用于处置下肢疾病的细胞培养物制造技术

本发明专利技术的目的在于提供用于处置外周动脉疾病的细胞培养物、该细胞培养物的制造方法及使用了该细胞培养物的外周动脉疾病的处置方法等。本说明书通过提供细胞培养物等来解决上述课题，上述细胞培养物具有100～500μm的大小，该细胞培养物的外表面具有细胞外基质。该细胞培养物的外表面具有细胞外基质。该细胞培养物的外表面具有细胞外基质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于处置下肢疾病的细胞培养物


[0001]本专利技术涉及外表面具有细胞外基质的细胞培养物、该细胞培养物的制造方法、及使用了该细胞培养物的外周动脉疾病的处置方法等。

技术介绍

[0002]近年来，伴随老龄化的发展、饮食的西化、运动不足等，动脉硬化症的患者正在增加，与其相关的外周动脉疾病的患者数量也在增加。作为上述疾病的治疗方法，在疾病为轻度时，选择改善生活习惯的指导、药物治疗，在转为重症下肢缺血等重度的疾病时，选择使用了导管的血管形成疗法、旁路移植术等治疗方法。但是，若进一步重症化，则这些治疗方法也无法治疗，需要截断缺血肢。因此，希望开发侵入性低、对重症化的患者也能够使用的新型治疗方法。
[0003]对此，以血管内皮前体细胞的发现为契机，正在进行针对上述疾病的利用了再生医学的治疗方法的开发。作为这样的治疗方法，可举出例如，将自身骨髓细胞的单核细胞级分移植到对象的缺血肢的方法(非专利文献1)；将外周血单核细胞、间充质干细胞施与至外周动脉疾病的对象的方法(专利文献1、2)；将用凝胶成形为片状的源自iPS细胞的血管前体细胞移植到具有下肢缺血的对象的方法(专利文献3)等。
[0004]现有技术文献
[0005]专利文献
[0006]专利文献1：日本特表2012
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512843号公报
[0007]专利文献2：日本特表2015
‑
524437号公报
[0008]专利文献3：国际公开2013/069661号公报
[0009]非专利文献
>[0010]非专利文献1：吉冈徹他，J Jpn Coll Angiol,2005,45:161
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技术实现思路

