一种以施氏假单胞菌为载体的原位修复污染土壤的复合功能菌剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种以施氏假单胞菌为载体的原位修复污染土壤的复合功能菌剂及其应用，该复合功能菌剂包括施氏假单胞菌VTCQ

【技术实现步骤摘要】
一种以施氏假单胞菌为载体的原位修复污染土壤的复合功能菌剂及其应用


[0001]本专利技术涉及石油烃污染土壤的生物修复领域，具体而言，涉及一种以施 氏假单胞菌为载体的原位修复污染土壤的复合功能菌剂及其应用。

技术介绍

[0002]目前在烃污染土壤原位修复领域方法比较多，如物理、化学、微生物法 等，其中微生物原位修复烃污染土壤是最为环保、经济、无二次污染且可持 续性和环境友好性比较可靠的处理方式，该方法引起世界各环保领域的广 泛关注和深入研究。
[0003]微生物修复方法的关键是高效烃降解菌的筛选和菌群在土壤环境维持 活性、菌剂体密度和菌体在土壤环境中的扩散繁殖，以及烃类污染物的捕捉 和聚集。为达到以上需求，一般会增大菌剂投入量、提高营养成分注入、并 加入絮凝剂或表面活性剂等方法来辅助提高烃处理效率。提高菌剂投入量 会增加成本，加入的絮凝剂和表面活性剂等化学成分尤其是不能被降解的 部分或造成二次环境污染。另外，复合菌剂载体一般使用碳酸钙、硅藻土、 硅酸钠、麦芽糊精、蔗糖、葡萄糖、蛋白胨等其中的一种或者多种按比例混 合使用，但这些载体具有定量的特点，一旦菌剂溶解或者微生物进入土壤环 境被完全释放，微生物不再有载体辅助扩散，由于载体添加量有限，不能长 时间大范围辅助微生物完成烃类聚集降解的作用。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种以施氏假单胞菌为载体的原位修复污染土 壤的复合功能菌剂及其应用，以改善上述复合菌剂载体不能长时间大范围 辅助微生完成烃类聚集降解的问题，进而提高土壤中石油烃的降解效率。
[0006]本专利技术是这样实现的：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种复合功能菌剂，其包括施氏假单胞菌 VTCQ
‑
1与铜绿假单胞菌VTS
‑
1；
[0008]施氏假单胞菌VTCQ
‑
1的保藏编号为CGMCC 24469；
[0009]铜绿假单胞菌VTS
‑
1的保藏编号为CGMCC 2200；
[0010]施氏假单胞菌VTCQ
‑
1作为铜绿假单胞菌VTS
‑
1的载体。
[0011]第二方面，本专利技术提供了一种复合功能菌剂的制备方法，其包括对施氏 假单胞菌VTCQ
‑
1与铜绿假单胞菌VTS
‑
1进行连续混合培养。
[0012]第三方面，本专利技术提供了一种原位修复污染土壤的方法，其包括采用上 述复合功能菌剂对待修复土壤进行修复。
[0013]相比于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：
[0014]本专利技术提供了一种以施氏假单胞菌为载体的原位修复污染土壤的复合 功能菌
剂，该菌剂利用施氏假单胞菌VTCQ
‑
1菌落比表面积较大、可以为 其它细菌提供较大且稳固的附着场所的特点，将其与铜绿假单胞菌VTS
‑
1 混合培养，使施氏假单胞菌VTCQ
‑
1菌落能够包裹铜绿假单胞菌VTS
‑
1， 在喷雾干燥法制菌剂过程中，提高VTS
‑
1成活率。本专利技术中施氏假单胞菌 VTCQ
‑
1从土壤环境筛选驯化而来，对环境适应性较好，在地下深层土壤环 境快速繁殖，在土壤环境扩散范围较大，为同时增殖的其它复合功能菌剂提 供更多的附着位点，容易形成范围较大、数量比较多的菌胶团；同时施氏假 单胞菌VTCQ
‑
1还可以吸附在烃污染土壤表面固定功能菌，吸附土壤颗粒 表面的烃，起到为土壤中其它降解效能较高的复合功能菌剂聚集烃类物质 的作用，可以把它比喻成土壤修复功能菌剂降解土壤中烃的流动餐厅，可以 无限扩大经营范围的流动餐厅。本专利技术提供的复合功能菌剂能够提高土壤 中烃的降解效率，大大缩短烃污染土壤处理周期，维持土壤微生物多样性和 持久性。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需 要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实 施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在 不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。 图1为本专利技术实施例1发酵液中鼠李糖脂表面活性剂成分的检测结果。
