一种肌萎缩侧索硬化致病基因、检测试剂盒及引物组制造技术

本发明专利技术涉及生物技术及医学领域，具体公开了一种肌萎缩侧索硬化致病基因，致病基因为突变的TRMT2B基因，所述突变的TRMT2B基因与野生型TRMT2B基因的差异包括1个突变，突变为野生型TRMT2B基因编码区第1356号碱基G突变为A，突变的TRMT2B基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术还公开了一种肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂盒及肌萎缩侧索硬化检测产品检测引物组，其中，产品检测盒检测灵敏度佳，准确度高，引物组可应用于肌萎缩侧索硬化检测产品如芯片、试剂盒或生物试剂的制备。试剂盒或生物试剂的制备。试剂盒或生物试剂的制备。

A pathogenic gene, detection kit and primer set of amyotrophic lateral sclerosis

【技术实现步骤摘要】
一种肌萎缩侧索硬化致病基因、检测试剂盒及引物组


[0001]本专利技术涉及生物技术及医学领域，具体涉及一种肌萎缩侧索硬化致病基因、检测试剂盒及引物组。

技术介绍

[0002]肌萎缩侧索硬化（Amyotrophic Lateral Sclerosis, ALS）是一种罕见的严重神经退行性疾病，其病理表征为上运动神经元与下运动神经元，包括大脑皮质、锥体束、皮质脑干束、脑干运动核团以及脊髓前角运动神经元等进行性的退变；临床表现为肌肉的萎缩与无力等。ALS好发于55
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65岁人群，25岁以下发病的为青少年型ALS（Juvenile ALS, JALS）。在中国人群中，ALS的发病率大约为0.8
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1.2/10万人，并呈现逐年升高的趋势，严重威胁我国国民健康。ALS的诊断主要依靠El Escorial或者Awaji量表，通过评估进行性无力累及的范围，上运动神经元与下运动神经元的累及情况，并辅助其他检查来进行诊断。当前，ALS的治疗方式十分有限，目前仅能通过药物Riluzole和Edaravone延缓疾病的进展，然而，即使按时用药，绝大多数患者仍在发病后3
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5年内死亡。
[0003]目前，ALS的发病机制尚不清楚。环境因素，包括吸烟、性别因素、创伤及毒物暴露等都与ALS的发病相关。而越来越多的证据表明，遗传因素在ALS发病中起了重要的作用。双生子的研究表明，ALS的遗传度为61%。通过对家族性ALS（Familial ALS，FALS）及散发患者的研究，目前已鉴定了多个与ALS相关的基因，包括了SOD1、SETX、ALS2、FUS、OPTN、ATXN2、SQSTM1、C9orf72、SPTLC1、SIGMAR1等40余个基因。其中，SOD1、TDP43、FUS及C9orf72基因的变异，在约60%的FALS以及11%的ALS散发患者中被鉴定到。C9orf72基因GGGGCC拷贝数变异是欧美人群中ALS最常见的致病基因，约33.7%的FALS患者以及5.1%的散发患者均携带该基因的变异。而最早定位并克隆的ALS致病基因SOD1，在中国人群中大约有30.6%的FALS患者以及1.5%的散发患者均携带该基因的变异。尽管如此，超过90%患者的遗传学病因仍不清楚。ALS的遗传学病因复杂，临床异质性高，因此，定位更多的疾病相关基因，为其诊断、预防与治疗提供新的思路，并开发相关的检测产品用于快速检测迫在眉睫。

