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CYLD,IFFO1及下游靶基因在卵巢癌耐药综合治疗及检测中的应用制造技术

技术编号:33948269 阅读:12 留言:0更新日期:2022-06-29 21:51
本发明专利技术属于肿瘤耐药性检测应用技术领域,涉及一种同时检测CYLD及IFFO1以及下游靶基因Bax、Bcl

【技术实现步骤摘要】
CYLD,IFFO1及下游靶基因在卵巢癌耐药综合治疗及检测中的应用


[0001]本专利技术属于肿瘤耐药性检测应用
,具体涉及一种同时检测CYLD及IFFO1以及下游靶基因ABCB1、Bcl

XL、Bax和Bcl3用以卵巢癌耐药性综合治疗药物以及综合检测试剂盒的开发应用。

技术介绍

[0002]卵巢癌是一种严重威胁女性健康的疾病,其发病率仅为妇科恶性肿瘤的第3位,但其死亡率却位居于第1位,并且根据最新的数据显示,其发病率存在逐年上升的趋势,而死亡率并无明显改善。目前卵巢癌的治疗原则为:在尽可能无残留的手术切除(R0切除)基础上,辅以铂类为基础的化疗。然而,由于器官位置位于腹腔中,临床不能寻求到合适的早期诊断方法,70%患者确诊时已处于疾病的中晚期(临床上的Ⅲ期、Ⅳ期),同时也导致手术治疗困难,甚至丧失手术时机;而靶向治疗,免疫治疗也仅有少数患者可以从中获益。因此,以铂类为基础的化疗成为了所有患者的最有效治疗手段,然而19%的早期卵巢癌、60%

85%的复发卵巢癌最终会出现铂类耐药,导致了化疗困难。因此,研究卵巢癌铂类耐药过程中的重要调控基因及其调控机制,将对卵巢癌患者药物的选择及治疗方案的制定具有重要意义,既可以最大限度节约医疗成本,又可以减少患者因为化疗药物使用不当而造成的耐药和副反应,具有重要的科学意义和临床应用价值。
[0003]铂类药物属于细胞周期非特异性药物,主要通过进入肿瘤细胞后与DNA结合形成Pt

DNA加合物,介导肿瘤细胞坏死或凋亡,起到抗肿瘤的目的。铂类药物导致的DNA损伤,可以促进NF

κB通路的激活。该通路的激活可以抑制细胞凋亡通路的进程;可以促进P

gp蛋白的转录;还可以促进机体的肿瘤炎症反应,促进血管新生和转移、颠覆抗肿瘤免疫应答,是导致化疗药物耐药的重要原因之一。然而,有研究表明,NF

κB通路的激活和调控机制是具有细胞特异性的,由于NF

κB通路可以接受炎症因子、肿瘤坏死因子、细菌脂多糖等多种因子的刺激,进而激活肿瘤细胞的不同通路,其调控机制复杂,在卵巢癌细胞中,NF

κB通路对铂耐药的调控机制,尚需要进一步的研究。
[0004]CYLD是泛素特异性蛋白水解酶(ubiquitin

specific proteases,USPs)家族的成员,是一种特异性去除K63连接泛素链的去泛素化酶。同时,去泛素化酶CYLD在NF

κB通路中起着关键作用。CYLD可以通过去泛素化NEMO(IKKγ)、TRAF2、TRAF6等分子,从而抑制NF

κB信号通路的活性;同时,CYLD还可在核膜与B淋巴细胞瘤蛋白3(Bcl

3)相互作用抑制其泛素化与入核,进而抑制其与NF

κB家族的转录因子p50和p52相互作用,促进NF

κB信号通路的活化,调节凋亡。另一方面,CYLD还负调控TGF

β信号通路,直接去泛素化K63位泛素修饰的Smad7,同时,CYLD还可以去泛素化并抑制蛋白激酶B(Akt)的活性,促进Smad3的降解,进而抑制TGF

β信号通路。肿瘤细胞通过抑制CYLD的表达,进一步抑制NF

κB及TGF

β通路,通过促进凋亡、周期从而达到促进肿瘤发生/发展的目的。
[0005]中间纤维蛋白IFFO1(Intermediate filament family orphan 1)是细胞骨架蛋
白家族成员。现有研究表明,在多种肿瘤中IFFO1基因的上游启动子区域存在高度甲基化,导致IFFO1基因的表达沉默。在肺癌细胞中检测IFFO1启动子区的甲基化水平,为肺癌的早期诊断提供了依据;并且癌症细胞的染色体易位频率也与IFFO1表达量高度负相关。而重新表达IFFO1,可以抑制IFFO1表达沉默的癌症细胞中的染色体易位发生频率。这说明,肿瘤细胞通过甲基化IFFO1启动子区抑制它的表达,从而促进了染色体易位的产生,进一步驱动了肿瘤的发生发展。IFFO1还与核纤层蛋白Lamin A/C相互作用,形成细胞核内部的核骨架结构。但在肿瘤耐药中,却罕有研究报道。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术的缺点和不足之处,本专利技术的目的在于提供一种同时检测CYLD及IFFO1以及下游靶基因ABCB1、Bcl

