一种可进行开放式液体培养发酵的枯草芽孢杆菌培养方法技术

本发明专利技术公开了一种可进行开放式液体培养发酵的枯草芽孢杆菌培养方法，包括以下步骤：步骤a：将酪蛋白胰酶消化物15g、大豆粉木瓜蛋白酶消化物5g、氯化钠5g和琼脂15g，加入水定容至1000ml，通过氢氧化钠溶液将PH值调节至7.3

【技术实现步骤摘要】
一种可进行开放式液体培养发酵的枯草芽孢杆菌培养方法


[0001]本专利技术涉及生物制剂
，具体为一种可进行开放式液体培养发酵的枯草芽孢杆菌培养方法。

技术介绍

[0002]枯草芽孢杆菌是一种严格好氧的革兰氏阳性菌，生命力极强，代谢旺盛，枯草芽孢杆菌在成熟期以孢子状态存在，具有极强的抗逆能力，枯草芽孢杆菌能够有效抑制副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌及哈维氏弧菌等多种弧菌的生长，对由这几种弧菌引起的多种水产养殖病害具有有效的防治作用，同时还能在一定程度上促进养殖动物的生长，提高成活率及饵料利用率，目前枯草芽孢杆菌的工业化生产常用液体发酵法，因为该菌为严格好氧菌，在液体缺氧环境下，很短时间内就会全部死亡，所以为方便运输使用，必须将该菌培养至抗逆性强的孢子状态，菌体与辅料混合干燥后制成微生态制剂产品，通过发酵培养快速生成新鲜菌剂，然而枯草芽孢杆菌的液体发酵过程需要灭菌、接种和通气密闭发酵过程，使用枯草芽孢杆菌制剂的用户通常都不具备上述仪器和生产能力，无法进行培养，不能满足当今市场的需求，由于以上存在的问题，针对性地推出了一种可进行开放式液体培养发酵的枯草芽孢杆菌培养方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种可进行开放式液体培养发酵的枯草芽孢杆菌培养方法，具备能够使用开放式液体培养的方法进行小规模枯草芽孢杆菌的发酵培养，无需灭菌和密闭培养条件的优点，解决了目前枯草芽孢杆菌发酵培养过程需要专用仪器，用户无法自行培养的问题。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种可进行开放式液体培养发酵的枯草芽孢杆菌培养方法，包括以下步骤：步骤a：将酪蛋白胰酶消化物15g、大豆粉木瓜蛋白酶消化物5g、氯化钠5g和琼脂15g，加入水定容至1000ml，通过氢氧化钠溶液将PH值调节至7.3
±
0.2，制成大豆酪蛋白琼脂培养基；步骤b：将大豆酪蛋白琼脂培养基添加于锥形瓶中，添加至盛装不高于总容量20%的大豆酪蛋白琼脂培养基，通过辐照杀菌40
‑
60min，灭菌完毕后加入枯草芽孢杆菌菌种，将培养基加热至37℃后震荡摇匀培养8
‑
12h，制成发酵菌种；步骤c：将大豆酪蛋白琼脂培养基通过高温高压灭菌，随后冷却至40℃以上，将大豆酪蛋白琼脂培养基溶液装入培养皿中，继续冷却至室温，使大豆酪蛋白琼脂培养基凝固；步骤d：将发酵菌种接种至培养基中，按照8：90的质量比混合，发酵完成后制成枯草芽孢杆菌制剂，将枯草芽孢杆菌制剂和玉米淀粉进行混合，并通过喷雾干燥的方式使其充分干燥，再将干燥后的枯草芽孢杆菌菌粉粉碎；步骤e：将枯草芽孢杆菌菌粉通过喷雾干燥的方式将其含水量控制在<8%，制成的
将枯草芽孢杆菌菌粉使用真空包装机对枯草芽孢杆菌菌粉进行真空分装；步骤f：将无水葡萄糖3.5g、蛋白胨0.8g、酵母膏0.5g、磷酸二氢钾0.35g和碳酸钙0.25g，加水至1000ml制成培养液，随后通过120℃高温对培养液进行高温消毒，消毒后的培养液冷却至室温后，进行真空封装；步骤g：将培养液与水比例为1：0.7快速混合，混合后加热至沸腾，冷却后加入枯草芽孢杆菌菌粉快速搅拌混合，随后将温度控制在34
±
2℃，培养16h即可得到枯草芽孢杆菌制剂。
[0005]优选的，所述步骤a通过培养基混合设备对培养基溶液进行搅拌混合，混合时间为10
‑
20min，混合完毕后将培养基溶液排出至量瓶中暂存。
[0006]优选的，所述步骤b通过紫外线杀菌器使用254纳米波长的UV光对培养基进行辐照消毒，通过恒温摇床对培养基进行恒温摇匀。
[0007]优选的，所述步骤c通过高压蒸汽灭菌器对培养基溶液进行高压消毒，进行120℃和30min的高温灭菌处理，通过培养基保存箱对培养皿中的培养基进行储存，使其在无菌环境冷却至40℃以下产生凝固。
[0008]优选的，所述步骤d通过恒温发酵箱使培养基中的菌种进行发酵，发酵温度为37℃，发酵时间为24h，枯草芽孢杆菌制剂和玉米淀粉的混合时间为40
‑
60min，搅拌速度为190rpm，通过粉碎搅拌机对快速粉碎，将菌粉粉碎为120目以上的粉状颗粒。
[0009]优选的，所述步骤e通过喷雾干燥机对枯草芽孢杆菌菌粉进行干燥处理，干燥温度为70
