RNA的内涵体的作用。由于毒性效应，使用含有胆固醇或溶解性蜂毒肽的双分子动态聚合物(DPC)系统逃逸内涵体的多项临床试验都被迫终止。Wooddell,et al.,Mol.Ther.21,973
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985(2013)；Hou et al.,Biotechnol.Adv.33,931
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940(2015)
[0018]siRNA技术治疗乙型肝炎感染本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含共价连接到以下部位的肽对接载体的药物构造：(a)靶向部分；以及(b)首选的治疗性核酸，其中所述治疗性核酸抑制乙型肝炎病毒的复制。2.根据权利要求1所述的药物构造，其特征在于：所述治疗性核酸是siRNA分子。3.权利要求1或2所述的药物构造，其特征在于：所述siRNA由来自表1所示的核酸组成。4.根据权利要求1或2所述的药物构造，其特征在于：所述药物构造还包含与所述的首选siRNA分子相同或不同的第二种siRNA分子。5.根据权利要求1或2所述的药物构造，其特征在于：所述肽对接载体包括多个重复的组氨酸和赖氨酸残基。6.根据权利要求5所述的药物构造，其特征在于：所述肽对接载体具有如下结构式所示的结构I或II，其中A和B分别为H、K、R、HH、HHH、HHHH、HHK、HHHK或任何其他内涵体释放短肽的肽段序列，D是siRNA，R
L
是靶向配体，R
S
是核酸的共价连接器，其中X型位点用于结合靶向配体，Y型位点用于结合寡核苷酸，它们可以相同或不同。7.根据权利要求6所述的药物构造，其特征在于：所述肽对接载体结构为选自PDoV 1
‑
5组中的一种或多种：
8.根据权利要求1或2所述的药物构造，其特征在于：所述靶向部分包含通过分子式III或IV的接头与所述肽对接载体共价连接的配体：其中n为1、2或3，并所述配体通过带有CH2OCH2单元的1,5
‑
三唑环连接到双足连杆上；或
n为1、2或3，所述配体通过带有CH2OCH2单元的1,5
‑
三唑环与三足连杆相连。9.根据权利要求1或2所述的药物构造，其特征在于：所述靶向配体和所述肽对接载体之间的连接体包含聚乙二醇链(CH2CH2O)n或亚烷基链(CH2CH2)n链，其中n是2
‑
15中的整数。10.根据权利要求6所述的药物构造，其特征在于：所述Rs是将所述核酸与所述肽对接载体结合的生物正交反应部分，其中所述反应部分选自由包含以下组分的集合：胺、肼、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、叠氮基、炔烃、羧酸、硫醇、马来酰亚胺、膦二酯或选自以下的化学反应部分：11.根据权利要求2所述的药物构造，其特征在于：所述siRNA分子为包括两个互补的单链寡核苷酸的双链结构，每个寡核苷酸的长度为10
‑
29个碱基。12.根据权利要求11所述的药物构造，其特征在于：所述单链寡核苷酸的长度为19
‑
27个碱基。13.根据权利要求1或2所述的药物构造，其特征在于：所述核苷酸包括脱氧核糖核苷酸，或核糖核苷酸，或脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。14.根据权利要求1或2所述的药物构造，其特征在于：所述siRNA分子包括至少一个在2
’
位置上经过化学修饰的核苷酸。15.根据权利要求14所述的药物构造，其特征在于：所述化学修饰的核苷酸是从2
’‑
O
‑
甲基、2
’‑
氟、2
’‑
O
‑
甲氧乙基和2
’‑
O
‑
烯丙基组成的集合中选择的：
16.根据权利要求1或2所述的药物构造，其特征在于：所述siRNA分子包含一个或多个化学修饰的核苷酸，所述化学修饰方式从硫代磷酸二酯、硫代磷酸二酯和硝基磷酸二酯组成的集合中选择。17.根据权利要求1或2所述的药物构造，其特征在于：所述治疗性核酸包括靶向HBV S基因的siRNA中的一种或多种。18.根据权利要求17所述的药物构造，其特征在于：所述siRNA包含一条由CCUGCUGGUGGCUCCAGUUdTdT序列组成的正义链和一条由AACUGGAGCCACCAGCAGGdTdT序列组成的反义链、一条由CGCUUGGGACUCUCUCGUCdTdT序列组成的正义链和一条由GACGAGAGAGUCCCAAGCGdTdT序列组成的反义链、一条由GGUGGAGCCCUCAGGCUCAdTdT序列组成的正义链和一条由UGAGCCUGAGGGCUCCACCdTdT序列组成的反义链、一条由GUUGACAAGAAUCCUCAC...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕晓勇，陆阳，大卫，
申请(专利权)人：圣诺生物医药技术广州有限公司，
类型：发明
国别省市：