酿酒酵母中延胡索酸酶的提取制造技术

本发明专利技术公开了一种延胡索酸酶分离纯化的新工艺；本发明专利技术是这样来实现的：将酿酒酵母细胞悬浮液按质量分数4比10悬浮于pH为7.5的100mol/L磷酸钾缓冲液中，分别用珠磨搅拌机和超声冰浴方式进行细胞破碎30min，悬浮液4000rpm离心5min，取上清液调节pH至7.5，弃去沉淀，留上清液加入丙酮低温静置后可见沉淀析出；干燥称量；其活力测定用单位时间苹果酸的减少量表示，紫外可见分光光度计测定330nm波长处的吸光度的增加量。其特征在于细胞破碎时采取超声冰浴方式，可通过超声波的空化作用将存在于亚细胞结构上的酶蛋白分离下来，从而提高分离纯化效率。与普通珠磨搅拌纯化制备方法比较发现超声冰浴破碎细胞方式所得到的延胡索酸酶得率高、活力大。活力大。

【技术实现步骤摘要】
酿酒酵母中延胡索酸酶的提取
[0001]
：本专利技术属于生物化学酶的纯化制备领域，具体涉及一种延胡索酸酶的纯化制备方法。
[0002]
技术介绍
：延胡索酸酶EC（4.2.1.2.）正式名称为延胡索酸水化酶是催化延胡索酸与水生成L-苹果酸并且可逆进行相互转变反应的酶，最适pH为6.5-8.0，是参与三羧酸循环的酶，因此存在于线粒体基本结构中。工业上主要用来合成苹果酸，医学上患者如果缺乏延胡索酸酶可发生延胡索酸尿；造成脑畸形和严重的智力障碍。分离过程中的工艺步骤对其产品活力有较大影响。
[0003]
技术实现思路
：本专利技术涉及一种延胡索酸酶的纯化制备方法。
[0004]本专利技术是这样来实现的：将酿酒酵母细胞悬浮液按质量分数4比10悬浮于pH为7.5的100mol/L磷酸钾缓冲液中，分别用珠磨搅拌机和超声冰浴方式进行细胞破碎30min，悬浮液4000rpm离心5min，取上清液调节pH至7.5，弃去沉淀，留上清液加入丙酮低温静置后可见沉淀析出；干燥称量；其活力测定用单位时间苹果酸的减少量表示，紫外可见分光光度计测定330nm波长处的吸光度的增加量。其特本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种延胡索酸酶分离与纯化的新工艺，其特征在于细胞破碎时采取超声冰浴方式，可提高分离纯化效率。2.将酿酒酵母细胞悬浮液按质量分数4比10悬浮于pH为7.5的100mol/L磷酸钾缓冲液中，分别用珠磨搅拌机和超声冰浴方式进行细胞破碎30min，悬浮液4000rpm离心5m...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤勇铮，
申请(专利权)人：南京科技职业学院，
类型：发明
国别省市：