一种人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其检测方法，其中，试剂盒包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液、碱性磷酸酶标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147单克隆抗体、生物素标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147单克隆抗体，所述试剂盒将待测样本的抗原与生物素标记的CD147单抗、碱性磷酸酶标记的CD147单抗耦连形成复合物，向复合物加入酶促化学发光底物后，形成发光反应检测发光强度，以检测待测样本中的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子浓度。本发明专利技术的试剂盒避免了酶联免疫试剂盒存在的线性范围窄、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低、稳定性差、成本高等缺陷。成本高等缺陷。成本高等缺陷。

【技术实现步骤摘要】
一种人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术涉及一种人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测试剂 盒及其检测方法，属于免疫检测分析领域，尤其是化学发光检测领域。

技术介绍

[0002]冠状病毒的感染性主要决定于S蛋白，S蛋白可与宿主细胞膜上的膜受体结合。从而 介导病毒和细胞膜融合。SARS
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CoV
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2感染的第一个关键蛋白
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ACE2。除了ACE2外，近期 陈志南院士研究团队通过表面等离子体共振分析，并同时辅以竞争性抑制实验发现CD147 可作为除ACE2之外，SARS
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CoV
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2入侵宿主细胞另一条新的潜在途径，并进一步证实S 蛋白与CD147结合后，病毒对宿主细胞对侵袭能力增强。以上可以说明，SARS
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CoV
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2的 S蛋白通过与宿主细胞上的CD147结合，介导病毒对入侵。
[0003]CD147，又名Basigin或EMMPRIN，是一种跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族。CD147 在多种肿瘤细胞和组织中高表达，通过诱导基质金属蛋白酶的分泌促进肿瘤浸润及转移。 有研究表明，CD147还与疟原虫的侵袭和病毒的感染有关。
[0004]CD147对促进SARS
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2对宿主细胞的侵袭发挥了重要的作用，而目前对控制 SARS
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CoV/>‑
2的传播和治疗尚无有效办法，各国都在寻找治疗剂并开发疫苗。针对CD147 这一新途径的发现，为抗病毒药物的开发开启了新思路。ACE2作为SARS
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2感染的第 一个关键蛋白，但由于其广泛分布于各种组织，如：心脏、肺、肾、睾丸等，并在控制血 压，肺损伤，预防心力衰竭和肾损伤等方面有重要作用。但，如果以ACE2作为治疗靶点， 可能会引起严重的副作用。因此，以CD147为治疗靶点的研究可能更具前景，关于CD147 的检测试剂盒也亟待开发。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术的目的是以化学发光免疫定量检测技术为基础， 获得一种细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)的化学发光免疫定量检测试剂盒及其检 测方法。
[0006]为实现上述专利技术目的之一，本专利技术采用的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的化学发光 免疫定量检测试剂盒的技术方案如下：
[0007]所述试剂盒包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液、碱性磷酸酶标记的人细胞外基质金 属蛋白酶诱导因子CD147单克隆抗体、生物素标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子 CD147单克隆抗体，所述试剂盒将待测样本的抗原与生物素标记的CD147单抗、碱性磷酸酶 标记的CD147单抗耦连形成复合物，向复合物加入酶促化学发光底物后，形成发光反应检 测发光强度，以检测待测样本中的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子浓度。
[0008]优选的，所述试剂盒还包括人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147校准品，校准品 也与生物素标记的CD147单抗、碱性磷酸酶标记的CD147单抗耦连形成复合物，发光检测
待 测样本中的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子浓度。
[0009]优选的，链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为超顺磁性纳米微粒，粒径为10～20nm，粒 径小于30nm的超顺磁性纳米颗粒具有大的磁矩常量，可忽略剩磁和矫顽力，能够对应用的 磁场做出快速的响应。
[0010]优选的，所述CD147抗体是His标记的重组蛋白，蛋白序列如如序列表SEQ ID NO.1所 示。重组蛋白经大肠杆菌表达，46.3kD。