‑
80℃，真空包装机对枯草芽孢杆菌菌粉分装每袋包装容量为1L。
[0010]优选的，所述步骤f通过高压蒸汽灭菌器对培养液进行高温消毒，消毒时间为40
‑
60min，消毒冷却后通过真空包装机进行包装。
[0011]优选的，所述步骤g通过搅拌装置对培养液与水进行混合，混合时间为10
‑
15min，培养液与枯草芽孢杆菌菌粉混合后通过持续加热，使其保持在恒定温度。
[0012]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：本专利技术根据菌株的特性，将枯草芽孢杆菌菌种与培养基成分混合制成枯草芽孢杆菌菌粉，然后将采用开放式液体培养方法进行小规模枯草芽孢杆菌的发酵培养，无需灭菌、接种和密闭培养条件，不仅方便枯草芽孢杆菌制剂用户的使用，更能大幅降低单位活菌数的生产成本。
具体实施方式
[0013]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0014]一种可进行开放式液体培养发酵的枯草芽孢杆菌培养方法，包括以下步骤：步骤a：将酪蛋白胰酶消化物15g、大豆粉木瓜蛋白酶消化物5g、氯化钠5g和琼脂15g，加入水定容至1000ml，通过氢氧化钠溶液将PH值调节至7.3
±
0.2，制成大豆酪蛋白琼脂培养基；步骤b：将大豆酪蛋白琼脂培养基添加于锥形瓶中，添加至盛装不高于总容量20%
的大豆酪蛋白琼脂培养基，通过辐照杀菌40
‑
60min，灭菌完毕后加入枯草芽孢杆菌菌种，将培养基加热至37℃后震荡摇匀培养8
‑
12h，制成发酵菌种；步骤c：将大豆酪蛋白琼脂培养基通过高温高压灭菌，随后冷却至40℃以上，将大豆酪蛋白琼脂培养基溶液装入培养皿中，继续冷却至室温，使大豆酪蛋白琼脂培养基凝固；步骤d：将发酵菌种接种至培养基中，按照8：90的质量比混合，发酵完成后制成枯草芽孢杆菌制剂，将枯草芽孢杆菌制剂和玉米淀粉进行混合，并通过喷雾干燥的方式使其充分干燥，再将干燥后的枯草芽孢杆菌菌粉粉碎；步骤e：将枯草芽孢杆菌菌粉通过喷雾干燥的方式将其含水量控制在<8%，制成的将枯草芽孢杆菌菌粉使用真空包装机对枯草芽孢杆菌菌粉进行真空分装；步骤f：将无水葡萄糖3.5g、蛋白胨0.8g、酵母膏0.5g、磷酸二氢钾0.35g和碳酸钙0.25g，加水至1000ml制成培养液，随后通过120℃高温对培养液进行高温消毒，消毒后的培养液冷却至室温后，进行真空封装；步本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可进行开放式液体培养发酵的枯草芽孢杆菌培养方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤a：将酪蛋白胰酶消化物15g、大豆粉木瓜蛋白酶消化物5g、氯化钠5g和琼脂15g，加入水定容至1000ml，通过氢氧化钠溶液将PH值调节至7.3
±
0.2，制成大豆酪蛋白琼脂培养基；步骤b：将大豆酪蛋白琼脂培养基添加于锥形瓶中，添加至盛装不高于总容量20%的大豆酪蛋白琼脂培养基，通过辐照杀菌40
‑
60min，灭菌完毕后加入枯草芽孢杆菌菌种，将培养基加热至37℃后震荡摇匀培养8
‑
12h，制成发酵菌种；步骤c：将大豆酪蛋白琼脂培养基通过高温高压灭菌，随后冷却至40℃以上，将大豆酪蛋白琼脂培养基溶液装入培养皿中，继续冷却至室温，使大豆酪蛋白琼脂培养基凝固；步骤d：将发酵菌种接种至培养基中，按照8：90的质量比混合，发酵完成后制成枯草芽孢杆菌制剂，将枯草芽孢杆菌制剂和玉米淀粉进行混合，并通过喷雾干燥的方式使其充分干燥，再将干燥后的枯草芽孢杆菌菌粉粉碎；步骤e：将枯草芽孢杆菌菌粉通过喷雾干燥的方式将其含水量控制在<8%，制成的将枯草芽孢杆菌菌粉使用真空包装机对枯草芽孢杆菌菌粉进行真空分装；步骤f：将无水葡萄糖3.5g、蛋白胨0.8g、酵母膏0.5g、磷酸二氢钾0.35g和碳酸钙0.25g，加水至1000ml制成培养液，随后通过120℃高温对培养液进行高温消毒，消毒后的培养液冷却至室温后，进行真空封装；步骤g：将培养液与水比例为1：0.7快速混合，混合后加热至沸腾，冷却后加入枯草芽孢杆菌菌粉快速搅拌混合，随后将温度控制在34
±
2℃，培养16h即可得到枯草芽孢杆菌制剂。2.根据权利要求1所述的一种可进行开放式液体培养发酵的枯草芽孢杆菌培养方法，其特征在于：所述步骤a通过培养基混合设备对培养基溶液进行搅拌混合，混合时间...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖尊平，
申请(专利权)人：肖尊平，
类型：发明
国别省市：