XL、Bax和Bcl3在卵巢癌耐药性产生的检测试剂盒的应用。
[0007]本专利技术目的通过以下技术方案实现:
[0008]实时检测CYLD及IFFO1以及下游靶基因ABCB1、Bcl

XL、Bax和Bcl3检测卵巢癌耐药性产生的检测试剂盒的应用。
[0009]所述的肿瘤耐药性检测包括以CYLD及IFFO1以及下游靶基因ABCB1、Bcl

XL、Bax和Bcl3为靶点的检测试剂或检测试剂盒。
[0010]所述的耐卵巢癌的耐药药物为顺铂、卡铂等铂类药物。
[0011]所述的CYLD引物序列为
[0012]F:5
’‑
TTGGCAACTGGGATGGAAGA
‑3’
[0013]R:5
’‑
TCCTTTCCTGCGTCACACTC
‑3’
[0014]所述的IFFO1序列为
[0015]F:5
’‑
GATGCGGTTCACAATGCCTC
‑3’
[0016]R:5
’‑
TGCTTGAGACAGTGACACCA
‑3’
[0017]上述CYLD及IFFO1序列应用包括制备成用于检测卵巢癌病人耐药的检测试剂以及检测试剂盒。
[0018]本专利技术的应用具有如下优点及有益效果:
[0019]1.在卵巢癌中,癌细胞通过下调CYLD,进而抑制促凋亡基因Bax,促进凋亡蛋白Bcl

XL,Bcl3等的表达,并有效的促进药物转运蛋白的表达增加,进而促进卵巢癌细胞的药物耐药性增加。这些结果都预示着,CYLD可以作为一种卵巢癌的肿瘤标志基因,来对胶质瘤的治疗及预后具有指导意义。
[0020]2.IFFO1同样可以作为一个卵巢癌耐药检测指标。我们的研究展示了在卵巢癌耐药细胞系中IFFO1的表达量下调,而在卵巢癌细胞系中下调IFFO1的表达可以降低铂类药物的敏感性,这将为卵巢癌患者的预后及治疗提供新的分子靶标。
[0021]本专利技术研究者利用qRT

PCR,CCK

8,流式细胞术等在敏感及耐药的卵巢癌细胞株水平检测CYLD及IFFO1的表达水平及其对细胞凋亡,及药物敏感性的影响。再应用原位杂交技术及免疫组化方法从正常卵巢、卵巢交界性肿瘤及卵巢癌患者的卵巢样本本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.利用CYLD和IFFO以及化学合成的类似物用于恶性肿瘤发生以及靶向治疗耐药性综合检测试剂盒以及综合治疗药物的开发。2.利用CYLD和ABCB1以及化学合成的类似物用于恶性肿瘤发生以及靶向治疗耐药性综合检测试剂盒以及综合治疗药物的开发。3.利用CYLD和Bcl

XL以及化学合成的类似物用于恶性肿瘤发生以及靶向治疗耐药性综合检测试剂盒以及综合治疗药物的开发。4.利用CYLD和Bcl3以及化学合成的类似物用于恶性肿瘤发生以及靶向治疗耐药性综合检测试剂盒以及综合治疗药物的开发。5.利用IFFO和ABCB1以及化学合成的类似物用于恶性肿瘤发生以及靶向治疗耐药性综合检测试剂盒以及综合治疗药物的开发。6.利用IFFO和Bcl

XL以及化学合成的类似物用于恶性肿瘤发生以及靶向治疗耐药性综合检测试剂盒以及综合治疗药物的开发。7.利用IFFO和Bcl3以及化学合成的类似物用于恶性肿瘤发生以及靶向治疗耐药性综合检测试剂盒以及综合治疗药物的开发。8.利用CYLD、IFFO和ABCB1以及化学合成的类似物用于恶性肿瘤发生以及靶向治疗耐药性综合检测试剂盒以及综合治疗药物的开发。9.利用CYLD、IFFO和Bcl

XL以及化学合成的类似物用于恶性肿瘤发生以及靶向治疗耐药性综合检测试剂盒以及综合治...

【专利技术属性】
技术研发人员:张烨王琳汪伟江秉华贾小玉
申请(专利权)人:郑州大学
类型:发明
国别省市:

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