瓜蒌皮注射液核磁共振氢谱中独立信号峰的获取方法、定量分析方法、指纹图谱、应用技术

本发明专利技术公开了一种瓜蒌皮注射液核磁共振氢谱中独立信号峰的获取方法、定量分析方法、指纹图谱、应用。该方法的关键在于将瓜蒌皮注射液1H

【技术实现步骤摘要】
瓜蒌皮注射液核磁共振氢谱中独立信号峰的获取方法、定量分析方法、指纹图谱、应用


[0001]本专利技术涉及一种瓜蒌皮注射液核磁共振氢谱中独立信号峰的获取方法、定量分析方法、指纹图谱、应用。

技术介绍

[0002]瓜蒌皮注射液是以瓜蒌皮为原料，经水提醇沉，再经过离子交换树脂洗脱而制成的灭菌水溶液，具有扩张冠状动脉、保护心肌缺血的作用，临床上被广泛用于治疗冠心病和心绞痛。由于注射剂中的成分较为复杂，其质量评价和控制水平越发受人们重视。
[0003]申请公开号为CN100491998C的专利文献中公开了一种瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相色谱指纹图谱的测试方法，并构建瓜蒌皮注射液的液相指纹图谱作为产品质量控制的方法，但是该方法前处理复杂，需要对样品进行两次柱前衍生化，液相实验需要较长时间，洗脱程序用时长达60分钟，且该指纹图谱方法所关注的全是氨基酸类成分并没有考虑其他成分特别是潜在的起效成分。因此构建一种快速的可同时定量检测瓜蒌皮注射液的各种化学成分的方法对提升瓜蒌皮注射液质量控制有重大意义。
[0004]1H
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NMR技术同时具备定量和定性的能力，具有前处理简单、快速、重现性好等优点。可以一次快速采集瓜蒌皮注射液中全部的成分信息用以定性和定量分析。相比于传统检测手段针对不同类别的物质需要用到不同方法，1H
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NMR方法大大缩短了分析的时间，简化了操作，实现一种方法替代多种方法，单次分析替代多次分析。

