一种基于组织破碎的叶绿体蛋白免疫荧光染色的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种基于组织破碎的叶绿体蛋白免疫荧光染色的方法，所述方法包括如下步骤：1)植物叶片组织的破碎；2)对已经破碎的组织做免疫荧光染色；3)用EDTA

【技术实现步骤摘要】
一种基于组织破碎的叶绿体蛋白免疫荧光染色的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于组织破碎的叶绿体蛋白免疫荧光染色的方法。

技术介绍

[0002]叶绿体是植物进行光合作用的主要场所，是植物特有的细胞器。此外，叶绿体在植物体内还具有其他很多重要的生理功能，如脂肪酸、氨基酸和多种激素的合成。在叶绿体分裂过程中，叶绿体分裂蛋白形成一个环状超级复合体，定位于叶绿体的中部。然后环状复合体开始缢缩，从而使一个叶绿体一分为二。植物通过叶绿体分裂来维持细胞中叶绿体的数量。对于叶绿体蛋白的研究一直是生物学领域的重要方面。
[0003]常用的研究叶绿体蛋白定位的方法有荧光信号标记法和免疫荧光染色法等。荧光信号标记法必须要带荧光标签，标签可能会改变目的蛋白的结构和功能，从而不能反映蛋白在植物体内的真实状态。荧光标签通常还需要转基因植物，而这对很多种植物很难实现。以往的免疫荧光染色法需要蜡质包埋或酶解出原生质体和提前制作多聚赖氨酸玻片等，均使实验耗时长且不便于操作。受不同植物细胞壁结构特征的影响，一些植物难以酶解出原生质体，因此无法通过酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于组织破碎的叶绿体蛋白免疫荧光染色或标记叶绿体蛋白在叶绿体中位置的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1)植物组织的破碎和固定：植物组织浸没在固定液中，用锯齿状刀片将植物组织切成不规则碎片；室温避光条件下，用所述固定液固定；2)免疫荧光染色：已经固定的破碎植物组织用封闭液封闭后；依次分别孵育叶绿体蛋白的一抗和具有荧光标记的二抗；3)组织的裂解：破碎植物组织用EDTA
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Na2处理，55℃加热0.5
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1.5h；4)样品的保存：在样品中加入封片剂，低于8℃保存；5)样品的观察：用荧光显微镜观察。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，破碎的植物组织室温避光固定0.5
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1.5h；固定结束后用PBS清洗2
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4次破碎的植物组织，每次至少停留5min。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物组织为含有叶绿体的植物材料；优选的，所述植物材料选自具有叶绿体的叶片、花、茎或根；更优选地，所述植物材料选自拟南芥叶片、榆树叶片、杨树叶片、构树叶片、菊花叶片、球花石斛叶片、绿萝叶片、银杏叶片、蕨类叶片中的一种。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定液为包含4％多聚甲醛的固定液，优选地，固定液包含0.4M甘露醇、20...

【专利技术属性】
技术研发人员：高宏波，王璐璐，唐明冬，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：