工程化腺相关病毒衣壳制造技术

本文描述产生工程化病毒衣壳变体的方法。本文还描述工程化病毒衣壳变体、工程化病毒粒子以及它们的制剂和细胞。本文还描述含有工程化病毒衣壳多核苷酸的载体系统和其用途。化病毒衣壳多核苷酸的载体系统和其用途。化病毒衣壳多核苷酸的载体系统和其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化腺相关病毒衣壳
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年9月12日提交的标题为“ENGiNEERED ADENO
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ASSOCIATED VIRUS CAPSIDS”的同在申请中的美国临时专利申请号62/899,453和2019年10月16日提交的标题为“ENGINEERED ADENO
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ASSOCIATED VIRUS CAPSIDS”的同在申请中的美国临时专利申请号62/916,185的权益和优先权，所述美国临时专利申请的内容以引用的方式整体并入本文中。
[0003]序列表
[0004]本申请含有以电子形式提交的序列表，所述序列表为ASCII.txt文件，标题为BROD
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4400WP_ST25.txt，2020年9月11日创建，并且大小为1.6MB。所述序列表的内容整体并入本文中。


[0005]本文所公开的主题一般针对重组腺相关病毒(AAV)载体以及其系统、组合物和其用途。

技术介绍

[0006]重组AAV(rAAV)是基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种载体，其包含：腺相关(AAV)衣壳蛋白多核苷酸，其中所述AAV衣壳蛋白多核苷酸包含3'多腺苷酸化信号。2.如权利要求1所述的载体，其中所述载体不包含剪接调控元件。3.如权利要求1所述的载体，其中所述载体包含最小剪接调控元件。4.如权利要求1
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3中任一项所述的载体，所述载体还包含修饰的剪接调控元件，其中所述修饰使所述剪接调控元件失活。5.如权利要求4所述的载体，其中所述修饰的剪接调控元件是足以诱导rep蛋白多核苷酸与所述衣壳蛋白多核苷酸之间的剪接的多核苷酸序列。6.如权利要求5所述的载体，其中所述足以诱导剪接的多核苷酸序列是剪接受体或剪接供体。7.如权利要求1
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6中任一项所述的载体，其中所述多腺苷酸化信号是SV40多腺苷酸化信号。8.如权利要求1
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7中任一项所述的载体，其中所述AAV衣壳多核苷酸是工程化AAV衣壳多核苷酸。9.如权利要求8所述的载体，其中所述工程化AAV衣壳多核苷酸包含能够编码n聚体氨基酸基序的n聚体基序多核苷酸，其中所述n聚体基序包含三个或更多个氨基酸，其中所述n聚体基序多核苷酸是插入所述AAV衣壳多核苷酸中能够编码衣壳表面的区域内，在所述AAV衣壳多核苷酸中的两个密码子之间。10.如权利要求9所述的载体，其中所述n聚体基序包含3
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15个氨基酸。11.如权利要求9
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10中任一项所述的载体，其中所述n聚体基序是6或7个氨基酸。12.如权利要求9
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11中任一项所述的载体，其中所述n聚体基序多核苷酸是插入AAV9衣壳多核苷酸中对应于氨基酸262
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269、327
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332、382
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386、452
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460、488
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505、527
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539、545
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558、581
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593、704
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714或它们的任何组合之间的任何两个相邻氨基酸的密码子之间，或AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8衣壳多核苷酸中的类似位置。13.如权利要求12中任一项所述的载体，其中所述n聚体基序多核苷酸是插入所述AAV9衣壳多核苷酸中对应于aa588和589的密码子之间。14.如权利要求1
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13中任一项所述的载体，其中所述载体能够产生具有增加的特异性、降低的免疫原性或两者的AAV病毒粒子。15.如权利要求14所述的载体，其中所述载体能够产生具有增加的肌细胞、特异性、降低的免疫原性或两者的AAV病毒粒子。16.如权利要求9
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15中任一项所述的载体，其中所述n聚体基序多核苷酸是在表1
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6中的任一者中的任何多核苷酸。17.如权利要求9
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16中任一项所述的载体，其中所述n聚体基序多核苷酸能够编码如表1
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6中的任一者中的肽。18.如权利要求9
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17中任一项所述的载体，其中所述n聚体基序多核苷酸能够编码三个或更多个氨基酸，其中前三个氨基酸是RGD。19.如权利要求9
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18中任一项所述的载体，其中所述n聚体基序具有多肽序列RGD或RGDX
n
，其中n是3
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15个氨基酸和X，其中存在的每个氨基酸是独立地选自任何氨基酸的组中
的其他氨基酸。20.如权利要求9
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19中任一项所述的载体，其中所述载体能够产生具有肌肉特异性向性的AAV衣壳多肽、AAV衣壳或两者。21.一种载体系统，其包含：如权利要求1
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20中任一项所述的载体；AAV rep蛋白多核苷酸或其部分；以及与所述AAV衣壳蛋白、AAV rep蛋白或两者可操作地偶联的单一启动子，其中所述单一启动子是与所述AAV衣壳蛋白、AAV rep蛋白或两者可操作地偶联的唯一启动子。22.一种载体系统，其包含：如权利要求1
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20中任一项所述的载体；和AAV rep蛋白多核苷酸或其部分。23.如权利要求22所述的载体系统，所述载体系统还包含第一启动子，其中所述第一启动子与所述AAV衣壳蛋白、AAV rep蛋白或两者可操作地偶联。24.如权利要求21或23中任一项所述的载体系统，其中所述第一启动子或所述单一启动子是细胞特异性启动子。25.如权利要求23
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24中任一项所述的载体系统，其中所述第一启动子能够在不存在内源性AAV启动子的情况下驱动高滴度病毒产生。26.如权利要求25所述的载体系统，其中所述内源性AAV启动子是p40。27.如权利要求21
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26中任一项所述的载体系统，其中所述AAV rep蛋白多核苷酸与所述AAV衣壳蛋白可操作地偶联。28.如权利要求21
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27中任一项所述的载体系统，其中所述AAV蛋白多核苷酸是与所述AAV衣壳蛋白多核苷酸相同的载体的一部分。29.如权利要求21
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28中任一项所述的载体系统，其中所述AAV蛋白多核苷酸是在与所述AAV衣壳蛋白多核苷酸不同的载体上。30.一种多肽，所述多肽由如权利要求1
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20中任一项所述的载体或由如权利要求21
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29中任一项所述的载体系统编码。31.一种细胞，其包含：如权利要求1
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20中任一项所述的载体、如权利要求21
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29中任一项所述的载体系统、如权利要求30所述的多肽或它们的任何组合。32.如权利要求31所述的细胞，其中所述细胞是原核的。33.如权利要求31所述的细胞，其中所述细胞是真核的。34.一种工程化腺相关病毒粒子，所述粒子通过包括以下的方法产生：在细胞中表达如权利要求1
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20中任一项所述的载体、如权利要求21
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29中任一项所述的载体系统或两者。35.如权利要求34所述的方法，其中所述表达所述载体系统的步骤在体外或离体发生。36.如权利要求35所述的方法，其中所述表达所述载体系统的步骤在体内发生。37.一种鉴定细胞特异性腺相关病毒(AAV)衣壳变体的方法，所述方法包括：(a)在细胞中表达如权利要求1
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20中任一项所述的载体系统以产生AA...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：哈佛学院院长等麻省理工学院，
类型：发明
国别省市：