一种桑黄三萜类化合物的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种桑黄三萜类化合物的提取方法，包括以下步骤：桑黄粉的制备，低温冻干粉碎、浸提、高压脉冲交变电场中酶解、一次旋转蒸发、萃取、二次旋转蒸发，最终得到高纯度的桑黄三萜类化合物。本发明专利技术通过两次乙醇超声提取，最大程度地将桑黄三萜类化合物提取出来，随后通过将高压脉冲电场处理和酶解法联合提取以及二次旋转蒸发，得到高纯度桑黄三萜类化合物。本发明专利技术提供的方法提取率高，提取时间短，操作方便，获得的桑黄三萜类化合物纯度高，具有极大的药用价值。有极大的药用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种桑黄三萜类化合物的提取方法


[0001]本专利技术属于活性物质提取
，具体涉及一种桑黄三萜类化合物的提取方法。

技术介绍

[0002]桑黄(Pellinus igniarius)属于担子菌亚门(Bas.Idiomycotina)层菌纲(Hymenomycetes)的药用真菌，有“森林黄金”的美誉，在文献中作“桑黄”使用的学名就已经出现7个，中文名更是多达42个，其味甘辛，无毒，用来治疗血崩、血淋、脱肛泻血，带下，经闭。现代研究表明，“桑黄”具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、降血糖、抗胃溃疡、抗菌和等多种药理活性。尤其是在肿瘤的预防和治疗方面具有广阔的前景，已成为各国学者研究的热点，很有希望开发成一种新的抗肿瘤药物。三萜类化合物涵盖了不少于百余种的化合物成分，桑黄三萜是桑黄的主要成分之一，其具有许多功能，如抗病毒，增强免疫力和抗肝纤维化。
[0003]目前已有的研究中，三萜类化合物有超临界CO2提取法、超声波辅助法、微波法和回流浸提法等多种提取方法，但是在桑黄三萜类化合物提取过程中，在对获得桑黄三萜类化合物进行分离吸附剂或者乙醇等提取原料时，使得三萜类化合物被提取原料携带分离，进而易造成三萜类化合物的损耗，降低三萜类化合物的提取量，且在制备前没有对桑黄原料进行筛选，从而后期制备三萜类化合物的纯度得不到保证，使得桑黄三萜类化合物的品质降低，降低了其药用价值。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种桑黄三萜类化合物的提取方法，该方法提取的提取率高，提取时间短，操作方便，获得的桑黄三萜类化合物纯度高，具有极大的药用价值。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]一种桑黄三萜类化合物的提取方法，包括以下步骤：
[0007](1)低温冻干粉碎：将洗净后的桑黄菌丝体在低温下粉碎，过筛后得到桑黄粉；
[0008](2)浸提：接着将步骤(1)中得到的桑黄粉加入低共熔溶剂水溶液中，进行超声波提取，提取完成后离心，取上清液，得到浸提液和提取残渣；
[0009](3)高压脉冲交变电场中酶解：将步骤(2)得到的提取残渣加入去离子水中，随后加入复合酶，通过高压脉冲交变电场处理，过滤后得到酶解滤液和滤渣；
[0010](4)一次旋转蒸发：将步骤(2)得到的第一浸提液、步骤(3)得到的酶解滤液混合，过滤后进行旋转蒸发，蒸发至质量不再减少的膏状物质，即得桑黄粗三萜；
[0011](5)萃取：将步骤(4)中得到的桑黄粗三萜加入旋蒸瓶中，随后加入去离子水和正丁醇，之后和分液漏斗进行萃取，留下第一有机相；将剩下的水相再次加入分液漏斗中，加入正丁醇，进行二次萃取，得到第二有机相；
[0012](6)二次旋转蒸发：将步骤(5)中的第一有机相和第二有机相混合后进行旋转蒸
发，蒸发至质量不再减少的膏状物质，干燥后得到桑黄三萜类化合物。
[0013]优选的，所述步骤(1)的粉碎温度为
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65～
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45℃，过筛目数为40～80目。
[0014]优选的，步骤(2)中所述低共熔溶剂水溶液中低共熔溶剂由L
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脯氨酸与乳酸以物质的量之比1：1混合后在80℃加热1h制得；所述低共熔溶剂水溶液中低共熔溶剂体积浓度为75％；所述桑黄粉与低共熔溶剂水溶液的料液比为1g：25
‑
30mL。
[0015]优选的，步骤(2)中超声波提取温度为20～30℃，超声波提取时间为15～30min，离心速率为4000～5000r/min，离心时间为15～30min。
[0016]优选的，步骤(3)中所述复合酶为果胶酶、纤维素酶和木瓜蛋白酶混合制得，三种酶的质量比为1：1：1；所述提取残渣与复合酶的质量比为10：1。
[0017]优选的，步骤(3)中所述高压脉冲交变电场处理室内电场强度为20～30kv/cm，脉冲数为12
‑
14个，提取残渣液通过泵进入高压脉冲电场提取装置中进行提取。