[0011]优选的，碱性磷酸酶标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147单克隆抗体为母 液稀释液，稀释比例为1:300～500。其中碱性磷酸酶标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因 子CD147单克隆抗体母液的检测方法为：将200ug碱性磷酸酶加入1mL10mM碳酸钠缓冲液 中，加入20ug人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子单克隆抗体，37℃反应2小时后，用ProteinG 亲和柱纯化酶标抗体，得到酶标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子单克隆抗体。
[0012]优选的，生物素标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147单克隆抗体为母液稀 释液，稀释比例为1:700～1000。其中生物素标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147 单克隆抗体为母液的检测方法为：将20ug人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子单克隆抗体加 入1mL10mM碳酸钠缓冲液中，加入20ug生物素衍生物，37℃反应2小时后，用ProteinG亲 和柱纯化生物素标记抗体，得到生物素标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子单克隆抗 体。
[0013]上述1mL10mM碳酸钠缓冲液pH为8.0。
[0014]所述将链霉亲和素包被的磁微粒母液用酶标磁微粒缓冲液稀释浓度为0.6mg/mL。
[0015]所述校准品用校准品缓冲液将人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)抗原稀释至 工作浓度，分别为0，0.50，1.00，2.50，5.00，10.00ng/mL。
[0016]本专利技术还提供了一种人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测 试剂盒的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
[0017]a)加样孵育：取校准品或待测样本至反应管中，依次加入等体积的碱性磷酸酶标记的 人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子单克隆抗体和生物素标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱 导因子单克隆抗体，37℃孵育反应10分钟；然后加入链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液；
[0018]b)磁分离清洗：孵育反应完成后的反应管放在磁分离架上静置1分钟，去上清后加入 磁珠包被物缓冲液，缓冲液加入量大于反应管内液体总量，放在磁分离架上静置1分钟，去 上清后再次加入磁珠包被物缓冲液冲洗，反复冲洗至少三次；
[0019]c)发光：向冲洗后的液体沉淀部分中加入发光底物液，37℃避光孵育5分钟后，测量 发光值。
[0020]具体的，所述检测方法包括具体为：
[0021]1)加样和孵育：加入人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)校准品或新鲜病人样 本至反应管中，加入碱性磷酸酶标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147) 抗体和生物素标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)抗体，37℃孵育反 应8～15分钟，加入链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，37℃孵育反应10分钟；
[0022]2)磁分离清洗：将孵育反应完成后的反应管放在磁分离架上静置1分钟，除去上清
液； 第一次加入磁珠包被物缓冲液300uL，放在磁分离架上静置1分钟，除去上清液； 第二次加入磁珠包被物缓冲液300uL，放在磁分离架上静置1分钟，除去上清液； 第三次加入磁珠包被物缓冲液300uL，放在磁分离架上静置1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液、碱性磷酸酶标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147单克隆抗体、生物素标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147单克隆抗体，所述试剂盒将待测样本的抗原与生物素标记的CD147单抗、碱性磷酸酶标记的CD147单抗耦连形成复合物，向复合物加入酶促化学发光底物后，形成发光反应检测发光强度，以检测待测样本中的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子浓度。2.根据权利要求1所述的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为超顺磁性纳米微粒，粒径为10～20nm。3.根据权利要求1所述的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述CD147抗体是His标记的重组蛋白，蛋白序列如如序列表SEQ ID NO.1所示。4.根据权利要求1所述的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147校准品。5.根据权利要求1所述的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，碱性磷酸酶标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147单克隆抗体为母液稀释液，稀释比例为1:300～500。6.根据权利要求5所述的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，碱性磷酸酶标记的人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147单克隆抗体母液的检测方法为：将200ug碱性磷酸酶加入1mL10mM碳酸钠缓冲液中，加入20ug人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子单克隆抗体，37℃反应2小时后，用ProteinG亲和柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：印明柱，陈翔，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：