[0011]专利技术所要解决的课题
[0012]本专利技术的目的在于提供外表面具有细胞外基质的细胞培养物、该细胞培养物的制造方法及使用了该细胞培养物的外周动脉疾病的处置方法等。
[0013]用于解决课题的手段
[0014]专利文献1、2中记载的将自身骨髓细胞的单核细胞级分、外周血单核细胞或间充质干细胞施与至具有外周动脉疾病的对象的方法中，存在分别以单细胞的状态进行施与，施与部位中的施与的细胞的植活不充分等课题。
[0015]本申请专利技术人发现，通过施与外表面具有细胞外基质的含有骨骼肌成肌细胞的细胞培养物，能够在生物体内确保高植活性，并促进血管生成，基于该见解进行进一步持续研究，结果完成了本专利技术。
[0016]即，本专利技术涉及以下内容。
[0017][1]细胞培养物，其为用于处置下肢疾病的具有100～500μm大小的细胞培养物，该细胞培养物的外表面具有细胞外基质。
[0018][2]如[1]所述的细胞培养物，其用于促进血管生成。
[0019][3]如[1]或[2]所述的细胞培养物，其含有骨骼肌成肌细胞。
[0020][4]如[1]～[3]中任一项所述的细胞培养物，其中，细胞培养物为片状细胞培养物的碎片。
[0021][5]如[1]～[4]中任一项所述的细胞培养物，其中，下肢疾病为外周动脉疾病。
[0022][6]片状细胞培养物的碎片，其具有细胞外基质。
[0023][7]用于制作片状细胞培养物的碎片的方法，其包括以下步骤：
[0024]将细胞接种于基材上的步骤；
[0025]将接种的细胞进行片化的步骤；及
[0026]将形成的片状细胞培养物进行破碎的步骤。
[0027][8]如[7]所述的方法，其中，片状细胞培养物的破碎为使用注射器进行4～6次悬浮。
[0028][9]医药组合物，其用于处置外周动脉疾病，上述医药组合物包含含有骨骼肌成肌细胞的细胞培养物和细胞外基质。
[0029][10]用于处置外周动脉疾病的方法，其包括施与含有骨骼肌成肌细胞且具有细胞外基质的片状细胞培养物的碎片。
[0030][11]用于处置外周动脉疾病的方法，其包括施与包含含有骨骼肌成肌细胞的细胞培养物和细胞外基质的医药组合物。
[0031][12]如[10]或[11]所述的方法，其中，施与为向肌肉内的施与。
[0032]专利技术的效果
[0033]通过施与本专利技术的细胞培养物，能够促进血管形成，处置外周动脉疾病。另外，本专利技术的细胞培养物能够在施与的部位长期植活。此外，本专利技术的细胞培养物可以通过例如注射而直接施与至对象的患部，因此即使对象的患部范围广，也能够分成多个位置简便地进行施与。更详细而言，通过将本专利技术的细胞培养物施与至患部，例如能够生成中心具有核的肌纤维、或者改善血流量等。
附图说明
[0034][图1]图1示出片状细胞培养物的制作中使用的细胞的使用了FACS的细胞纯度的测定结果。
[0035][图2A]图2A为制作的片状细胞培养物的照片。
[0036][图2B]图2B为经苏木精
‑
伊红染色的片状细胞培养物的截面的显微镜照片。
[0037][图2C]图2C为经免疫染色的片状细胞培养物的截面的显微镜照片。
[0038][图3A]图3示出片状细胞培养物的悬浮液的显微镜照片。图3A为反复进行5次作为悬浮的抽吸
·
排出的组合操作后的悬浮液的照片。
[0039][图3B]图3B为图3A的悬浮液的经放大的显微镜照片。
[0040][图3C]图3C为反复进行10次作为悬浮的抽吸
·
排出的组合操作后的悬浮液的经放大的显微镜照片。
[0041][图4]图4为示出通过激光多普勒血流灌注成像(LDPI)测定的、将小鼠缺血模型制作前的血流量设为100％时的第0天、第7天、第14天、第21天及第28天的各组小鼠的血流量％的结果的图表。图中的成簇细胞组表示碎片施与组的小鼠，单细胞组表示单细胞施与组的小鼠，生理盐水组表示生理盐水施与组的小鼠。另外，图中*表示对生理盐水施与组进行邓奈特检验(Dunnett
’
s test)，其中P<0.05。
[0042][图5]图5示出通过LDPI测定的第7天、第14天、第21天及第28天的各组的代表性的小鼠的成像结果。图中的成簇细胞组表示碎片施与组的小鼠，单细胞组表示单细胞施与组的小鼠，生理盐水组表示生理盐水施与组的小鼠。
[0043][图6A
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F]图6示出对第3天、第5天、第7天及第28天的从碎片施与组、单细胞施与组、生理盐水施与组的各小鼠中采集的组织的RT
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PCR的结果。图中的成簇细胞组表示碎片施与组的小鼠，单细胞组表示单细胞施与组的小鼠，生理盐水组表示生理盐水施与组的小鼠。另外，图中*表示对生理盐水施与组进行邓奈特检验，其中P<0.05，图中+表示对单细胞施与组进行邓奈特检验，其中P<0.05。图6A示出针对VEGF的RT
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PCR的结果，图6B示出针对HGF的RT
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.细胞培养物，其为用于处置下肢疾病的具有100～500μm大小的细胞培养物，该细胞培养物的外表面具有细胞外基质。2.如权利要求1所述的细胞培养物，其用于促进血管生成。3.如权利要求1或2所述的细胞培养物，其含有骨骼肌成肌细胞。4.如权利要求1～3中任一项所述的细胞培养物，其中，细胞培养物为片状细胞培养物的碎片。5.如权利要求1～4中任一项所述的细胞培养物，其中，下肢疾病为外周动脉疾病。6.片状细胞培养物的碎片，其具有细胞外基质。7.用于制作片状细胞培养物的碎片的方法，其包括以下步骤：将细胞接种于基材上的步骤；将接种的细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：泽芳树，宫川繁，三宅启介，大山贤二，
申请(专利权)人：泰尔茂株式会社，
类型：发明
国别省市：