【技术实现步骤摘要】
一种能特异性结合艰难拟梭菌毒素TcdB的DNA适配体及制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及分子微生物学和感染免疫学
，具体涉及一种能特异性结合艰难拟梭菌毒素TcdB的DNA适配体及制备方法和应用，该适配体能特异性、高亲和力地结合艰难拟梭菌毒素B（TcdB），可用于治疗艰难拟梭菌感染。
技术介绍
[0002]艰难拟梭菌（Clostridioides diffcile，CD）是导致感染性腹泻入院的最主要病原菌，可引起不同程度的腹泻、发热、便血乃至肠穿孔及腹腔感染，甚至导致患者死亡。CD毒性高，对大多数抗生素具有高抗性且多重耐药株增多、感染愈后复发率高，是一种非常难治的感染病，其发病率、死亡率的持续上升给大众健康带来严重威胁，亟需探索新的治疗方法。
[0003]CD引起发病的主要效应物是其分泌的多种毒素，其中毒素B（TcdB）在致病过程中最为关键，单独的TcdB即可在动物模型中诱导死亡。TcdB通过受体介导进入宿主细胞内部，破坏细胞肌动蛋白骨架从而引发细胞凋亡、变性、固缩，纤维素、黏蛋白渗出形成假膜性炎症，引起...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种能特异性结合艰难拟梭菌毒素TcdB的DNA适配体的制备方法，其步骤包括：S01.构建一个单链寡核苷酸文库，扩增并回收该单链寡核苷酸文库；S02.用该单链寡核苷酸文库与第一靶物质混合，形成第一靶物质—核苷酸的复合物，洗掉未与第一靶物质结合的核苷酸，分离与第一靶物质结合的核苷酸，以此核苷酸分子为模板进行PCR扩增，再进行下轮的循环筛选过程，下一轮筛选过程中添加的第一靶物质较上一轮的添加量递减，通过重复的筛选与扩增，所述第一靶物质为TcdB毒素的FBD蛋白，TcdB毒素的FBD蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.3所示的氨基酸序列中第1285
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1804位的氨基酸；S03.当筛选循环中已富集寡核苷酸库的亲和力不再增加时，用该单链寡核苷酸文库与第二靶物质混合，形成第二靶物质—核苷酸的复合物，洗掉与第二靶物质结合的核苷酸，分离与第二靶物质不结合的核苷酸，以此核苷酸分子为模板进行PCR扩增，再进行下轮的循环筛选过程，所述第二靶物质为TcdB毒素的CROPs蛋白，TcdB毒素的CROPs蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.3所示的氨基酸序列中第1834
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2366位的氨基酸；S04.重复步骤S02将已富集的寡核苷酸库与第一靶物质混合，筛选分离出与第一靶物质结合的核苷酸，直至亲和力不再增加，得到候选DNA适配体；S05.使用ELONA法检测候选DNA适配体与TcdB毒素、TcdB毒素的FBD蛋白、...
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