一株用于防控黄曲霉毒素B1污染的解淀粉芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株用于防控黄曲霉毒素B1污染的解淀粉芽孢杆菌及其应用。本发明专利技术提供的芽孢杆菌WF2020，已于2022年1月5日保藏于广东省微生物保藏中心，保藏号GDMCC NO:62190。本发明专利技术研究表明，WF2020菌株能大幅度抑制黄曲霉的生长，使其干重减少52.59％；同时，WF2020菌株可完全抑制黄曲霉毒素B1的合成；另外，WF2020菌株可高效的将黄曲霉毒素B1降解成无毒的物质，降解率高达95.47％，且该菌株的发酵液或胞内物也能降解黄曲霉毒素B1，同时发酵液还具有高温耐受性。并且，WF2020菌株在使用过程中无污染、无公害，作为理想的防控农产品黄曲霉毒素B1污染的微生物。曲霉毒素B1污染的微生物。曲霉毒素B1污染的微生物。

【技术实现步骤摘要】
一株用于防控黄曲霉毒素B1污染的解淀粉芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
更具体地，涉及一株用于防控黄曲霉毒素B1污染的解淀粉芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]随着近几百年来生物技术的发展，人们利用微生物生产食品、药品的例子不胜枚举。然而，各类微生物也造成了巨大的的经济损失，甚至安全问题。真菌毒素污染是其中一个全世界普遍存在的生物危害，全球四分之一的粮油受到真菌毒素污染，而在我国每年有4000多万吨粮油受到真菌毒素污染，造成680亿的经济损失。黄曲霉毒素B1由黄曲霉、寄生曲霉等真菌产生，在所有霉菌毒素中毒性最强，分布最广、危害最大，能够使人出现急性肝炎、出血性坏死、干细胞脂肪变性、肝胆增生、肝癌、食道癌等。因此，寻找有效防控黄曲霉毒素B1污染的方法刻不容缓。目前，防控黄曲霉毒素B1污染的方法有物理化学方法，如高温、辐照、酸碱处理、强氧化还原剂等，近几年还有采用微生物防控法对黄曲霉毒素B1进行防控；与物理化学方法相比，微生物法防控黄曲霉毒素B1不仅安全、对环境污染小、成本低，而且能较大程度地保持农产品本身的营养价值和风味，具有很好的应用前景。
[0003]而现有技术中已报道的微生物法进行防控，主要采用微生物菌株对黄曲霉毒素B1进行降解，但能够应用于抑制黄曲霉生长及黄曲霉毒素B1合成、降解黄曲霉毒素B1且具有高温耐受性的菌株还是太少，目前也仅有土曲霉菌(Aspergillus terrus)、枝顶孢属菌(Acremonium sp.)、大肠杆菌(Escherichia coli)和芽孢杆菌属(Bacillus sp.)的菌株等；如现有技术公开了一株降解花生粕中黄曲霉毒素B1的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，所述解淀粉芽孢杆菌能抑制黄曲霉生长、降解黄曲霉毒素B1，其对低黄曲霉毒素B1含量(12.32μg/kg)的花生粕样品有88.24％的脱毒率，而对较高黄曲霉毒素B1含量(145.17μg/kg)的花生粕样品仅有81.39％的脱毒率，而且其脱毒后的花生粕中黄曲霉毒素B1含量也仅能达到安全的饲用级别，因此限制了其在防控农产品黄曲霉毒素B1污染方面的应用。为了扩充能防控黄曲霉毒素B1的微生物菌种资源库，充实微生物法防控黄曲霉毒素B1，有必要筛选出更多、更高效、作用更加广泛的能防控黄曲霉毒素B1的微生物菌株，为防控黄曲霉毒素B1污染提供新的可治理的高效菌株和方法，充实了微生物菌种资源库。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服上述问题的缺陷和不足，提供一株用于防控黄曲霉毒素B1污染的解淀粉芽孢杆菌及其应用，能抑制黄曲霉生长、完全抑制黄曲霉毒素B1合成，且能高效率地将黄曲霉毒素B1降解为无毒物质。
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种用于防控黄曲霉毒素B1污染的芽孢杆菌WF2020菌株。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供所述WF2020菌株的应用。
[0007]本专利技术的第三个目的是提供一种降解黄曲霉毒素B1、抑制黄曲霉生长和/或抑制曲霉毒素B1合成的方法。
[0008]本专利技术的第四个目的是提供一种用于抑制黄曲霉生长、抑制曲霉毒素B1合成或降解黄曲霉毒素B1的制剂。
[0009]本专利技术的第五个目的是提供所述制剂的应用。
