一种同时测定利多卡因和丙胺卡因的生物样品分析方法技术

本发明专利技术提供了一种同时测定利多卡因和丙胺卡因的生物样品分析方法，通过高效、快速、灵敏的液相

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定利多卡因和丙胺卡因的生物样品分析方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种同时测定利多卡因和丙胺卡因的生物样品分析方法。

技术介绍

[0002]皮肤性病科领域里有许多儿童患者，他们有时需要取活检标本，对传染性软疣需要进行治疗；成人性传播疾病(STD)需要对生殖器部位的尖锐湿疣进行治疗；在美容皮肤科无论作电烧术、刮除术、液氮冷冻，还是作化学剥皮术等治疗均需要在无痛的情况下进行操作。局部麻醉用注射器注射局麻药仍非常疼痛，患者不易接受。因此美国Astra公司研制、生产的恩纳霜(EmLAcream)和恩纳贴片(EmLAdisc)可以外用作表面麻醉剂。问世30年来，在欧美各国已广泛应用，解决了患者疼痛的问题，特别是在儿童皮肤科中具有极大的临床意义。
[0003]利丙双卡因乳膏在闭合的敷料下应用于完整皮肤，通过从乳膏中释放利多卡因和丙胺卡因进入表皮和真皮层，并在临近真皮疼痛受体及神经末梢处蓄积利多卡因和丙胺卡因，而发挥皮肤镇痛作用。利多卡因和丙胺卡因均为酰胺类局部麻醉药，它们通过抑制触发和传导神经冲动所需的离子通量而稳定神经膜，进而产生局部麻醉作用。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对利多卡因和丙胺卡因在生物样品中浓度的检测方法存在操作复杂、分析周期长以及生物基质取材单一的问题，提供了一种同时测定利多卡因和丙胺卡因的生物样品分析方法。本检测方法操作简单，分析快速，而且能应用于多种不同的生物基质。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案之一为：一种同时测定利多卡因和丙胺卡因的生物样品分析方法，该分析方法包括以下步骤：
[0006](1)标准曲线溶液配制
[0007]称取10.24mg利多卡因对照品(质量校正系数99.7％)，置于15mL塑料管中，加入10.209mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的利多卡因标准储备溶液；称取10.06mg丙胺卡因对照品(质量校正系数83.1％)，置于15mL塑料管中，加入8.360mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的丙胺卡因标准储备溶液；然后用50％甲醇水稀释利多卡因和丙胺卡因，将利多卡因和丙胺卡因配制成浓度分别为10.0
‑
6000ng/mL(利多卡因)和5.00
‑
3000ng/mL(丙胺卡因)的混合的标准曲线工作溶液；
[0008](2)质控溶液配制
[0009]称取10.26mg利多卡因对照品(质量校正系数99.7％)，置于15mL塑料管中，加入10.229mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的利多卡因标准储备溶液；称取10.19mg丙胺卡因对照品(质量校正系数83.1％)，置于15mL塑料管中，加入8.468mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的丙胺卡因标准储备溶液；然后用50％甲醇水稀释利多卡因和丙胺卡因，将利多卡因和丙胺卡因配制成浓度分别为24.0、1200、2400、4800ng/mL(利多卡因)和12.0、600、1200、2400ng/mL(丙胺卡因)的混合的质控工作溶液；
[0010](3)内标溶液配制
[0011]取一支10mg利多卡因
‑
d6对照品(质量校正系数83.5％)，置于15mL塑料管中，加入8.350mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的利多卡因
‑
d6内标储备溶液；取一支1.01mg丙胺卡因
‑
d7对照品(质量校正系数82.8％)，置于1.5mL塑料管中，加入0.836mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的丙胺卡因
‑
d7内标储备溶液；然后用乙腈稀释利多卡因
‑
d6和丙胺卡因
‑
d7，将利多卡因
‑
d6和丙胺卡因
‑
d7配制成浓度分别为16.0ng/mL、8.00ng/mL的混合内标工作液；
[0012](4)生物样品前处理
[0013]标曲质控前处理：取空白生物样品190μL至1.5mLEP管中，分别与10μL标准曲线工作液、质控工作液混匀后，然后各取混匀后样品50μL，加入450μL内标工作溶液(双空白样品加入450μL乙腈)，涡旋1min，15400
±
10g，4℃，离心10min，取上清液100μL进样分析；
[0014]生物样品前处理：生物样品取50μL，加入450μL内标工作溶液，涡旋1min，15400
±
10g，4℃，离心10min，取上清液100μL进样分析；
[0015](5)LC
‑
MS/MS方法检测
[0016]通过LC
‑
