一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法技术

本发明专利技术适用于植株培育技术领域，提供了一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，包括以下步骤：步骤S1：外植体选择与预处理；步骤S2：胚性愈伤组织的诱导；步骤S3：体细胞胚胎分化及增殖培养；步骤S4：体细胞胚胎萌发培养。本发明专利技术使用植物材料少，不受季节限制，可以在较短时间内达到繁殖系数的最大化，不仅能够提高育苗效率，节约生产成本，而且操作简单易行，可重复性强，适宜于周年试验或生产；确保了苗木的移栽成活率，保证了苗木质量；实现了绿色生产，优化了栀子苗木生产流程，值得推广和应用。值得推广和应用。值得推广和应用。

【技术实现步骤摘要】
一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法


[0001]本专利技术属于植株培育
，尤其涉及一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法。

技术介绍

[0002]栀子属于茜草科栀子属常绿灌木，是卫生部颁布的第一批药食同源植物资源。栀子叶、花、果均可观赏，花和果亦可食用，果实的活性成分具有药用价值，是集绿化、蜜源、食用、药用及生态修复为一体的多功能树种。目前多为野生资源，人为破坏非常严重，导致栀子优良种质资源严重流失，制约了栀子产业的健康发展，因此寻求一种高效优质的资源繁育与保育途径来保护栀子优良种质资源、提升栀子苗木数量与质量势在必行。
[0003]目前栀子快繁多采用扦插快繁以及“以芽繁芽”的组培快繁模式，但扦插繁殖系数小、周期长、易变异，“以芽繁芽”的组培模式操作繁琐、成本高。体细胞胚胎发生作为组培快繁技术的一种，不仅能够实现优良资源数十倍甚至上百倍的快速繁殖，而且能够保持植株的优良遗传性状，充分弥补了以上繁殖方式的不足，是一种比较理想的繁殖方式。