[0010]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0011]一种用于防控黄曲霉毒素B1污染的芽孢杆菌(Bacillus sp.)WF2020菌株，该菌株于2022年1月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为：GDMCC NO:62190。该菌株从传统泡菜中筛选分离纯化而得，经形态学特征和16S rRNA基因序列分析鉴定与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)相似度为99.86％，该WF2020菌株的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，全长约1500bp。WF2020菌株的菌落形态为圆形，呈白色，表面无光泽，质地粘稠。细胞呈杆状，有芽孢；革兰氏阳性。
[0012]本专利技术通过WF2020菌株抑制黄曲霉的生长、与黄曲霉毒素B1合成相关基因转录水平检测、降解黄曲霉毒素B1以及对黄曲霉毒素B1降解产物的毒性的验证表明，WF2020菌株不仅能使黄曲霉生长量下降52.59％，还使黄曲霉毒素B1合成相关基因aflA、aflH、aflJ、aflL、aflR、aflS和aflT基因的转录水平显著下降，这表明解淀粉芽孢杆菌WF2020同时还能够抑制黄曲霉毒素B1合成；WF2020菌株对黄曲霉毒素B1的降解率达到84.28％～95.47％(1～10μg/mL)，且WF2020菌株在降解黄曲霉毒素B1过程中主要作用组分为发酵上清液(即：胞外提取物)；最后表明，WF2020菌株对黄曲霉毒素B1的降解产物致突变能力大幅度下降，具有较高安全性，可高效的将黄曲霉毒素B1降解成无毒的物质。
[0013]因此，所述芽孢杆菌WF2020菌株在降解黄曲霉毒素B1、抑制黄曲霉生长或抑制曲霉毒素B1合成中的应用均在本专利技术保护的范围。
[0014]本专利技术提供一种降解黄曲霉毒素B1、抑制黄曲霉生长和/或抑制曲霉毒素B1合成的方法，采用所述WF2020菌株进行发酵培养，采用发酵后的发酵培养液或从发酵培养液中分离出的代谢物或酶系，对黄曲霉毒素B1进行降解或对黄曲霉进行生长抑制、抑制曲霉毒素B1合成；或者通过将菌体超声破碎离心所得酶系或者代谢产物，对黄曲霉毒素B1进行降解或对黄曲霉进行生长抑制、抑制曲霉毒素B1合成。
[0015]优选地，所述发酵培养条件为：pH 4.0～9.0，25～55℃，150～200rpm，培养12～96h。
[0016]优选地，所述发酵培养液为不含菌体的上清液。
[0017]本专利技术提供所述芽孢杆菌WF2020菌株在制备用于抑制黄曲霉生长、抑制曲霉毒素B1合成或降解黄曲霉毒素B1的制剂中的应用。
[0018]本专利技术提供一种用于抑制黄曲霉生长、抑制曲霉毒素B1合成或降解黄曲霉毒素B1的制剂，其特征在于，含有权利要求1所述芽孢杆菌WF2020菌株、菌液、发酵液和/或其代谢产物。
[0019]优选地，所述发酵液菌液为发酵上清液。
[0020]优选地，所述菌液和/或发酵液OD
600
＝0.1～1.0。
[0021]本专利技术还提供所述所述制剂在抑制黄曲霉生长、抑制曲霉毒素B1合成和/或降解黄曲霉毒素B1中的应用。
[0022]本专利技术具有以下有益效果：
[0023]本专利技术通过WF2020菌株抑制黄曲霉的生长、与黄曲霉毒素B1合成相关基因转录水平检测、降解黄曲霉毒素B1以及对黄曲霉毒素B1降解产物的毒性的验证表明，WF2020菌株不仅能使黄曲霉生长量下降52.59％，还使黄曲霉毒素B1合成相关基因aflA、aflH、aflJ、aflL、aflR、aflS和aflT基因的转录水平显著下降，这表明解淀粉芽孢杆菌WF2020同时还能够抑制黄曲霉本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于防控黄曲霉毒素B1污染的芽孢杆菌(Bacillus sp.)WF2020菌株，其特征在于，该菌株于2022年1月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为：GDMCC NO:62190。2.权利要求1所述芽孢杆菌WF2020菌株在降解黄曲霉毒素B1、抑制黄曲霉生长和/或抑制曲霉毒素B1合成中的应用。3.一种降解黄曲霉毒素B1、抑制黄曲霉生长和/或抑制曲霉毒素B1合成的方法，采用权利要求1所述WF2020菌株进行发酵培养，采用发酵后的发酵培养液或从发酵培养液中分离出的代谢物或酶系，对黄曲霉毒素B1进行降解或对黄曲霉进行生长抑制、抑制曲霉毒素B1合成；或者通过将菌体超声破碎离心所得酶系或者代谢产物，对黄曲霉毒素B1进行降解或对黄曲霉进行生长抑制、抑制曲霉毒素B1合成。4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述发酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洁，陈国浚，房倩安，方祥，廖振林，钟青萍，王丽，徐纯伟，梁智博，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：