具体实施方式
[0016]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术 实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者， 按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商 者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0017]本专利技术的一些实施方式提供了一种复合功能菌剂，其包括施氏假单胞 菌VTCQ
‑
1(Pseudomonas stutzeri)与铜绿假单胞菌VTS
‑
1(Pseudomonasaeruginosa)，施氏假单胞菌VTCQ
‑
1的保藏编号为CGMCC24469；铜绿假 单胞菌VTS
‑
1的保藏编号为CGMCC2200；施氏假单胞菌VTCQ
‑
1作为铜 绿假单胞菌VTS
‑
1的载体。
[0018]上述施氏假单胞菌VTCQ
‑
1的保藏信息如下：保藏编号为 CGMCC24469；分类命名为施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri；保藏单位 为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为北京市朝 阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏时间为2022年03 月07日。
[0019]上述铜绿假单胞菌VTS
‑
1已于专利文件CN101177696B中公开，为现 有已保藏菌株。
[0020]上述施氏假单胞菌VTCQ
‑
1是从某加油站深层污染土壤的水层经多次 反复驯化分离得到，施氏假单胞菌VTCQ
‑
1形态特征如下：菌落圆形，边 缘不整齐，表面皱褶状比表面积较大，白色蜡质状，菌落易贴附于普通LB 固体培养基表面或者其它固形物表面，菌落易成片剥离；在显微镜油镜下 观察菌体形态为菌体呈长0.7
‑
3.6μm，宽0.35
‑
42μm的短杆状；革兰氏阴性 菌。对筛选分离后得到的纯种菌株进行了16sRNA测序，该菌株的16sRNA 基因序列见序列表SEQ ID No.1所示：
[0021]AGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGG ATGAGTGGAGCTTGCTCCATGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATG CCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGC TAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCGGGGGACCTTCGGACCT 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合功能菌剂，其特征在于，其包括施氏假单胞菌VTCQ
‑
1与铜绿假单胞菌VTS
‑
1；所述施氏假单胞菌VTCQ
‑
1的保藏编号为CGMCC 24469；所述铜绿假单胞菌VTS
‑
1的保藏编号为CGMCC2200；所述施氏假单胞菌VTCQ
‑
1作为所述铜绿假单胞菌VTS
‑
1的载体。2.根据权利要求1所述的复合功能菌剂，其特征在于，所述复合菌剂中所述铜绿假单胞菌VTS
‑
1菌体密度为8.0
×
10
11
‑
9.45
×
10
11
个/g。3.一种复合功能菌剂的制备方法，其特征在于，其包括对权利要求1所述的施氏假单胞菌VTCQ
‑
1与铜绿假单胞菌VTS
‑
1进行连续混合培养。4.根据权利要求3所述的复合功能菌剂的制备方法，其特征在于，所述连续混合培养的培养基包括：葡萄糖30
‑
50g/L，硝酸钠12
‑
17g/L，磷酸二氢钾6
‑
7g/L，磷酸氢二钠4
‑
5g/L，蛋白胨1.5
‑
2.5g/L；优选地，所述培养基pH为7.0
‑
7.2；优选地，所述培养基中添加有15
‑
20ml/L生物柴油。5.根据权利要求4所述的复合功能菌剂的制备方法，其特征在于，通过所述连续混合培养获得混合菌液，所述连续混合培养包括两个阶段，第一阶段为先接入铜绿假单胞菌进行培养，第二阶段为在第...

【专利技术属性】
技术研发人员：寇焕起，金艳方，寇秋莉，
申请(专利权)人：北京沃太斯环保科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：