抑制血管生成和血管功能的寡肽制造技术

本发明专利技术提供了抑制血管生成和血管功能的寡肽，该寡核苷酸长度为3～7个氨基酸，包含下列序列或由下列序列组成：X2

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抑制血管生成和血管功能的寡肽
【专利
】
[0001]本专利技术涉及抗血管生成寡肽。本专利技术还涉及该寡肽的药物组合物和用途。
【技术背景】
[0002]血管生成是从先前存在的血管系统形成新血管。它在发育过程中积极发生，决定组织的生长和分化。在成年生活中，血管生成仅限于女性的生殖事件以及由于伤口或骨折引起的组织修复。此外，癌症、糖尿病性视网膜病变和类风湿性关节炎等高影响疾病的进展取决于血管生成的病理刺激。因此，具有阻断血管生成能力的分子具有巨大的治疗潜力。
[0003]已经表征了几种内源性抗血管生成因子。其中许多是来自对血管生成过程没有活性的蛋白质的特异性蛋白水解的分子片段，包括细胞外基质和基底膜蛋白，以及生长因子、细胞因子、循环蛋白和激素。
[0004]血管抑制素是由蛋白酶(包括组织蛋白酶D、基质金属蛋白酶和骨形态发生蛋白1)特异性蛋白水解切割后激素催乳素(PRL)失去其第四个α
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螺旋时产生的抗血管生成分子。PRL的前3个螺旋被命名为血管抑制素，因为它对血管生成和血管功能，即血管通透性和血管舒张有抑制作用。此外，已经报道了血管抑制素的非血管作用，例如纤溶作用、炎症作用、抗焦虑作用和神经作用。血管抑制素也称为16kDa的催乳素，缩写为PRL16K。此外，血管抑制素阻断不同的信号通路(Ras
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Raf
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MAPK、Ras
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Tiam1
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Rac1
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Pak1、PI3K
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Akt和PLCγ
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IP3
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eNOS)由促血管生成因子(VEGF、bFGF、缓激肽和IL1β)诱导。血管抑制素通过抑制内皮细胞的增殖、迁移和存活来阻断血管生成。此外，血管抑制素通过降低血管产生的一氧化氮来减少血管舒张和血管通透性，从而调节血管稳态。在动物研究中，血管抑制素诱导抑郁和焦虑相关行为。
[0005]已经表明，血管抑制素有助于对血管生成受到高度限制的血管器官和组织(例如视网膜和软骨)中的血管生成进行生理抑制。此外，血管抑制素作用在血管生成依赖性疾病如癌症、类风湿性关节炎、糖尿病性视网膜病以及围产期心肌病和先兆子痫的发病机制中起作用。
[0006]血管抑制素作用的分子机制仅是部分已知的。血管抑制素以高亲和力与内皮细胞膜结合，最近报道血管抑制素在内皮细胞表面与纤溶酶原激活物抑制剂(PAI
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1)、尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)和尿激酶受体(uPAR)形成多聚体复合物。还显示血管抑制素通过其与整合素α5β1的特异性结合诱导内皮细胞凋亡。
[0007]血管抑制素不是单一分子种类，而是包含具有不同分子量的PRL片段家族，所述不同分子量由产生血管抑制素的蛋白酶的切割位点确定。这些片段包括成熟PRL的第1氨基酸至残基123、132、139、142、147、150或159。所有这些同种型都抑制血管生成，但它们的相对生物学效力未知。Moreno
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Carranza,B.et alia,Sequence optimization and glycosylation of vasoinhibin:Pitfalls of recombinant production,Protein Expression and Purification.161(2019)49
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56公开了以高产率表达包含人催乳素前123个氨基酸的肽的困难，该肽具有良好的抗血管生成特性。
[0008]从US 7 300 920 B2已知抗血管生成肽与选自人胎盘催乳素、人生长激素或生长激素变体hGH
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V的N末端的约10～约150个连续氨基酸基本相同，其中所述肽(i)抑制毛细血管内皮细胞增殖和组织；(ii)抑制鸡绒毛尿囊膜的血管生成；(iii)结合至少一种不结合完整的全长生长激素、胎盘催乳素或生长激素变体hGH
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V的特异性受体。
[0009]Nguyen,N.
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Q.