技术实现思路

[0004]本专利技术实施例的目的在于提供一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，旨在解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，包括以下步骤：
[0007]步骤S1：外植体选择与预处理：将未成熟的果实用温水加洗洁剂浸泡，然后刷洗干净，再放于流水下冲洗备用，将洗干净的果实放于超净工作台，用无菌水洗涤，之后浸泡于75％的酒精溶液中30s，用无菌水冲洗，然后用0.1％的升汞浸泡10min，用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干果实表面的水分，
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0009]一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，包括以下步骤：
[0010]步骤S1：外植体选择与预处理：将未成熟的果实用温水加洗洁剂浸泡，然后刷洗干净，再放于流水下冲洗备用，将洗干净的果实放于超净工作台，用无菌水洗涤，之后浸泡于75％的酒精溶液中30s，用无菌水冲洗，然后用0.1％的升汞浸泡10min，用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干果实表面的水分，去除果皮备用；
[0011]步骤S2：胚性愈伤组织的诱导：在无菌条件下，将消毒处理过的未成熟果实切成薄片放入胚性愈伤组织诱导培养基中培养；所述胚性愈伤组织诱导培养基以改良MS为基本培养基，依次加入60g/L的香蕉泥、50～80g/L的椰乳、0.65％琼脂粉和3％的白砂糖，分别添加0.1～0.25mg/L的6
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BA和0.05～0.15mg/L的2,4
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D，培养基的pH值为5.8，置于灭菌锅中，取出后，在无菌条件下，利用过滤灭菌的方法加入1ml浓度为20mg/ml的茶皂素溶液，混合均匀后，分装到接种瓶中，接种处理好的栀子果实薄片；
[0012]步骤S3：体细胞胚胎分化及增殖培养：以改良MS为基本培养基，依次加入60g/L的香蕉泥、50～80g/L的椰乳、0.65％琼脂粉和3％的白砂糖，分别添加0.25～0.5mg/L的6
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BA、0.1～0.25mg/L的2,4
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D和6mg/L的核黄素VB2，培养基的PH值为5.8，置于灭菌锅中，将诱导出的胚性愈伤组织在无菌条件下接种到体细胞胚胎分化和增殖培养基上；
[0013]步骤S4：体细胞胚胎萌发培养：以改良MS为基本培养基，依次加入60g/L的马铃薯汁、0.65％琼脂粉和1.5％的白砂糖，添加垂柳浸提液20ml/L和3mg/L的VB2，培养基的PH值为5.8，置于灭菌锅中，将诱导分化出的体细胞胚在无菌条件下转入此培养基中。
[0014]进一步的，所述改良MS培养基为：基础MS培养基+0.16～0.18g/L硝酸钙+0.01～0.03g/L硫酸钠。
[0015]进一步的，所述灭菌锅的灭菌温度为121℃，灭菌时间为15min。
[0016]进一步的，所述步骤S2中，将消毒处理过的未成熟果实切成薄片放入胚性愈伤组织诱导培养基中培养，培养条件为弱蓝光，光照强度为1500LX，培养温度为20～26℃。
[0017]进一步的，所述步骤S2中，茶皂素溶液的制备方法为：称取茶皂素5g，用乙醇溶解并用无菌水定容至250ml的容量瓶中待用。
[0018]进一步的，所述步骤S4中，将诱导分化出的体细胞胚在无菌条件下转入培养基中，暗培养15d，后转入LED光照培养，培养温度为20～26℃，光照12h/d，光照强度为2000LX。
[0019]进一步的，所述步骤S4中，垂柳浸提液的制备方法为：取垂柳1年生新鲜枝条，用粉碎机粉碎，取500g垂柳枝粉浸泡于500ml蒸馏水中，浸泡1天，再利用功率为100W的超声波超声浸提2h，之后离心取上清液，备用。
[0020]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0021](1)使用植物材料少，不受季节限制，生产周期短，可以在较短时间内达到繁殖系数的最大化，不仅能够提高育苗效率，节约生产成本，而且操作简单易行，可重复性强，适宜于周年试验或生产；
[0022](2)本专利技术提供的快繁体系是通过体细胞胚胎发生的途径构建的，无菌苗的生根都没有经过愈伤组织培养阶段，苗木根系粗壮、不会脱落且呈辐射状分布，确保了苗木的移栽成活率，保证了苗木质量；
[0023](3)本专利技术所使用的植物外源激素及抑菌剂多采用植物提取液且所需植物资源分布广、易获取，不仅实现了绿色生产，同时也降低了生产成本，优化了栀子苗木生产流程，利于该技术的进一步推广应用。
附图说明
[0024]图1为本专利技术体细胞胚胎萌发成苗率的示意图。
具体实施方式
[0025]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0026]以下结合具体实施例对本专利技术的具体实现进行详细描述。
[0027]本专利技术一个实施例提供的一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，包括以下步
骤：
[0028]步骤S1：外植体选择与预处理：将未成熟的果实用温水加洗洁剂浸泡，然后刷洗干净，再放于流水下冲洗备用，将洗干净的果实放于超净工作台，用无菌水洗涤，之后浸泡于75％的酒精溶液中30s，用无菌水冲洗，然后用0.1％的升汞浸泡10min，用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干果实表面的水分，去除果皮备用；
[0029]步骤S2：胚性愈伤组织的诱导：在无菌条件下，将消毒处理过的未成熟果实切成薄片放入胚性愈伤组织诱导培养基中培养；所述胚性愈伤组织诱导培养基以改良MS为基本培养基，依次加入60g/L的香蕉泥、50～80g/L的椰乳、0.65％琼脂粉和3％的白砂糖，分别添加0.1～0.25mg/L的6
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BA和0.05～0.15mg/L的2,4
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D，培养基的pH本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1：外植体选择与预处理：将未成熟的果实用温水加洗洁剂浸泡，然后刷洗干净，再放于流水下冲洗备用，将洗干净的果实放于超净工作台，用无菌水洗涤，之后浸泡于75％的酒精溶液中30s，用无菌水冲洗，然后用0.1％的升汞浸泡10min，用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干果实表面的水分，去除果皮备用；步骤S2：胚性愈伤组织的诱导：在无菌条件下，将消毒处理过的未成熟果实切成薄片放入胚性愈伤组织诱导培养基中培养；所述胚性愈伤组织诱导培养基以改良MS为基本培养基，依次加入60g/L的香蕉泥、50～80g/L的椰乳、0.65％琼脂粉和3％的白砂糖，分别添加0.1～0.25mg/L的6
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BA和0.05～0.15mg/L的2,4
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D，培养基的pH值为5.8，置于灭菌锅中，取出后，在无菌条件下，利用过滤灭菌的方法加入1ml浓度为20mg/ml的茶皂素溶液，混合均匀后，分装到接种瓶中，接种处理好的栀子果实薄片；步骤S3：体细胞胚胎分化及增殖培养：以改良MS为基本培养基，依次加入60g/L的香蕉泥、50～80g/L的椰乳、0.65％琼脂粉和3％的白砂糖，分别添加0.25～0.5mg/L的6
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BA、0.1～0.25mg/L的2,4
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D和6mg/L的核黄素VB2，培养基的PH值为5.8，置于灭菌锅中，将诱导出的胚性愈伤组织在无菌条件下接种到体细胞胚胎分化和增殖培养基上；步骤S4：体细胞胚胎萌发培养：以改良MS为基本培养基，依次加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨艳，李昌珠，陈景震，李培旺，李党训，吉悦娜，唐洁，曾霞，张翼，李力，
申请(专利权)人：湖南省林业科学院，
类型：发明
国别省市：