技术实现思路

[0004]本专利技术所解决的技术问题在于提供一种肌萎缩侧索硬化新的致病基因，并提供了该致病基因在制备肌萎缩侧索硬化检测产品中的应用。
[0005]本专利技术所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：一种肌萎缩侧索硬化致病基因，致病基因为突变的TRMT2B基因，所述突变的TRMT2B基因与野生型TRMT2B基因的差异包括1个突变，突变为野生型TRMT2B基因编码区第1356号碱基G突变为A，突变的TRMT2B基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]进一步地，突变的TRMT2B基因能通过影响线粒体功能引发肌萎缩侧索硬化的发生。
[0007]一种肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂盒，基于突变的TRMT2B基因设计，包括核
苷酸序列号如如SEQ ID NO.25所示的正向扩增引物B12B13
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F及核苷酸序列号如SEQ ID NO.26所示的反向扩增引物。该检测试剂盒用于检测肌萎缩侧索硬化家系中发现的1356位碱基的变异及外显子10号与11号的变异检测。
[0008]进一步地，检测试剂盒还包括DNA扩增酶、缓冲液、dNTP混合物。
[0009]进一步地，所述DNA扩增酶为Taq DNA聚合酶，Taq DNA聚合酶的浓度为1U/μL；所述缓冲液为MgCl2溶液，MgCl2溶液的浓度为10mM；所述dNTP混合物的浓度为10 mM。
[0010]进一步地，检测试剂盒中，引物组、DNA扩增酶、缓冲液、水的体积比为2:1:2: 4。
[0011]进一步地，检测试剂盒使用时，加入的DNA模板与缓冲液的体积比为1:1，DNA模板的浓度为50ng/μL。
[0012]本专利技术还提出了一种肌萎缩侧索硬化检测产品检测引物组，包括如下14组扩增引物对中的至少一组，14组扩增引物对为：Primer名称核苷酸序列Primer名称核苷酸序列B1
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F如SEQIDNO.3所示B1
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R如SEQIDNO.4所示B2
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F如SEQIDNO.5所示B2
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R如SEQIDNO.6所示B3
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F如SEQIDNO.7所示B3
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R如SEQIDNO.8所示B4
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F如SEQIDNO.9所示B4
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R如SEQIDNO.10所示B5
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F如SEQIDNO.11所示B5
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R如SEQIDNO.12所示B6
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F如SEQIDNO.13所示B6
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R如SEQIDNO.14所示B7
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F如SEQIDNO.15所示B7
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R如SEQIDNO.16所示B8
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F如SEQIDNO.17所示B8
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R如SEQIDNO.18所示B9
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F如SEQIDNO.19所示B9
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R如SEQIDNO.20所示B10
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F如SEQIDNO.21所示B10
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R如SEQIDNO.22所示B11
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F如SEQIDNO.23所示B11
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R如SEQIDNO.24所示B12B13
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F如SEQIDNO.25所示B12B13
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R如SEQIDNO.26所示B14
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F如SEQIDNO.27所示B14
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R如SEQIDNO.28所示进一步地，当引物组包含如SEQ ID NO.27所示的引物B14
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F及如SEQ ID NO.28所示的引物B14
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R时，引物组还包括测序引物，测序引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示。
[0013]本专利技术还提出了如上所述的引物组在肌萎缩侧索硬化检测产品中的应用，所述产品包括芯片、试剂盒或生物试剂。
[0014]有益效果：1）本专利技术提出了一种新的肌萎缩侧索硬化致病基因，致病基因为突变的TRMT2B基因，突变为野生型TRMT2B基因编码区第1356号碱基G突变为A，为X染色体上的纯合突变而发病。基于该致病基因的发现，通过检测受试者是否携带有突变的TRMT2B基因，可以早期筛查是否携带有肌萎缩侧索硬化，提供优生优育指导，也可为肌萎缩侧索硬化提供分子诊断依据，为后续肌萎缩侧索硬化治疗提供可能的药物靶点。突变的TRMT2B基因编码tRNA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肌萎缩侧索硬化致病基因，其特征在于，致病基因为突变的TRMT2B基因，所述突变的TRMT2B基因与野生型TRMT2B基因的差异包括1个突变，突变为野生型TRMT2B基因编码区第1356号碱基G突变为A，突变的TRMT2B基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的肌萎缩侧索硬化致病基因，其特征在于，突变的TRMT2B基因能通过影响线粒体功能引发肌萎缩侧索硬化的发生。3.一种肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂盒，其特征在于，基于如权利要求1所述的TRMT2B基因设计，包括核苷酸序列号如如SEQ ID NO.25所示的正向扩增引物B12B13
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F及核苷酸序列号如SEQ ID NO.26所示的反向扩增引物。4.根据权利要求3所述的肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂盒，其特征在于，检测试剂盒还包括DNA扩增酶、缓冲液、dNTP混合物。5.根据权利要求4所述的肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂盒，其特征在于，所述DNA扩增酶为Taq DNA聚合酶，Taq DNA聚合酶的浓度为1U/μL；所述缓冲液为MgCl2溶液，MgC...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺曦，刘彦伶，王俊岭，袁艳春，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：