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N.et alia,“Prolactin/growth hormone
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derived antiangiogenic peptides highlight a potential role of tilted peptides in angiogenesis”,Proceedings of the National Academy of Sciences.103(2006)14319
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14324显示倾斜肽发挥抗血管生成活性。倾斜(或斜向)肽是已知会破坏膜和脂质核心稳定性的短肽，其特征在于当呈螺旋状时疏水残基沿轴不对称分布。已经证明所有这些片段都具有具有倾斜肽特征的14
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aa序列。人催乳素和人生长激素的倾斜肽诱导内皮细胞凋亡，抑制内皮细胞增殖，并在体外和体内抑制毛细血管形成。
[0010]US 7 655 626 B2公开了一种组合物，该组合物包含分离的抗血管生成肽或包含与该抗血管生成肽融合的异源蛋白的融合蛋白，其中所述肽具有抗血管生成活性并且由下列氨基酸序列组成：X1
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X2
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X3
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X4
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X5
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X6
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X7
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X8
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X9
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X10
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X11
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X12
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X13
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X14，其中X1是与形成螺旋相容的任何氨基酸残基；X2是以下氨基酸残基：Leu；X3是以下氨基酸残基：Arg、Ser；X4是以下氨基酸残基：Ile、Leu；X5是与形成螺旋相容的任何氨基酸残基；X6是以下氨基酸残基：Leu、Val；X7是以下氨基酸残基：Leu、Ser；X8是与形成螺旋相容的任何氨基酸残基；X9是与形成螺旋相容的任何氨基酸残基；X10是以下氨基酸残基：Gln、Glu、Arg；X11是以下氨基酸残基：Ser；X12是以下氨基酸残基：Trp；X13是下列氨基酸残基：Leu、Asn；X14是以下氨基酸残基：Glu。
[0011]根据Robles,J.P.et alia,Scientific Reports 8(2018)17111
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17118，血管抑制素包含三螺旋束并且其抗血管生成结构域位于前79个残基内。分子动力学模拟(MD)表明，第四个α
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螺旋(H4)的丢失暴露了PRL的疏水核，并导致分子压缩成隐藏疏水核的三螺旋束。进一步推测，压缩是由环1(L1)的运动及其与α
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螺旋1(H1)的相互作用产生的，产生新的L1构象，该构象具有不同于PRL的静电和疏水表面，这可能对应于生物活性域。与此模型一致，据报道，位于水牛PRL L1早期部分的14个氨基酸(残基45～58)的肽序列表现出抗血管生成作用。该序列本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.抑制血管生成和血管功能的寡肽，该寡肽长度为3～7个氨基酸，且包含下列序列或由下列序列组成：序列X2
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X3
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X4，其中X2是碱性氨基酸或酰胺氨基酸，X3是小氨基酸，且X4是在中性pH下带电荷的碱性氨基酸，或序列X1
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X2
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X3
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X4，其中X1是极性不带电荷的氨基酸，且X2、X3和X4与X2
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X3
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X4中的X2、X3和X4相同，或序列X1
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X2
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X3
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X4
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X5
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X6
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X7，其中X1、X2、X3和X4与X1
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X2
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X3
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X4中的X1、X2、X3和X4相同，X5是小氨基酸，X6是疏水性氨基酸，且X7是疏水性氨基酸。2.根据权利要求1所述的寡肽，其中X1是Thr、Ser、Asn、Glu、Gly或Ala，特别是Thr，X2是His、Arg、Lys、Gln或Asn，特别是His，X3是Ala或Gly，特别是Gly，X4是Arg或Lys，特别是Arg，X5是Gly、Ser或Ala，特别是Gly，X6是Phe、Ala、Leu、Ile、Trp或Pro，特别是Phe，且X7是Phe、Ala、Leu、Ile、Trp或Pro，特别是Ile。3.抑制血管生成和血管功能的寡肽，该寡肽长度为3～7个氨基酸，且包含下列序列或由下列序列组成：序列X1
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X2
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X3，其中X1是在中性pH下带负电荷的酸性氨基酸，X2是极性氨基酸，且X3是在中性pH下带正电荷的氨基酸，或序列X1
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X2
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X3
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X4，其中X1、X2和X3与X1
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X2
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X3中的X1、X2和X3相同，且X4是极性芳香族氨基酸，或序列X1
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X2
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X3
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X4
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X5
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X6
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X7，其中X1、X2、X3和X4与X1
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X2
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X3
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X4中的X1、X2、X3和X4相同，X5是极性氨基酸，X6是疏水性氨基酸，且X7是疏水性氨基酸。4.根据权利要求4所述的寡肽，其中X1是Asp或Glu，特别是Glu，X2是Gln、Asn、Ser或Thr，特别是Gln，
X3是Arg或Lys，特别是Lys，X4是Tyr，X5是Gln、Asn、Ser或Thr，特别是Ser，X6是Phe、Ala、Leu、Ile、Trp或Pro，特别是Phe，且X7是Phe、Ala、Leu、Ile、Trp或Pro，特别是Leu。5.抑制血管生成和血管功能的寡肽，该寡肽长度为7个氨基酸，且具有序列X1
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X2
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X3
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X4
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X5
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【专利技术属性】
技术研发人员：雅各布，
申请(专利权)人：雅各布，
类型：发明
国别省市：