一种基于固相糖蛋白T抗原糖肽富集和酶切分析的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于固相糖蛋白T抗原糖肽富集和酶切分析的方法，包括步骤：从样本中提取蛋白；蛋白酶解获得多肽；半乳糖和N

【技术实现步骤摘要】
一种基于固相糖蛋白T抗原糖肽富集和酶切分析的方法


[0001]本专利技术属于生物分子分析试剂
，具体涉及固相糖蛋白T抗原糖肽富集和酶切分析(SPTAgE)的方法。

技术介绍

[0002]T抗原是半乳糖通过β(1
‑
3)连接与乙酰半乳糖胺结合形成的二糖结构，属于常见O
‑
聚糖中的核心1结构。人体90％的癌症类型中都能检测到T抗原的表达。在正常细胞中T抗原是隐藏起来的，但在乳腺癌、结肠癌、前列腺癌和膀胱癌中会选择性暴露在癌细胞表面。T抗原是一种截短的O
‑
聚糖，体积小结构简单。它在人体中具有非生理性聚糖结构，因此它可被免疫系统识别为外来物。大多数癌症患者的T抗原测试可以在任何活检发现癌症之前被检测到。由于T抗原是血液和皮肤细胞表面的蛋白质，可以被免疫系统抗体识别，因此可以作为诊断或预后的疾病生物标志物。然而很少有方法可用于详细鉴定癌症中完整蛋白质被T抗原修饰，尤其是在早期阶段；同时与T抗原结构类似的核心8结构会干扰对T抗原修饰位点信息的获取。
[0003]因此，有必要研发一种基于固本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于固相糖蛋白T抗原糖肽富集和酶切分析的方法，其特征在于，包括步骤：(1)从样本中提取蛋白；(2)蛋白酶解获得多肽；(3)半乳糖和N
‑
乙酰半乳糖氧化；(4)酰肼树脂固定与PNGase F酶切；(5)半乳糖苷酶处理与质谱分析。2.根据权利要求1所述的一种基于固相糖蛋白T抗原糖肽富集和酶切分析的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述样本包括：组织样本或体液样本。3.根据权利要求1所述的一种基于固相糖蛋白T抗原糖肽富集和酶切分析的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述蛋白酶解获得多肽包括：
①
向蛋白溶液中加入二硫苏糖醇，在温度为37℃的条件下反应1
‑
1.5小时；
②
再加入碘乙酰胺，室温暗室反应0.5
‑
1小时，获得样本；
③
将所述样本稀释，加入碳酸氢铵，直至所述碳酸氢铵的终浓度为90
‑
110mM，所述样本的pH值介于7
‑
9之间；
④
加入测序级胰蛋白酶，轻微振荡，在温度为37℃的条件下水解16
‑
18小时，得到多肽溶液；
⑤
在所述多肽溶液中加入甲酸，直至pH值下调至2
‑
3；
⑥
将C18萃取柱预处理，向所述C18萃取柱中加入所述多肽溶液，将过滤液再次加入所述C18萃取柱，用0.1％TFA清洗所述C18萃取柱多次，最后，用含有0.1％TFA的50
‑
60％乙腈洗脱出多肽，并且重复多次；
⑦
将洗脱出的多肽合并，真空冷冻干燥得到纯化的多肽。4.根据权利要求3所述的一种基于固相糖蛋白T抗原糖肽富集和酶切分析的方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述半乳糖和N
‑
乙酰半乳糖氧化包括：向所述纯化的多肽中加入二甲基亚砜、磷酸钠缓冲液、辣根过氧化物酶以及半乳糖氧化酶，然后在温度为35℃的条件下反应0.9
‑
1.1小时，获得糖肽。...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨霜，徐明明，岳爽，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：