技术实现思路

[0005]本专利技术解决的技术问题是为了克服现有技术中定量检测瓜蒌皮注射液成分的方法前处理复杂，检测时间长，仅可对单一类成分定量检测的缺陷，而提供了一种瓜蒌皮注射液核磁共振氢谱中独立信号峰的获取方法、定量分析方法、指纹图谱、应用。本专利技术中的定量分析方法可快速且可同时定量瓜蒌皮注射液32种化学成分，该方法所得到的指纹图谱可应用在瓜蒌皮注射液的质量评价与控制中。
[0006]瓜蒌皮注射液成分复杂，因成分的H原子所处的化学环境相似，所以其1H
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NMR谱图某些成分的信号峰存在严重的重叠问题，从而导致难以准确定量。本专利技术中，为解决此缺陷，经过大量的试验研究，专利技术人创造性地发现在信号峰重叠严重的光谱片段，先采用icoshift方法将谱图进行对齐然后通过MCR
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ALS算法进行解卷积，最终通过浓度比例经过计算可得到待测成分的含量。此方法对定量检测瓜蒌皮注射液中化学成分的含量具有重要意义。此外，在定量检测瓜蒌皮注射液成分的过程中，专利技术人发现了5种未在瓜蒌皮注射液中报道过的成分，分别为：甘氨酸、鸟氨酸、蛋氨酸亚砜、胍基乙酸、葡萄糖。
[0007]本专利技术通过以下技术方案解决上述问题。
[0008]本专利技术提供了一种瓜蒌皮注射液1H
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NMR图谱中独立信号峰的获取方法，其包括以下步骤：
[0009]将所述瓜蒌皮注射液1H
‑
NMR图谱中信号重叠处的信号进行信号处理获得独立信号峰，即可；
[0010]所述信号重叠处中的信号重叠是指在同一光谱片段处，有两个或两个以上的成分具有信号峰，且通过线性拟合后无法将各个成分的信号峰分开；
[0011]所述信号重叠处所对应的成分包括精氨酸、丝氨酸和D
‑
哌啶酸；
[0012]所述独立信号峰采用下述方法获得：
[0013]1)采用icoshift不等间距分段对齐方法对所述信号重叠处的光谱片段进行对齐；
[0014]当所述信号重叠处的信号所对应的成分为精氨酸时，选择3.2131
‑
3.2825ppm光谱作为对齐片段，分为三段后进行对齐，第一分段为3.2131
‑
3.2225ppm，第二分段为3.2225
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3.2650ppm，第三分段为3.2650
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3.2825ppm；
[0015]当所述信号重叠处的信号所对应的成分为丝氨酸时，选择3.8099
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3.8759ppm光谱作为对齐片段，分为两段后进行对齐，第一分段为3.8099
‑
3.8440ppm，第二分段为3.8440
‑
3.8759ppm；
[0016]当所述信号重叠处的信号所对应的成分为D
‑
哌啶酸时，选择2.9533
‑
3.0041ppm光谱作为对齐片段，分为两段后进行对齐，第一分段为2.9533
‑
2.9808ppm，第二分段为2.9808
‑
3.0041ppm；
[0017]2)采用MCR
‑
ALS方法进行解卷积分离出独立信号峰。
[0018]本专利技术中，所述瓜蒌皮注射液1H
‑
NMR图谱可采用本领域常规的方法获得，例如采用下述方法获得：
[0019](1)供试样品溶液的制备：将所述瓜蒌皮注射液与含TSP的氘代水混合，配制供试样品溶液；
[0020](2)1H
‑
NMR图谱的采集：将步骤(1)中所述的供试样品溶液置于核磁共振仪中进行测试，利用预饱和水峰压制脉冲序列对残余水峰进行压制，得到供试样品溶液的1H
‑
NMR图谱，即可。
[0021]步骤(1)中，所述瓜蒌皮注射液与所述含TSP(3
‑
(三甲基甲硅烷基)丙酸
‑
d4钠盐)的氘代水的体积比优选为(8
‑
10):1，例如9:1。
[0022]步骤(1)中，优选地，所述供试样品溶液的总体积为600～1000μL。
[0023]步骤(1)中，在所述含TSP的氘代水中，所述TSP(内标)的浓度优选地为0.45
‑
0.55mg/mL，例如0.506mg/mL。
[0024]步骤(2)中，所述1H
‑
NMR图谱的采集条件可为：探头温度为288
‑
300K；脉冲序列NOESYGPPR1D；谱宽为9.9974
‑
12.9836ppm；中心频率为4.780
‑
4.820ppm；弛豫延迟时间为13.0
‑
25.0s；采集时间为2.27s；混合时间为50
‑
100ms；采集次数为32或64次；增益值为32
‑
57；检测数据点为32K或64K。
[0025]步骤(2)中，所述1H
‑
NMR图谱的采集条件还可为：探头温度为295
‑
300K；脉冲序列NOESYGPPR1D；以溶剂90％H2O+10％D2O锁场；谱宽为11.4912
‑
12.4967ppm；中心频率为4.790
‑
4.805ppm；弛豫延迟时间为14.5
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15.5s；采集时间为2.27s；混合时间为50
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种瓜蒌皮注射液1H
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NMR图谱中独立信号峰的获取方法，其特征在于，其包括以下步骤：将所述瓜蒌皮注射液1H
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NMR图谱中信号重叠处的信号进行信号处理获得独立信号峰，即可；所述信号重叠处中的信号重叠是指在同一光谱片段处，有两个或两个以上的成分具有信号峰，且通过线性拟合后无法将各个成分的信号峰分开；所述信号重叠处所对应的成分包括精氨酸、丝氨酸和D
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哌啶酸；所述独立信号峰采用下述方法获得：1)采用icoshift不等间距分段对齐方法对所述信号重叠处的光谱片段进行对齐；当所述信号重叠处的信号所对应的成分为精氨酸时，选择3.2131
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3.2825ppm光谱作为对齐片段，分为三段后进行对齐，第一分段为3.2131
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3.2225ppm，第二分段为3.2225
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3.2650ppm，第三分段为3.2650
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3.2825ppm；当所述信号重叠处的信号所对应的成分为丝氨酸时，选择3.8099
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3.8759ppm光谱作为对齐片段，分为两段后进行对齐，第一分段为3.8099
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3.8440ppm，第二分段为3.8440
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3.8759ppm；当所述信号重叠处的信号所对应的成分为D
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哌啶酸时，选择2.9533
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3.0041ppm光谱作为对齐片段，分为两段后进行对齐，第一分段为2.9533
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2.9808ppm，第二分段为2.9808
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3.0041ppm；2)采用MCR
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ALS方法进行解卷积分离出独立信号峰。2.如权利要求1所述的瓜蒌皮注射液1H
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NMR图谱中独立信号峰的获取方法，其特征在于，所述瓜蒌皮注射液的1H
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NMR图谱采用下述方法获得：(1)供试样品溶液的制备：将所述瓜蒌皮注射液与含TSP的氘代水混合配制供试样品溶液；(2)1H
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NMR图谱的采集：将步骤(1)中所述的供试样品溶液置于核磁共振仪中进行测试，利用预饱和水峰压制脉冲序列对残余水峰进行压制，得到供试样品溶液的1H
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NMR图谱，即可。3.如权利要求2所述的瓜蒌皮注射液1H
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NMR图谱中独立信号峰的获取方法，其特征在于，步骤(1)中，所述瓜蒌皮注射液与所述含TSP(3
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(三甲基甲硅烷基)丙酸
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d4钠盐)的氘代水的体积比为(8
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10):1，例如9:1；和/或，步骤(1)中，所述供试样品溶液的总体积为600～1000μL；和/或，步骤(1)中，在所述含TSP的氘代水中，所述TSP(内标)的浓度为0.45
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0.55mg/mL，例如0.506mg/mL；和/或，步骤(2)中，所述1H
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NMR图谱的采集条件为：探头温度为288
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300K；脉冲序列NOESYGPPR1D；谱宽为9.9974
‑
12.9836ppm；中心频率为4.780
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4.820ppm；弛豫延迟时间为13.0
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25.0s；采集时间为2.27s；混合时间为50
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100ms；采集次数为32或64次；增益值为32
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57；检测数据点为32K或64K；优选地，所述1H
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NMR图谱的采集条件为：探头温度为295
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300K；脉冲序列NOESYGPPR1D；以溶剂90％H2O+10％D2O锁场；谱宽为11.4912
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12.4967ppm；中心频率为4.790
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4.805ppm；弛豫延迟时间为14.5
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15.5s；采集时间为2.27...

【专利技术属性】
技术研发人员：瞿海斌，杨嘉誉，李文竹，丁金国，
申请(专利权)人：上海上药第一生化药业有限公司，
类型：发明
国别省市：