[0018]优选的，步骤(3)中所述高压脉冲交变电场处理是指正弦波的交流电通过固态继电器的瞬间关断和使连续的交流电流变为脉冲电流，其占空比通过PLC进行控制。
[0019]优选的，步骤(4)中，旋转蒸发温度为55～65℃，旋转速度为80～120r/min。
[0020]优选的，步骤(5)中，所述正丁醇与去离子水的体积比为1：1，粗桑黄三萜与正丁醇和去离子混合液的料液比为1g：25～30mL。
[0021]优选的，步骤(6)中旋转蒸发温度为70～80℃，旋转速度为60～80r/min。
[0022]优选的，其特征在于，步骤(6)中干燥温度为60～80℃，干燥时间为2～4h。
[0023]与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：
[0024](1)本专利技术首先通过对桑黄菌丝体进行低温冻干粉碎，在低温状态下，可以使细胞壁内的细胞液处于冷冻状态，粉碎时不会残留在机器内壁；同时低温状态下的桑黄菌丝脆性大，更易于粉碎，有效提高粉碎效率；粉碎后的桑黄粉还处理较低温度，将其立即放入常温下的低共熔溶剂水溶液，在热胀冷缩和渗透的作用下，破坏桑黄菌丝体的细胞壁，更快的提取出三萜类化合物。
[0025](2)本专利技术通过将高压脉冲电场处理和酶解法联合提取，由于高频电流直接作用于生物分子，激发了分子活性，使有效成分快速溶出。正负交变的高频电流通过被溶剂浸透的原料时，使原料组织结构产生松散，形成有效成分溶出通道。当电流通过溶液中的原料颗粒时，由于电阻的存在，将使原料中完整细胞瞬时受热膨胀而破坏，内部物质被溶剂溶解。同时，由于电流的作用，使得酶解速度加快，进一步提高了三萜类化合物的溶出，形成了快速、连续、常温、高效的强化提取效果。
[0026](3)本专利技术通过两次萃取及两次旋转蒸发，对桑黄粗三萜进行纯化，使得到的桑黄三萜类化合物纯度高，具有极大的药用价值。
具体实施方式
[0027]下面将结合实施例中对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]实施例1
[0029]一种桑黄三萜类化合物的提取方法，包括以下步骤：
[0030](1)低温冻干粉碎：将洗净后的桑黄菌丝体在
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65℃下粉碎，过40目筛后得到桑黄粉；
[0031](2)浸提：接着将步骤(1)中得到的桑黄粉(10g)加入低共熔溶剂水溶液(250mL)中，在25℃下超声波提取15min，提取完成后在4500r/min的转速下离心15min，得到浸提液和提取残渣；所述低共熔溶剂水溶液中低共熔溶剂由L
‑
脯氨酸与乳酸以物质的量之比1：1混合后在80℃加热1h制得；所述低共熔溶剂水溶液中低共熔溶剂体积浓度为75％；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种桑黄三萜类化合物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)低温冻干粉碎：将洗净后的桑黄菌丝体在低温下粉碎，过筛后得到桑黄粉；(2)浸提：接着将步骤(1)中得到的桑黄粉加入低共熔溶剂水溶液中，进行超声波提取，提取完成后离心，取上清液，得到浸提液和提取残渣；(3)高压脉冲交变电场中酶解：将步骤(2)得到的提取残渣加入去离子水中，随后加入复合酶，通过高压脉冲交变电场处理，过滤后得到酶解滤液和滤渣；(4)一次旋转蒸发：将步骤(2)得到的第一浸提液、步骤(3)得到的酶解滤液混合，过滤后进行旋转蒸发，蒸发至质量不再减少的膏状物质，即得桑黄粗三萜；(5)萃取：将步骤(4)中得到的桑黄粗三萜加入旋蒸瓶中，随后加入去离子水和正丁醇，之后和分液漏斗进行萃取，留下第一有机相；将剩下的水相再次加入分液漏斗中，加入正丁醇，进行二次萃取，得到第二有机相；(6)二次旋转蒸发：将步骤(5)中的第一有机相和第二有机相混合后进行旋转蒸发，蒸发至质量不再减少的膏状物质，干燥后得到桑黄三萜类化合物。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)的粉碎温度为
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65～
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45℃，过筛目数为40～80目。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述低共熔溶剂水溶液中低共熔溶剂由L
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脯氨酸与乳酸以物质的量之比1：1混合后在80℃加热1h制得；所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：许谦，王文，田给林，郭燕风，毕玉根，许向阳，丁红振，贾世杰，李秉恩，
申请(专利权)人：菏泽学院，
类型：发明
国别省市：