MS/MS方法检测，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中利多卡因和丙胺卡因的浓度。
[0017]优选地，所述LC
‑
MS/MS方法的色谱及质谱条件如下：
[0018]色谱条件：液相型号为SHIMADZU LC
‑
20A；色谱柱为Kinetex 3.5μm XB
‑
C18150*4.6mm,Phenomenex；流动相A相为5mM乙酸铵水溶液，流动相B相为乙腈；流动相A：流动相B＝20：80(v：v)；
[0019]质谱条件：API 4000(ESI源)质谱，正离子，离子喷射电压为5000V，温度500℃，雾化气压力为55psi，解簇电压压力为55psi，气帘气体压力为20psi，扫描方式为多重反应监测(MRM)。
[0020]优选地，所述生物样品选自受试者的血浆样品。
[0021]优选地，所述利丙双卡因具有如下通式结构：
[0022][0023]专利技术所用试剂和原料均市售可得。
[0024]本专利技术的积极进步效果在于：本检测方法是通过高效、快速、灵敏的液相
‑
质谱联用系统(LC
‑
MS)方法同时对利多卡因和丙胺卡因进行分析。此方法采取了简单的有机溶剂蛋白沉淀法对生物样本进行前处理，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中利多卡因和丙胺卡因的浓度。本方法为测定利多卡因和丙胺卡因在人体内的药代动力学中利多卡因和丙胺卡因的检测提供了简便的分析方法。
附图说明
[0025]图1为利多卡因及内标的色谱图，其中图1(A)为利丙双卡因色谱图，图1(B)为内标色谱图。
[0026]图2为丙胺卡因及内标的色谱图，其中图2(A)为丙胺卡因色谱图，图2(B)为内标色谱图。
[0027]图3为利多卡因基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到的标准曲线。
[0028]图4为丙胺卡因基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到的标准曲线。
[0029]图5为受试者血浆样本中检测出利多卡因和内标的色谱图，其中图5(A)为利丙双卡因色谱图，图5(B)为内标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时测定利多卡因和丙胺卡因的生物样品分析方法，其特征在于，该分析方法包括以下步骤：(1)标准曲线溶液配制称取10.24mg利多卡因对照品，置于15mL塑料管中，加入10.209mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的利多卡因标准储备溶液；称取10.06mg丙胺卡因对照品，置于15mL塑料管中，加入8.360mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的丙胺卡因标准储备溶液；然后用50％甲醇水稀释利多卡因和丙胺卡因，将利多卡因和丙胺卡因配制成浓度分别为10.0
‑
6000ng/mL和5.00
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3000ng/mL的混合的标准曲线工作溶液；(2)质控溶液配制称取10.26mg利多卡因对照品，置于15mL塑料管中，加入10.229mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的利多卡因标准储备溶液；称取10.19mg丙胺卡因对照品，置于15mL塑料管中，加入8.468mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的丙胺卡因标准储备溶液；然后用50％甲醇水稀释利多卡因和丙胺卡因，将利多卡因和丙胺卡因配制成浓度分别为24.0、1200、2400、4800ng/mL和12.0、600、1200、2400ng/mL的混合的质控工作溶液；(3)内标溶液配制取一支10mg利多卡因
‑
d6对照品，置于15mL塑料管中，加入8.350mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的利多卡因
‑
d6内标储备溶液；取一支1.01mg丙胺卡因
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d7对照品，置于1.5mL塑料管中，加入0.836mL甲醇溶解，摇匀后配制成1.00mg/mL的丙胺卡因
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d7内标储备溶液；然后用乙腈稀释利多卡因
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d6和丙胺卡因
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d7，将利多卡因
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d...

【专利技术属性】
技术研发人员：李汀芷，
申请(专利权)人：苏州旭辉生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：